采毛方式對皖系長毛兔血清蛋白組學的影響

采毛方式對皖系長毛兔血清蛋白組學的影響

我國的高羊茅育種排名世界第一。一般來說，長毛兔子每年有約40000萬只兔子，每年產兔子9.95萬只。毛留在國外的兔子和羊毛產品的產量占世界總產值的90%以上。長毛兔養(yǎng)殖業(yè)“投資少、周轉快、效益高”,而且節(jié)糧環(huán)保,出口創(chuàng)匯能力強,是我國畜牧業(yè)的重要組成部分和農村新的經濟增長點。采毛是兔毛生產中的重要技術環(huán)節(jié),目前主要采用剪毛和藥物脫毛等方式。兔毛采集因為涉及到保定兔體和接觸皮膚,可能對兔體造成應激,甚至傷害,一定程度上影響長毛兔正常生產。因而,研究采毛方式應激機制對減少采毛應激和損失,提高動物福利和生產效益有重要意義。另外,2013年下半年,“活拔兔”視頻網絡瘋傳的事件,對我國兔毛出口產生很大沖擊,兔毛產品出口訂單大幅減少,采毛方式及其影響的相關研究迫在眉睫。血液生化指標可有效反映動物的健康水平。本研究將通過設計不同采毛方式進行采毛,然后對采毛前、后不同時間點長毛兔血清蛋白、含氮代謝物水平變化規(guī)律及不同采毛方式間差異進行了研究,旨在分析采毛方式對機體蛋白代謝的影響,篩選獲得不同采毛方式應激的生化指標,進一步完善前期研究,從而為初步揭示采毛應激生化機制打下基礎。1材料和方法1.1試驗兔的飼養(yǎng)在安徽省農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所實驗兔場選用年齡相似、體重相近、健康的皖系長毛兔成年母兔30只,隨機分為3個處理組,每組10只;預飼1周,養(yǎng)毛期結束后3個處理組分別采用剪毛(A組)、直接拔毛(B組)和藥物拔毛(C組)3種不同方式進行采毛;A組兔毛全部剪光,B和C組采用分期拔毛方式(留背毛、頭毛、腿毛)采毛,C組拔毛前12h口服地塞米松0.75mg。3組試驗兔飼養(yǎng)管理條件和飼料營養(yǎng)水平均相同,每只試驗兔均單籠飼養(yǎng),定時定量采食,自由飲水。在試驗兔采毛前、采毛后0、4、8、24、48h分別用不含抗凝劑的真空采血管進行耳緣靜脈采血,每次每只兔采血約5mL,血液4℃冷藏過夜后2500r/min離心10min,并小心吸取上層血清分裝到1.5mL滅菌離心管,-20℃保存?zhèn)溆谩?.2測試方法1.2.1酶學速率選用的7個血液生化指標及其測定方法分別如下:總蛋白(TP)采用雙縮脲法,白蛋白(ALB)采用溴甲酚綠法,肌酐(Crea)采用苦味酸法,總膽紅素(TBILI)和直接膽紅素(DBILI)采用釩酸鹽法,尿酸(UA)采用尿酸酶-過氧化物酶偶聯(lián)法,尿素(urea)采用酶學速率法。指標測定使用D240型全自動生化分析儀(神州英諾華,南京),具體操作方法按神州英諾華配套試劑盒說明進行,測定前使用level2質控血清(RAN-DOX,UK)對儀器和指標分別進行質控和定標,每份樣品均重復測定3次。1.2.2數據處理與分析用EXCEL2010對試驗數據進行初步整理,然后用SAS9.1對整理后數據進行單因素方差分析,多重比較采用Duncan法,統(tǒng)計結果用平均數±標準差表示,P<0.05作為差異顯著水平。2結果與分析2.1各時期各采毛前后alb的變化血清蛋白變化如表1,對于TP,剪毛組采毛后8h顯著高于采毛前(P<0.05),24h恢復到采毛前水平,而48h又顯著上升,高于采毛前(P<0.05);直接拔毛組僅采毛后急速上升,而采毛后4h即恢復到采毛前水平;藥物拔毛組采毛后TP即慢慢上升,8h達峰值,而后下降,但直到48h,其TP值還顯著高于采毛前(P<0.05)。采毛前3組間無差異(P>0.05),采毛后4h剪毛組和藥物拔毛組顯著高于直接拔毛組(P<0.05),采毛后24h藥物拔毛組顯著高于直接拔毛組(P<0.05),而剪毛組48h又顯著高于直接拔毛組(P<0.05),其他時期各組無差異(P>0.05)。對于ALB,剪毛組在采毛前后無變化;直接拔毛組雖然采毛后ALB有升有降,但與采毛前均無顯著變化(P>0.05);藥物拔毛組在采毛后8~48hALB相對采毛前顯著升高(P<0.05)。采毛前和采毛后0h3組ALB濃度無差異(P>0.05);而采毛后4~48h,直接拔毛組ALB均低于喂藥拔毛組和剪毛組(其中8、24h與剪毛組差異不顯著(P>0.05),其他均差異顯著(P<0.05)),剪毛組和藥物拔毛組各時期均無差異(P>0.05)。2.2各組tbili、采毛前后的采動力學特征血清非蛋白氮代謝物變化結果見表2。對于Crea,剪毛組采毛后顯著上升,4h恢復采毛前水平,但8h又上升,而后下降到顯著低于采毛前水平(P<0.05);直接拔毛組采毛后急劇上升,而后下降,24h后恢復到采毛前水平;藥物拔毛組采毛后Crea即顯著上升,但4h則恢復到采毛前水平。采毛前,喂藥拔毛組顯著低于剪毛組(P<0.05)和直接拔毛組(P<0.05),采毛后也均低于后兩組,但24h后3組間差異均不顯著(P>0.05)。對于TBILI,采毛前、后剪毛和直接拔毛組都無變化,且兩組間無顯著差異(P>0.05);采毛前,藥物拔毛組TBILI與其他兩組無差異(P>0.05),但采毛后即顯著上升,8h達峰值,而后下降,到48h仍顯著高于采毛前(P<0.05),且采毛后0~48h都顯著高于其他兩組(P<0.05)。對于DBILI,剪毛組采毛后即顯著降低,直到48h才恢復采毛前水平;直接拔毛組采毛后先降低后升高,8h時顯著低于采毛前水平(P<0.05),其他時刻與采毛前無顯著差異(P>0.05);藥物拔毛組則相反,采毛后先上升后下降,8h和24h顯著高于采毛前(P<0.05),48h時恢復到采毛前水平。3組間采毛前DBILI水平無顯著差異(P>0.05),而采毛后0~24h藥物拔毛組均顯著高于其他兩組(P<0.05),48h時3組均恢復采毛前水平且組間無差異(P>0.05)。對于UA,剪毛組采毛前、后無明顯變化;直接拔毛組拔毛后則顯著升高達峰值,而后下降,24h恢復到采毛前水平;藥物拔毛組采毛后即顯著上升,8h達峰值,后下降,48h恢復采毛前水平。3組采毛前無差異(P>0.05),采毛后0~4h拔毛兩組均顯著高于剪毛組(P<0.05),但48h3組無明顯差異(P>0.05)。對于urea,剪毛組采毛前后無明顯變化;直接拔毛組和藥物拔毛組采毛前、后urea水平變化趨勢相似,采毛后均上升,4h即達峰值,而后下降,并分別在24h和48h恢復到采毛前水平,其中藥物拔毛組變化幅度稍大。采毛前3組urea水平無差異(P>0.05),采毛后4~8h拔毛兩組均顯著高于剪毛組(P<0.05),4h藥物拔毛組又顯著高于直接拔毛組(P<0.05),其他時期3組間無差異(P>0.05)。3討論3.1剪毛應激對家兔生化指標的影響血清總蛋白包括血清白蛋白和球蛋白。血清白蛋白由肝臟實質細胞合成分泌,它具有維持血漿膠體滲透壓、促進營養(yǎng)物質運輸和提供蛋白質來源等廣泛生理功能;血清總蛋白和白蛋白水平變化反映了機體肝臟功能狀況和機體免疫狀態(tài)。巨向紅等發(fā)現,熱應激對巴馬香豬總蛋白、白蛋白沒有顯著影響。汪海波研究復合慢性應激對家兔生化指標的影響,結果發(fā)現總蛋白、球蛋白和白蛋白均無明顯變化。趙宗勝等研究發(fā)現,荷斯坦奶牛血液蛋白水平雖有低溫耐受性,卻因熱應激影響而顯著上升。國外研究發(fā)現,剪毛應激可能造成卡拉庫爾母羊血清總蛋白水平升高。本研究結果發(fā)現,3種采毛方式均刺激總蛋白的顯著上調,也可以引起白蛋白水平上升,其中藥物拔毛組在采毛后8~48h顯著高于采毛前,這與運輸應激對仔豬和夏南牛血清蛋白影響結果相似。其原因可能是長毛兔到采毛期末需要生理性的脫毛,人工采毛有助長毛兔換毛并刺激了血清蛋白水平上升,有利兔體康復并為進入下一次兔毛生長做準備。綿羊妊娠后期營養(yǎng)限飼影響胎兒發(fā)育因而補償提高了胎兒總蛋白水平(P>0.05)。李振研究表明,復合中藥方可改善獺兔熱應激條件下采食量、生長速度,增加皮張面積和被毛密度,同時提高了總蛋白、白蛋白免疫球蛋白和甲狀腺素水平。可見血清總蛋白和白蛋白水平的上升伴隨著家兔生產性狀良好表現,因而有益毛發(fā)再生。3.2地塞米松和拔毛應激對tbili的影響血清肌酐反映了腎臟腎小球的濾過能力,當腎臟損傷厲害時,血清肌酐明顯上升。本研究發(fā)現,長毛兔采毛后,肌酐急性上升,但均較快恢復,可能采毛應激只是對長毛兔腎臟等產生急性可恢復性影響;然而藥物拔毛組采毛前肌酐水平即低于其他兩組,可能受到地塞米松抑制作用。早期已有研究發(fā)現,地塞米松可抑制下丘腦-垂體-腎上腺皮質系統(tǒng)活動8~14h,但不超過24h?？偰懠t素包括直接膽紅素和間接膽紅素,主要為紅細胞血紅蛋白代謝產物,血清中三者水平變化反映了動物肝臟和膽道的病變狀況和黃疸類型。白衛(wèi)兵等利用地塞米松模擬對日本大白兔應激,結果發(fā)現,高劑量地塞米松可導致TBILI上升,應用14d和21d其含量明顯升高,也顯著高于對照組,同時其肝重量和肝重比大幅提高。本研究結果發(fā)現,對于TBILI,只有藥物拔毛組在采毛后明顯上升,采毛后48h也沒有恢復,而且采毛應激后顯著高于其他兩組;對于DBILI,藥物拔毛組先上升后下降,而且在采毛后24h內均顯著高于其他兩組,其他兩組均先下降后升高,表明拔毛和剪毛主要對直接膽紅素產生影響,而且地塞米松對總膽紅素和直接膽紅素均有影響,并且可能與拔毛應激有聯(lián)合效應。根據前期兔場調研發(fā)現,如果地塞米松的應用時間較長或量較大時,家兔常出現腹瀉、抗病力下降現象,因而在長毛兔生產中應慎重使用,或應用其他脫毛劑。尿素是動物體內蛋白氮代謝主要終產物,尿酸是嘌呤、核酸及核蛋白代謝產物,兩者是體內蛋白代謝較為準確的反映指標。Amici等研究發(fā)現,短時熱應激使得新西蘭白兔血漿尿素水平0.5h內上升,而30h后又顯著下降。與之相似,本研究拔毛應激可導致尿素水平急性上升而后下降恢復到采毛前水平,而剪毛對尿素水平影響不大。谷子林研究發(fā)現,多種飼料因素可導致腸道應激而發(fā)生腹瀉,其血液尿素氮等顯著升高,飼喂低纖維日糧(7%~9%)的試驗兔尿素氮的水平略高于高纖維日糧(12%~14%)的試驗兔,可能是腹瀉應激引起蛋白質分解的增加。但巨向紅等研究發(fā)現,巴馬香豬熱應激時血尿素氮(BUN)呈下降趨勢(P>0.05),可能不同應激或物種存在差異。而本研究采毛應激類似于外傷應激加束縛應激,與環(huán)境溫度應激機制可能相異。本研究還發(fā)現,拔毛可顯著增加采毛當天血清尿酸水平,而不受剪毛影響。目前,應激對哺乳動物血清尿酸水平影響研究少見,可能是因為它主要為鳥類代謝物,難受關注。王玉愛研究發(fā)現,骨折外傷應激可導致人體血液尿酸水平顯著下降,與本研究結果相反,其原因可能為腎臟重吸收功能障礙,有待進一步研究。4其他研究的進一步驗證本研究分析了不同采毛方式對長毛兔血清蛋白和含氮代謝物的影響,篩選獲得采毛應激指標血清總蛋白和肌酐,拔毛應激指標尿素和尿酸,地塞米松影響指標肌酐、白蛋白、總膽紅素和直接膽紅素。本研究可為闡明動物采毛方式應激機制奠定基礎,為減少和提前預防采毛方式應激提供參考。當然,本文結果只是初步的,需要其他研究相互佐證,再者研究還可以進一步拓展,第一,雖然本研究中大部分指標在48h內恢復了正常水平,但試驗時間也可以更長一