第三章-植物組織與細(xì)胞培養(yǎng)

第三章植物組織與細(xì)胞培養(yǎng)第一節(jié)植物組織與細(xì)胞培養(yǎng)原理第二節(jié)植物離體無(wú)性繁殖第三節(jié)愈傷組織與器官培養(yǎng)第四節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)一、植物細(xì)胞全能性及分化（一）植物細(xì)胞全能性

植物體的每個(gè)活細(xì)胞都具有該植物的全套遺傳信息，與合子一樣，具備發(fā)育成完整植株的潛在能力。其定義有3個(gè)方面的含義：第一節(jié)植物組織與細(xì)胞培養(yǎng)原理1、植物細(xì)胞無(wú)論是體細(xì)胞還是生殖細(xì)胞均具有該物種的全套遺傳信息；2、只有在適宜的條件下，植物細(xì)胞才具有發(fā)育成完整植株的能力；3、植物每個(gè)細(xì)胞均具有發(fā)育成完整植株的能力。（二）植物離體細(xì)胞的脫分化與再分化◆細(xì)胞分化由于細(xì)胞的分工而導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的改變，或發(fā)育方式改變的過(guò)程。

◆細(xì)胞脫分化一個(gè)成熟細(xì)胞回復(fù)到分生狀態(tài)或胚性細(xì)胞狀態(tài)的現(xiàn)象。即失去已分化細(xì)胞的典型特征?！艏?xì)胞再分化脫分化的分生細(xì)胞重新恢復(fù)細(xì)胞分化能力，沿著正常的發(fā)育途徑，形成具有特定結(jié)構(gòu)和功能的細(xì)胞。

細(xì)胞再分化的兩種途徑

大多數(shù)培養(yǎng)物是從器官發(fā)生的途徑再生植株的。胚胎發(fā)生直接分化器官再形成植株愈傷組織的形態(tài)發(fā)生方式主要有不定芽方式和胚狀體方式兩種。不定芽方式是在某些條件下，愈傷組織中的分生細(xì)胞發(fā)生分化，形成不同的器官原基，再逐漸形成芽和根。胚狀體方式是由愈傷組織細(xì)胞誘導(dǎo)分化出具有胚芽、胚根、胚軸的胚狀結(jié)構(gòu)，進(jìn)而長(zhǎng)成完整植株。這種由愈傷組織中的薄壁細(xì)胞不經(jīng)過(guò)有性生殖過(guò)程，直接產(chǎn)生類似于胚的結(jié)構(gòu)，叫做胚狀體。

例如：

1958年，美國(guó)Stewarol用野生胡蘿卜游離韌皮部細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，使已高度分化的細(xì)胞重新分裂，回復(fù)至胚性細(xì)胞狀態(tài)。胚性細(xì)胞多細(xì)胞團(tuán)形態(tài)建成完整植株分裂分化生長(zhǎng)成熟細(xì)胞分生細(xì)胞多細(xì)胞團(tuán)形態(tài)建成完整植株脫分化分裂再分化生長(zhǎng)高等植物細(xì)胞分化、脫分化與再分化過(guò)程外植體愈傷組織體細(xì)胞胚發(fā)育為植株器官分化具根莖的兩極器官植株單極器官先莖后根植株先根后莖植株脫分化再分化外植體脫分化與再分化形成完整植株的途徑二、植物體細(xì)胞胚胎發(fā)生◆胚狀體

在植物組織培養(yǎng)中起源于一個(gè)非合子細(xì)胞，經(jīng)胚胎發(fā)育所形成的胚狀結(jié)構(gòu)，又稱體細(xì)胞胚、不定胚、無(wú)性胚。1、是離體培養(yǎng)的產(chǎn)物2、起源于非合子細(xì)胞3、發(fā)育過(guò)程與合子胚相似，也經(jīng)歷球形期、心形期、魚(yú)雷期和子葉期階段（一）體細(xì)胞胚胎發(fā)生特點(diǎn)

在植物組織培養(yǎng)中，誘導(dǎo)體細(xì)胞胚胎發(fā)生與誘導(dǎo)器官發(fā)生相比具有顯著的特點(diǎn)：1、具雙極性2、生理隔離3、遺傳性相對(duì)穩(wěn)定4、重演受精卵形態(tài)發(fā)生的特性（二）體細(xì)胞胚胎發(fā)生途徑

胚狀體可從離體培養(yǎng)的各種外植體上直接或間接地發(fā)生，大致分為五種：直接從器官外植體上發(fā)生愈傷組織發(fā)生懸浮培養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生單倍體細(xì)胞發(fā)生原生質(zhì)體發(fā)生（三）體細(xì)胞胚胎起源

大多數(shù)體細(xì)胞胚起源于單細(xì)胞體細(xì)胞胚發(fā)生的實(shí)質(zhì)是細(xì)胞分化（四）體細(xì)胞胚胎的生理隔離

生理隔離是體細(xì)胞胚發(fā)生的先決條件（五）體細(xì)胞胚胎的遺傳穩(wěn)定性和變異性通過(guò)體細(xì)胞胚發(fā)生途徑形成再生植株是相對(duì)穩(wěn)定的，其發(fā)生過(guò)程中變異是廣泛存在的。

體細(xì)胞胚發(fā)生潛力的實(shí)現(xiàn)和通過(guò)這一途徑最終繁育出的無(wú)性系，保持細(xì)胞染色體組的相對(duì)完整性是重要的基礎(chǔ)。三、影響植物細(xì)胞形態(tài)發(fā)生的因素

影響植物離體培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)發(fā)生的因素有內(nèi)因和外因。外因是指培養(yǎng)植物細(xì)胞的培養(yǎng)基和培養(yǎng)環(huán)境條件。內(nèi)因是指植物細(xì)胞的遺傳性和生理狀態(tài)。1、培養(yǎng)基◆生長(zhǎng)調(diào)節(jié)類物質(zhì)◆營(yíng)養(yǎng)成分◆滲透壓◆pH值◆固態(tài)或液態(tài)2、環(huán)境條件◆光對(duì)細(xì)胞形態(tài)發(fā)生具有誘導(dǎo)反應(yīng)◆溫度有利于器官發(fā)生3、器官、組織類型

◆不同種植物的器官、組織產(chǎn)生的愈傷組織的器官分化（能力）明顯不同，差異顯著

◆材料的基因型決定4、個(gè)體發(fā)育年齡

◆幼嫩部位易誘導(dǎo)形成愈傷組織，也易誘導(dǎo)器官分化

◆愈傷組織繼代次數(shù)越多，器官分化能力愈低一、植物離體無(wú)性繁殖的概念和意義（一）植物離體無(wú)性繁殖

◆簡(jiǎn)稱離體繁殖、微型繁殖或快速無(wú)性繁殖

◆指利用組織培養(yǎng)方法進(jìn)行植物離體培養(yǎng)，在短期內(nèi)獲得大量遺傳性狀一致個(gè)體的方法。第二節(jié)植物離體無(wú)性繁殖（二）植物離體繁殖的意義1、繁殖速度快，經(jīng)濟(jì)效益高2、占用空間小，不受季節(jié)限制，便于工廠化育苗3、繁殖各種珍稀、瀕危苗木和突變體，為育種服務(wù)二、植物離體無(wú)性繁殖中的器官發(fā)生方式

有五種方式：a、繁殖率高b、能保持遺傳穩(wěn)定性c、縮短繁殖周期a、繁殖率高，但速度慢b、遺傳性穩(wěn)定特點(diǎn)特點(diǎn)1、不定芽型2、器官型3、器官發(fā)生型a、繁殖速度快b、遺傳性不穩(wěn)定，易產(chǎn)生變異c、愈傷組織是遺傳轉(zhuǎn)化、細(xì)胞培養(yǎng)或原生質(zhì)體培養(yǎng)的良好材料特點(diǎn)4、胚狀體發(fā)生型a、數(shù)量多、速度快、繁殖系數(shù)高；b、遺傳性穩(wěn)定。特點(diǎn)5、原球莖型

指蘭屬特有的器官發(fā)生方式，即外植體經(jīng)培養(yǎng)產(chǎn)生原球莖，再直接長(zhǎng)成植株。國(guó)蘭原球莖的增殖三、離體無(wú)性繁殖的方法和影響因素（一）離體無(wú)性繁殖方法1、母株制備

母株是指用于發(fā)生離體培養(yǎng)無(wú)性系的植物材料。制備無(wú)菌母株技術(shù)關(guān)鍵：

a、材料滅菌

b、培養(yǎng)基篩選2、增殖

◆繁殖體的增殖階段

◆無(wú)菌母株在無(wú)菌條件下離體繁殖擴(kuò)增

◆外源激素積累的問(wèn)題3、植株再生

◆繼代增殖小芽轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)根分化

◆形成具根、莖、葉的完整小植株4、煉苗和移植

◆煉苗馴化過(guò)程逐步過(guò)渡

◆無(wú)菌狀態(tài)轉(zhuǎn)為自然狀態(tài)

◆恒定狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)槎嘧儬顟B(tài)煉苗與移栽（二）影響因素1、培養(yǎng)基選擇適宜的培養(yǎng)基、激素及其他添加物，對(duì)植物離體無(wú)性繁殖取得成功十分重要。2、培養(yǎng)條件不同植物離體無(wú)性繁殖的最適溫度不同，大多為25±2℃，一般不低于15℃，不高于35℃。如煙草芽形成18℃最佳。培養(yǎng)容器內(nèi)的濕度幾乎為100%，一般環(huán)境要求保持在70%—80%之間。3、外植體

◆外植體材料來(lái)源豐富程度◆成苗是否容易◆在培養(yǎng)中的遺傳穩(wěn)定性◆試管苗是否整齊一致1、污染A、來(lái)源

◆材料表面消毒不徹底◆無(wú)菌操作中外界環(huán)境進(jìn)入培養(yǎng)容器造成B、危害

◆初代培養(yǎng)失敗、增殖速度慢、生長(zhǎng)速度慢、玻璃化加劇◆成活率低、病毒和病菌的擴(kuò)散、培養(yǎng)物的遺傳變異四、快繁中常見(jiàn)的問(wèn)題C、種類

a、細(xì)菌性污染

◆培養(yǎng)基某一位置或培養(yǎng)材料周圍出現(xiàn)黏液狀物或渾濁的水漬狀痕，有時(shí)呈發(fā)酵狀泡沫。接種后1~2天可見(jiàn)?！舨牧?、培養(yǎng)基滅菌不徹底◆操作不當(dāng)白色念珠菌污染：（倒置）b、真菌性污染◆主要是霉菌污染◆培養(yǎng)基污染部位發(fā)霉，接種后3~5天或更長(zhǎng)時(shí)間可見(jiàn)◆顏色有黝黑、白、黃等原因：◆周圍環(huán)境和空氣污染造成◆接種過(guò)程中，操作不慎造成絲狀真菌污染D、防止◆選擇植物材料：品種、部位、大小、時(shí)期◆嚴(yán)格消毒滅菌◆合理安排繁殖程序◆規(guī)范操作，控制環(huán)境條件2、褐變

A、原因◆酚類化合物醌類物質(zhì)+水◆生理狀態(tài)

◆培養(yǎng)基成分◆培養(yǎng)條件不當(dāng)

多酚氧化酶O2枝條褐變B、影響褐變的因素◆基因型：木本植物比草本植物更易引起褐變◆外植體的生理狀態(tài)◆培養(yǎng)基◆溫度和光照：光能促進(jìn)植物組織中酚的氧化◆外植體大?。翰牧咸∫缀肿儭敉庵搀w的受傷程度◆材料轉(zhuǎn)移時(shí)間◆滅菌的化學(xué)藥品C、克服褐變的措施

◆選擇適宜的外植體◆適宜的培養(yǎng)條件◆連續(xù)轉(zhuǎn)移◆加入抗氧劑3、玻璃化現(xiàn)象◆試管苗的玻璃化◆試管苗的莖、葉變成透明水浸狀◆生長(zhǎng)畸形◆增殖系數(shù)明顯下降◆難以誘導(dǎo)生根，其根系質(zhì)量極差◆移栽成活率極低a、使用透氣性好的封口材料b、選擇合適的激素種類和濃度c、采用固體培養(yǎng)基，適當(dāng)增加瓊脂含量，降低水勢(shì)d、高溫季節(jié)時(shí)要有降溫措施e、改變供氮形態(tài)f、適當(dāng)增加培養(yǎng)基中的間苯三酚等抑制玻璃化苗的產(chǎn)生g、適當(dāng)延長(zhǎng)光照培養(yǎng)時(shí)間，提高光照強(qiáng)度h、適當(dāng)提高培養(yǎng)基中無(wú)機(jī)鹽含量預(yù)防的措施:五、試管苗的移栽成活

◆生長(zhǎng)細(xì)弱◆莖、葉表面角質(zhì)層不發(fā)達(dá)◆莖、葉呈綠色◆葉綠體的光合作用較差◆葉片氣孔數(shù)目少，活性差

◆根的吸收功能弱◆對(duì)逆境的適應(yīng)和抵抗能力差試管苗的特點(diǎn)：草莓試管苗提高試管苗移栽成活率的措施：◆提高試管苗生根質(zhì)量◆加強(qiáng)移栽前煉苗◆保證組培苗移栽基質(zhì)質(zhì)量◆作好移栽前根系處理◆濕度控制◆溫度控制◆光照控制注重：煉苗過(guò)程、移栽后的管理第三節(jié)愈傷組織與器官培養(yǎng)一、愈傷組織培養(yǎng)二、器官培養(yǎng)一、愈傷組織培養(yǎng)（一）愈傷組織培養(yǎng)概念

一般情況下，植物組織均能誘發(fā)形成愈傷組織。愈傷組織細(xì)胞的分化大致經(jīng)歷三個(gè)時(shí)期，即：誘導(dǎo)期、分裂期和分化期。

是指將母株上的各個(gè)部分切下形成外植體接種到無(wú)菌培養(yǎng)基上，進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)、生長(zhǎng)和發(fā)育的一門技術(shù)。（二）愈傷組織的形態(tài)發(fā)生1、不定芽和根的發(fā)生是愈傷組織培養(yǎng)物或細(xì)胞培養(yǎng)物培養(yǎng)中常見(jiàn)的器官發(fā)生方式，分三個(gè)不同生長(zhǎng)階段A、細(xì)胞和離體外植體脫分化形成愈傷組織B、愈傷組織中形成一些分生細(xì)胞，形成瘤狀結(jié)構(gòu)C、器官原基的形成瘤狀結(jié)構(gòu)的出現(xiàn)使愈傷組織逐漸形成具有維管組織，呈分散的節(jié)狀結(jié)構(gòu)形成，出現(xiàn)各類組織細(xì)胞。細(xì)胞分裂素對(duì)促進(jìn)維管化組織有重要作用。細(xì)胞內(nèi)微管分布愈傷組織的器官發(fā)生順序a、無(wú)芽的根或無(wú)根的芽b、先芽后根c、先根后芽d、同時(shí)長(zhǎng)根和芽2、體細(xì)胞胚的發(fā)生a、具有兩極性b、胚狀體的維管組織與外植體的維管組織無(wú)解剖結(jié)構(gòu)上的聯(lián)系，而不定芽或不定根往往與愈傷組織的維管組織相聯(lián)系c、胚狀體的維管組織的分布是獨(dú)立的“Y”形，而不定芽的維管組織無(wú)此現(xiàn)象發(fā)生的三個(gè)特征（三）愈傷組織培養(yǎng)以煙草葉片愈傷組織誘導(dǎo)為例A、葉片表面消毒B、在無(wú)菌條件下切去主脈及大的側(cè)脈成

5×5mm2

的小塊C、培養(yǎng)在MS瓊脂培養(yǎng)基+2mg/LNAA+0.5mg/LBA上D、28℃恒溫室內(nèi)，每天光照10小時(shí)E、培養(yǎng)三天或更多天，葉組織的切口邊緣膨大F、培養(yǎng)6-10天后，葉色漸轉(zhuǎn)淡綠，整個(gè)葉組織明顯增大，在切口處形成少量愈傷組織G、形成的愈傷組織接種到誘導(dǎo)芽形成的培養(yǎng)基中H、28℃恒溫室內(nèi)，每天光照10小時(shí)I、兩周后，可觀察到愈傷組織周圍形成綠芽J、再培養(yǎng)可長(zhǎng)成煙草苗（四）愈傷組織的遺傳變異與影響因素1、引起異質(zhì)性的原因

A、外植體染色體倍數(shù)性與遺傳組成不同的細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)后的分裂。

B、培養(yǎng)條件引起的不規(guī)則性。

它們常同時(shí)發(fā)揮作用。2、初生愈傷組織接種到培養(yǎng)基上后，細(xì)胞核內(nèi)的變化：

A、正常有絲分裂

B、先核內(nèi)復(fù)制，后有絲分裂

C、先核碎裂，后有絲分裂菠蘿的愈傷組織◆初生愈傷組織的異質(zhì)細(xì)胞群體性反映了外植體中的染色體狀況反映了愈傷組織誘導(dǎo)期間核變異的結(jié)果◆在誘導(dǎo)中，會(huì)出現(xiàn)二倍體、多倍體、單倍體、非整倍體與染色體結(jié)構(gòu)變異體等3、建成愈傷組織

◆選擇作用的結(jié)果◆只有一種主要核型占優(yōu)勢(shì)

◆培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)類型的影響

◆異質(zhì)群體中細(xì)胞間的競(jìng)爭(zhēng)與互作的影響棗6天發(fā)育的愈傷組織4、影響因子及培養(yǎng)條件A、培養(yǎng)基B、組織原有的倍數(shù)性C、培養(yǎng)環(huán)境的條件生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)元素有機(jī)成分物理性質(zhì)光照溫度（五）愈傷組織培養(yǎng)的應(yīng)用

a、加快園藝植物新品種和良種繁育速度b、培養(yǎng)無(wú)病毒苗木c、獲得倍性不同的植物d、克服遠(yuǎn)緣雜交困難e、利于種質(zhì)資源長(zhǎng)期保存和遠(yuǎn)距離運(yùn)輸f、提供育種中間材料g、誘發(fā)和離體篩選突變體h、制造人工種子二、器官培養(yǎng)是指植物的根、莖、葉、花器和幼小果實(shí)的無(wú)菌培養(yǎng)。（一）根的培養(yǎng)

利用無(wú)性繁殖系，將表面消毒后的植物種子在無(wú)菌條件下萌發(fā)，待根伸長(zhǎng)后從根尖切取長(zhǎng)1.0cm的根尖，接種于培養(yǎng)基中，待側(cè)根生長(zhǎng)約一周后，即可取側(cè)根的根尖進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。

離體根培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基多為無(wú)機(jī)離子濃度低的White培養(yǎng)基。影響離體根生長(zhǎng)的因素主要有基因型、培養(yǎng)條件、激素、pH、光照和溫度等。A、消毒植物種子表面，無(wú)菌條件下萌發(fā)B、待根伸長(zhǎng)后，切取長(zhǎng)1.0cm的根尖，接種C、側(cè)根生長(zhǎng)約一周后，取側(cè)根根尖擴(kuò)大培養(yǎng)D、反復(fù)進(jìn)行，可得到單根尖為源的離體根無(wú)性系

（1）無(wú)性繁殖系的建立羅漢松快繁生根狀根培養(yǎng)的方法（2）離體根培養(yǎng)的一般方法

◆100ml三角瓶

◆裝40~50ml培養(yǎng)液

◆液體培養(yǎng)

◆反復(fù)繼代培養(yǎng)

◆流動(dòng)式不定根培養(yǎng)胡籮卜離體根培養(yǎng)過(guò)程羅漢松快繁生根狀快繁后金銀花王的發(fā)達(dá)根系櫻桃木生根培養(yǎng)棗15天生根狀（3）培養(yǎng)基與影響因素A、培養(yǎng)基◆無(wú)機(jī)離子濃度低◆White培養(yǎng)基或其他培養(yǎng)基◆MS、B5也可用，但其濃度要稀釋2/3或1/2基質(zhì)40d后的pH生根率君柚長(zhǎng)富20.2mg/L0.5mg/L瓊脂蛭石珍珠巖河沙泥炭5.26.787.107.704.3510010085.650.330.098.645.630.025.45.296.685.065.640.020.1

不同基質(zhì)對(duì)蘋(píng)果離體生根的影響B(tài)、影響因素

◆基因型◆培養(yǎng)條件◆生長(zhǎng)物質(zhì)◆pH◆光照◆溫度（二）莖尖的培養(yǎng)1、概念與意義◆據(jù)培養(yǎng)目的與取材大小◆莖尖分生組織培養(yǎng)：長(zhǎng)度小于0.1mm，常帶有1~2個(gè)葉原基◆普通莖尖培養(yǎng)：莖尖、芽尖、側(cè)芽◆用于植物開(kāi)花生理的研究◆無(wú)毒苗木的生產(chǎn)2、培養(yǎng)方法（1）材料制備清洗75%酒精消毒30s無(wú)菌水沖洗3~4次解剖生長(zhǎng)點(diǎn)露出接種培養(yǎng)0.1%升汞液或飽和漂白粉液中浸泡8~10min切下頂端0.1~0.2mm的莖尖（含有葉原基）（2）培養(yǎng)基

◆MS為主，White、B5、Heller、Gautherer等

◆糖濃度降低，抑制莖尖生長(zhǎng)

◆植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物會(huì)影響莖尖的生長(zhǎng)與形態(tài)發(fā)生（3）培養(yǎng)方式A、固體培養(yǎng)莖尖緊貼培養(yǎng)基、25~28℃恒溫、100%相對(duì)濕度B、紙橋培養(yǎng)

◆濾紙代替瓊脂

◆液體培養(yǎng)基

◆工藝復(fù)雜

◆康乃馨莖尖培養(yǎng)3、影響因素◆基因型◆外植體大小◆供試植株的生理狀態(tài)及年齡◆芽的著生部位◆培養(yǎng)基◆褐變◆玻璃化◆遺傳穩(wěn)定性（三）葉的培養(yǎng)

離體葉培養(yǎng)是指包括葉原基、葉柄、葉鞘、葉片、子葉等葉組織的無(wú)菌培養(yǎng)。1、葉培養(yǎng)的意義（1）研究葉形態(tài)建成、光合作用、葉綠素形成（2）證實(shí)葉細(xì)胞的全能性（3）探索離體葉培養(yǎng)的條件與影響因素，提供理論依據(jù)（4）建立快速無(wú)性繁殖系，提高繁殖系數(shù)（5）誘變處理，篩選突變體，應(yīng)用于育種實(shí)踐2、葉原基培養(yǎng)◆采用休眠的頂芽，剝?nèi)ゲ课击[片◆在5%NaClO液中浸泡20min左右，表面消毒◆切取柱狀葉原基進(jìn)行培養(yǎng)◆培養(yǎng)基：Knop‘s無(wú)機(jī)鹽或Kundson，填加Nistch中的微量元素、CoCl2、2%蔗糖、8%瓊脂，pH5.5◆溫度24℃、光照24h3、葉組織的分化與再分化（1）葉組織分離與消毒頂端幼嫩葉片流水沖洗75%酒精擦拭葉片表面0.1%升汞消毒5~8min無(wú)菌水沖洗3~4次無(wú)菌培養(yǎng)皿切成5mm×5mm小塊上表皮朝上接種固體培養(yǎng)基（2）培養(yǎng)基

◆MS、B5、White、N6等

◆蔗糖使用濃度3%左右

◆附加有機(jī)添加物

◆細(xì)胞分裂素：KT、6-BA

◆生長(zhǎng)素：NAA、2，4-D（3）培養(yǎng)條件

◆25~28℃

◆光照12~14h

◆光強(qiáng)度為1500~2000lx4、影響因素◆基因型◆細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素的配合◆供試植株的發(fā)育時(shí)間與年齡◆葉脈◆極性◆損傷（1）直接產(chǎn)生不定芽（2）由愈傷組織產(chǎn)生不定芽（3）胚狀體形成（4）其他途徑：小鱗莖、原球莖等5、離體葉組織的莖與芽發(fā)生途徑國(guó)蘭原球莖的增殖愈傷組織分化不定芽以大巖桐組織培養(yǎng)為例1、愈傷組織誘導(dǎo)、芽的分化

A、切取盆栽大巖桐的幼嫩葉片(帶葉柄切下)B、肥皂水擦洗，后自來(lái)水沖洗15min，再蒸餾水沖洗2次

C、無(wú)菌臺(tái)上，洗凈的葉片用75%酒精浸泡5s，后傾出酒精，用0.1%氯化汞溶液處理5-6min，取出

D、無(wú)菌水沖洗5次，用無(wú)菌濾紙吸干表面水分

E、切去葉柄，葉片切成8×8ｍｍ2小塊，平放在MS+6-BA1.0ｍｇ/L+NAA0.1ｍｇ/L培養(yǎng)基中F、15天培養(yǎng)后，外植體彎曲、膨大增厚G、30天后，切口處產(chǎn)生少量顆粒狀愈傷組織，在外植體的不定部位產(chǎn)生瘤狀、淺黃綠色愈傷組織H、轉(zhuǎn)入新MS+6-BA1.0ｍｇ/L+NAA0.1ｍｇ/L培養(yǎng)