【幽門螺桿菌免疫學抗體檢測法研究4300字（論文）】

V幽門螺桿菌免疫學抗體檢測法研究目錄TOC\o"1-3"\h\u40391引言 1108062免疫學抗體檢測方法 2138652.1免疫印跡技術 2248942.2膠乳免疫比濁法 243862.3膠體金法 3215642.4酶免疫法 382063總結 45345參考文獻 61引言幽門螺桿菌（Helicobacterpylori，HP）是人類胃的主要病原體之一，與胃潰瘍、慢性胃炎、胃癌和十二指腸潰瘍密切相關[1]，全球有超過50%的人感染了H.pylori，在一些社會經(jīng)濟不發(fā)達的地區(qū)，感染率已超過總人數(shù)的一半ADDINNE.Ref.{3EDD8628-D001-4822-8878-5DEAFB0433DA}[2]。胃內局部pH值可達到0.9-1.8，但H.pylori依然可存活、定殖和繁殖。主要原因如下：幽門螺桿菌產(chǎn)生尿素酶（Urease），分解尿素產(chǎn)生氨氣能夠中和胃的酸性環(huán)境ADDINNE.Ref.{705235D9-2BB9-4FD7-A8A0-FD28A72AC6C5}[3]；H.pylori借助鞭毛在胃中自由游走逃避宿主的免疫攻擊，或者阻礙了先天性免疫功能和適應性免疫ADDINNE.Ref.{C9F21090-5AFD-48D2-9D24-A2DF13AADCCC}[4-6]應答NE.Cms_Insert；另外，細胞毒素相關蛋白A、空泡毒素A和γ-谷氨酰轉肽酶還可以誘導樹突狀細胞發(fā)生免疫耐受，抑制T細胞的增殖和信號轉導導致細胞凋亡，使H.pylori免受T細胞的攻擊ADDINNE.Ref.{94BBC543-F01A-4386-B34C-DCA9B3662B3A}[7]。幽門螺桿菌感染導致人體胃消化不良，患萎縮性胃炎、腸化生、消化性潰瘍，甚至胃癌等疾病ADDINNE.Ref.{A26EBA53-0044-44CB-8D7F-32EC9FC5AF14}[8，9]。除了胃內消化性疾病之外，H.pylori還會導致一些胃外疾病，比如神經(jīng)疾病阿爾茨海默癥ADDINNE.Ref.{8C45201D-84AD-4F8E-A865-C70256D941BF}[10]、血液疾病免疫性血小板減少癥ADDINNE.Ref.{AAD2EFEA-EB28-42B3-AC0E-9204260E07E5}[11]、肝膽疾病酒精性脂肪肝ADDINNE.Ref.{B21A0DD8-8B08-494B-99F0-1BCDB4B19394}[12]等。因此，根除H.pylori對于治療胃部疾病和其他與H.pylori相關疾病十分重要。目前臨床治療中H.pylori抗生素耐藥性不斷提高，甲硝唑、克拉霉素的耐藥性在亞洲高達99.5%、85.5%ADDINNE.Ref.{1AEB3BB1-F7F4-4396-82E2-1DFF71C917AA}[13，14]。HP根除需要綜合考量個體化、患者的依從性以及對抗生素的敏感性，其中，抗生素耐藥的普遍存在使得HP的全球根除率不斷下降。大多數(shù)患者對基于鉍劑的四聯(lián)一線療法或伴隨治療反應較好，當一線治療失敗時，搶救方案應替換既往應用的抗生素制劑，避免耐藥重復發(fā)生。目前公認的根除HP治療的方案包括CTT、BQT、伴隨療法以及其他如序貫療法、混合療法和基于左氧氟沙星的搶救療法。幽門螺桿菌（HP）在胃內定植，通過自身的鞭毛到達胃黏膜表面的保護性黏液層，并通過化學趨化法首先定居在沒有產(chǎn)酸細胞的胃竇以避開低pH區(qū)域，同時它還產(chǎn)生尿素酶、中和胃酸，以利于自身生存。HP是多種疾病的高危因素，全球患病率約為58%，中國的患病率約為20.6%至81.8%不等，HP流行率在發(fā)達國家逐年下降，而在發(fā)展中國家和新興工業(yè)地區(qū)一直處于較高水平。這表明，HP感染在一定程度上延緩經(jīng)濟發(fā)展，加重國家醫(yī)療負擔。隨著人們對HP的不斷研究，幽門螺桿菌的檢測方法也在改進與創(chuàng)新，并且在臨床上得到廣泛應用。根據(jù)HP檢測時是否需要從胃部取材，可以將檢測分為2類：侵入性檢測和非侵入性檢測[15]。侵入性檢測主要包括病理學檢測法、病原學檢測法；非侵入性檢測主要有免疫學檢測法、尿素呼氣實驗檢測法。尿素呼氣試驗是目前最常用的HP感染診斷和用于根除效果評價方法[24]，敏感性、特異性、準確性高，且操作簡便、快速、無創(chuàng)傷，無交叉感染的風險。最大缺點是檢測費用貴，14C有放射性，會受抗生素影響出現(xiàn)假陰性，所以會受到檢測近期藥物影響。從檢驗工作者和患者的感受來講，一般認為最好的方法是能簡便、快速、無創(chuàng)、還有準確測試的方法。因此，免疫學抗體檢測更易接受和采用且更有研究意義。2免疫學抗體檢測方法2.1免疫印跡技術免疫印跡是免疫化學中的一項新技術。用SDS分離不同分子量的HP蛋白，并檢測HP患者血清中的抗體。HP的臨床分類通常分為兩種類型：I型和II型。一些研究表明，HP分型在臨床工作中更為重要。如果是第一種感染，建議給予積極的抗病毒治療；如果是第二種感染，就無法治療，然后進行隨訪觀察，避免濫用抗生素。HP感染的臨床診斷方法很多。Westernblotting是一種非侵入性診斷方法，但由于其靈敏度高、特異性強、檢測方法簡單、時間短，Westernblotting西醫(yī)很容易檢測消化不良患者的HP感染，對HP的臨床治療也有很好的指導意義[16]。westernblot檢測可以減少受試者的創(chuàng)傷。與傳統(tǒng)方法相比，檢測成本更經(jīng)濟、更經(jīng)濟，降低了經(jīng)濟負擔，提高了幽門螺桿菌的檢測效率，從而有效避免了其他疾病的傳播。通過對菌株特性的分析，結合其他技術，可以更好地控制其治療效果和毒副作用[17]。2.2膠乳免疫比濁法乳膠增強免疫比濁法是在一定粒徑的乳膠顆粒上標記一定量的抗體或抗原，制備乳膠溶液，與抗體或抗原的混合溶液反應，通過比濁法測定抗體或抗原的濃度，形成一定的濁度。這遠遠超過任何其他方法。通過對乳膠免疫比濁法檢測HP抗體試劑性能的研究和評價，得出乳膠免疫比濁法檢測HP抗體試劑可用于全自動生化分析儀的結論。結果表明，乳狀液濁度法能滿足臨床檢測的準確度、線性、準確度和抗干擾性要求。在另一項研究中，分別通過免疫比濁法、金標記法和14C呼氣試驗檢測HP。這種方法靈敏度低，需要改進[20]。2.3膠體金法膠體金法是檢測幽門螺桿菌抗體的一種新方法。它是一種新的免疫標記技術，利用膠體金作為顯色劑或示蹤劑來檢測抗原和抗體。該方法簡單、無痛，采樣后5分鐘內即可快速顯示結果。與快速尿素酶試驗相比，膠體金法檢出率為65.71%，快速尿素酶試驗檢出率為67.14%，敏感性和特異性分別為91.24%和89.76%，顯著高于胃鏡快速尿素酶試驗。因此，膠體金法檢測HP具有較高的可靠性。總之，膠體金HP試驗不僅陽性檢出率高，而且檢測時間短。它不需要專業(yè)人員，沒有疼痛感，易于被患者接受，不屬于患者禁忌癥，符合要求，可靠性高，非常適合臨床使用[22]。2.4酶免疫法ELISA免疫法治療是免疫診斷的新一代技術,已廣泛應用于多種感染病原體如微生物毒性感染癥、寄生蟲感染病、非病原感染癥等的免疫診斷。此外，還廣泛應用于各種高分子陰性抗原和其他小分子陽性抗原的藥物定量靈敏測定，從目前的實驗結果分析來看，ELISA等方法檢測具有定量高靈敏度、特異性、簡單、快速、穩(wěn)定、自動化等六大特點。不僅非常適用于各種臨床多個標本的同時檢查，因為一天至少能同時檢查幾百到幾千個臨床標本，所以也非常適合用于血清學和流行傳染病學的調查。這個檢測方法不僅可以直接測定體內抗體，還可以直接測定進入體液過程中的體內循環(huán)抗原，是早期疾病診斷最好的治療方法。酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）是用酶標記抗體，并將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使抗原抗體反應在固相載體表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分洗滌，用最廣的技術。ELISA可以采集病人的血液、唾液、尿液及糞便等標本檢測抗體。目前檢測細胞因子的ELISA方法主要是雙抗體夾心ELSIA，基本原理為捕獲抗體固定在ELISA板上，細胞因子與捕獲抗體結合，HRP標記的檢測抗體與固定在ELISA板上的細胞因子結合，通過測量HRP催化底物產(chǎn)生的信號，來測量細胞因子的含量。TakashiSaito等人基于IL-6的大鼠單克隆抗體以及豬多克隆抗體建立了小鼠IL-6的ELISA檢測方法，檢測限為2ng/mL(Saitoetal1992)。由于體內細胞因子的含量較低，傳統(tǒng)的ELISA方法靈敏度達不到臨床要求(Helloetal1991)。商業(yè)化試劑盒中常常引入生物素-鏈霉親和素信號放大系統(tǒng)來提高靈敏度。生物素-鏈霉親和素放大系統(tǒng)主要通過生物素、親和素和信號物質的不同的組合方式來提高檢測信號。研究了血清HP抗體ELISA的優(yōu)點和有效性。對200例疑似HP感染的患者進行血清HP抗體ELISA、14C-UBT及嗜銀染色檢測。結果表明：銀染法kappa值為0.915，14C-UBT法kappa值為0.853，血清HP抗體ELISA法kappa值為0.882；三種檢測方法的特異性無顯著性差異（P>0.05），表明銀染診斷HP陽性的一致性優(yōu)于其他兩種方法，但三種檢測方法的一致性好，特異性好，表明血清HP抗體ELISA和14C-UBT能滿足臨床診斷HP陽性的需要。血清HP抗體ELISA和14C-UBT操作簡單，檢測成本低，無創(chuàng)性，但血清HP抗體ELISA在適用人群方面優(yōu)于14C-UBT。本研究中，銀染法與血清HP抗體ELISA法的敏感性無顯著性差異（P>0.05）；血清HP抗體ELISA的特異性、敏感性和準確性略高于14C-UBT，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。許多研究表明，14C-UBT法中的14C會對人體和環(huán)境造成一定的污染損害，不適用于孕婦和嬰兒，這表明選擇血清HP抗體ELISA檢測方法的可行性更高[23]。因此，應用血清HP抗體ELISA診斷HP感染具有效果更好、靈敏度和特異性更高、操作簡單、無創(chuàng)、患者易于接受等優(yōu)點。3總結抗體檢測采用免疫印跡法、膠體金法、酶聯(lián)免疫吸附法和乳膠濁度法。檢測尿素酶A和B亞單位的空泡抗體和細胞毒性抗體[24]。然而，它也與其他抗生素發(fā)生交叉反應，從而導致幽門螺桿菌感染假陽性。該方法特異性強、靈敏度高、無創(chuàng)、操作簡單、成本低，適合大規(guī)模檢測[25]。westernblotting結合分型可以提高診斷結果。乳膠免疫比濁法可用于體檢。酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）可用于檢測各種抗體樣本。13C尿素呼氣試驗結果表明，膠體金聯(lián)合免疫印跡法在評價HP感染方面明顯優(yōu)于膠體金免疫印跡法[26]。然而，在某些方面仍存在爭議：研究發(fā)現(xiàn)，胃鏡檢查和呼吸測試不支持診斷消化系統(tǒng)疾病，例如HPI抗體陽性患者的炎癥。慢性胃炎；消化性潰瘍；胃癌的原因可能是患者自身抗體水平和免疫力下降，或患者在治療前或治療后感染了HP，體內抗體仍呈陽性[27]。由于抗體含量下降緩慢，抗體含量增加，因此，HP抗體檢測不能作為當前感染或療效觀察的指標。臨床治療和預后必須結合胃鏡檢查或呼吸測試結果來判斷[28]。參考文獻[1]張永芬,昝學凱.消化系統(tǒng)常見疾病與幽門螺桿菌感染的關系探討[J].基層醫(yī)學論壇,2020,24(31):4468-4469.[2]HirukawaS,SagaraH,KanetoS,etal.CharacterizationofmorphologicalconversionofHelicobacterpyloriunderanaerobicconditions[J].MicrobiolImmunol.2018,62(4):221-228.[3]ChristopheB,AnthonyA.EpidemiologyofHelicobacterp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