采毛方式對(duì)皖系長(zhǎng)毛兔血清蛋白組學(xué)的影響

采毛方式對(duì)皖系長(zhǎng)毛兔血清蛋白組學(xué)的影響

我國(guó)的高羊茅育種排名世界第一。一般來(lái)說(shuō)，長(zhǎng)毛兔子每年有約40000萬(wàn)只兔子，每年產(chǎn)兔子9.95萬(wàn)只。毛留在國(guó)外的兔子和羊毛產(chǎn)品的產(chǎn)量占世界總產(chǎn)值的90%以上。長(zhǎng)毛兔養(yǎng)殖業(yè)“投資少、周轉(zhuǎn)快、效益高”,而且節(jié)糧環(huán)保,出口創(chuàng)匯能力強(qiáng),是我國(guó)畜牧業(yè)的重要組成部分和農(nóng)村新的經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)點(diǎn)。采毛是兔毛生產(chǎn)中的重要技術(shù)環(huán)節(jié),目前主要采用剪毛和藥物脫毛等方式。兔毛采集因?yàn)樯婕暗奖６ㄍ皿w和接觸皮膚,可能對(duì)兔體造成應(yīng)激,甚至傷害,一定程度上影響長(zhǎng)毛兔正常生產(chǎn)。因而,研究采毛方式應(yīng)激機(jī)制對(duì)減少采毛應(yīng)激和損失,提高動(dòng)物福利和生產(chǎn)效益有重要意義。另外,2013年下半年,“活拔兔”視頻網(wǎng)絡(luò)瘋傳的事件,對(duì)我國(guó)兔毛出口產(chǎn)生很大沖擊,兔毛產(chǎn)品出口訂單大幅減少,采毛方式及其影響的相關(guān)研究迫在眉睫。血液生化指標(biāo)可有效反映動(dòng)物的健康水平。本研究將通過(guò)設(shè)計(jì)不同采毛方式進(jìn)行采毛,然后對(duì)采毛前、后不同時(shí)間點(diǎn)長(zhǎng)毛兔血清蛋白、含氮代謝物水平變化規(guī)律及不同采毛方式間差異進(jìn)行了研究,旨在分析采毛方式對(duì)機(jī)體蛋白代謝的影響,篩選獲得不同采毛方式應(yīng)激的生化指標(biāo),進(jìn)一步完善前期研究,從而為初步揭示采毛應(yīng)激生化機(jī)制打下基礎(chǔ)。1材料和方法1.1試驗(yàn)兔的飼養(yǎng)在安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所實(shí)驗(yàn)兔場(chǎng)選用年齡相似、體重相近、健康的皖系長(zhǎng)毛兔成年母兔30只,隨機(jī)分為3個(gè)處理組,每組10只;預(yù)飼1周,養(yǎng)毛期結(jié)束后3個(gè)處理組分別采用剪毛(A組)、直接拔毛(B組)和藥物拔毛(C組)3種不同方式進(jìn)行采毛;A組兔毛全部剪光,B和C組采用分期拔毛方式(留背毛、頭毛、腿毛)采毛,C組拔毛前12h口服地塞米松0.75mg。3組試驗(yàn)兔飼養(yǎng)管理?xiàng)l件和飼料營(yíng)養(yǎng)水平均相同,每只試驗(yàn)兔均單籠飼養(yǎng),定時(shí)定量采食,自由飲水。在試驗(yàn)兔采毛前、采毛后0、4、8、24、48h分別用不含抗凝劑的真空采血管進(jìn)行耳緣靜脈采血,每次每只兔采血約5mL,血液4℃冷藏過(guò)夜后2500r/min離心10min,并小心吸取上層血清分裝到1.5mL滅菌離心管,-20℃保存?zhèn)溆谩?.2測(cè)試方法1.2.1酶學(xué)速率選用的7個(gè)血液生化指標(biāo)及其測(cè)定方法分別如下:總蛋白(TP)采用雙縮脲法,白蛋白(ALB)采用溴甲酚綠法,肌酐(Crea)采用苦味酸法,總膽紅素(TBILI)和直接膽紅素(DBILI)采用釩酸鹽法,尿酸(UA)采用尿酸酶-過(guò)氧化物酶偶聯(lián)法,尿素(urea)采用酶學(xué)速率法。指標(biāo)測(cè)定使用D240型全自動(dòng)生化分析儀(神州英諾華,南京),具體操作方法按神州英諾華配套試劑盒說(shuō)明進(jìn)行,測(cè)定前使用level2質(zhì)控血清(RAN-DOX,UK)對(duì)儀器和指標(biāo)分別進(jìn)行質(zhì)控和定標(biāo),每份樣品均重復(fù)測(cè)定3次。1.2.2數(shù)據(jù)處理與分析用EXCEL2010對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行初步整理,然后用SAS9.1對(duì)整理后數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析,多重比較采用Duncan法,統(tǒng)計(jì)結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,P<0.05作為差異顯著水平。2結(jié)果與分析2.1各時(shí)期各采毛前后alb的變化血清蛋白變化如表1,對(duì)于TP,剪毛組采毛后8h顯著高于采毛前(P<0.05),24h恢復(fù)到采毛前水平,而48h又顯著上升,高于采毛前(P<0.05);直接拔毛組僅采毛后急速上升,而采毛后4h即恢復(fù)到采毛前水平;藥物拔毛組采毛后TP即慢慢上升,8h達(dá)峰值,而后下降,但直到48h,其TP值還顯著高于采毛前(P<0.05)。采毛前3組間無(wú)差異(P>0.05),采毛后4h剪毛組和藥物拔毛組顯著高于直接拔毛組(P<0.05),采毛后24h藥物拔毛組顯著高于直接拔毛組(P<0.05),而剪毛組48h又顯著高于直接拔毛組(P<0.05),其他時(shí)期各組無(wú)差異(P>0.05)。對(duì)于ALB,剪毛組在采毛前后無(wú)變化;直接拔毛組雖然采毛后ALB有升有降,但與采毛前均無(wú)顯著變化(P>0.05);藥物拔毛組在采毛后8~48hALB相對(duì)采毛前顯著升高(P<0.05)。采毛前和采毛后0h3組ALB濃度無(wú)差異(P>0.05);而采毛后4~48h,直接拔毛組ALB均低于喂藥拔毛組和剪毛組(其中8、24h與剪毛組差異不顯著(P>0.05),其他均差異顯著(P<0.05)),剪毛組和藥物拔毛組各時(shí)期均無(wú)差異(P>0.05)。2.2各組tbili、采毛前后的采動(dòng)力學(xué)特征血清非蛋白氮代謝物變化結(jié)果見(jiàn)表2。對(duì)于Crea,剪毛組采毛后顯著上升,4h恢復(fù)采毛前水平,但8h又上升,而后下降到顯著低于采毛前水平(P<0.05);直接拔毛組采毛后急劇上升,而后下降,24h后恢復(fù)到采毛前水平;藥物拔毛組采毛后Crea即顯著上升,但4h則恢復(fù)到采毛前水平。采毛前,喂藥拔毛組顯著低于剪毛組(P<0.05)和直接拔毛組(P<0.05),采毛后也均低于后兩組,但24h后3組間差異均不顯著(P>0.05)。對(duì)于TBILI,采毛前、后剪毛和直接拔毛組都無(wú)變化,且兩組間無(wú)顯著差異(P>0.05);采毛前,藥物拔毛組TBILI與其他兩組無(wú)差異(P>0.05),但采毛后即顯著上升,8h達(dá)峰值,而后下降,到48h仍顯著高于采毛前(P<0.05),且采毛后0~48h都顯著高于其他兩組(P<0.05)。對(duì)于DBILI,剪毛組采毛后即顯著降低,直到48h才恢復(fù)采毛前水平;直接拔毛組采毛后先降低后升高,8h時(shí)顯著低于采毛前水平(P<0.05),其他時(shí)刻與采毛前無(wú)顯著差異(P>0.05);藥物拔毛組則相反,采毛后先上升后下降,8h和24h顯著高于采毛前(P<0.05),48h時(shí)恢復(fù)到采毛前水平。3組間采毛前DBILI水平無(wú)顯著差異(P>0.05),而采毛后0~24h藥物拔毛組均顯著高于其他兩組(P<0.05),48h時(shí)3組均恢復(fù)采毛前水平且組間無(wú)差異(P>0.05)。對(duì)于UA,剪毛組采毛前、后無(wú)明顯變化;直接拔毛組拔毛后則顯著升高達(dá)峰值,而后下降,24h恢復(fù)到采毛前水平;藥物拔毛組采毛后即顯著上升,8h達(dá)峰值,后下降,48h恢復(fù)采毛前水平。3組采毛前無(wú)差異(P>0.05),采毛后0~4h拔毛兩組均顯著高于剪毛組(P<0.05),但48h3組無(wú)明顯差異(P>0.05)。對(duì)于urea,剪毛組采毛前后無(wú)明顯變化;直接拔毛組和藥物拔毛組采毛前、后urea水平變化趨勢(shì)相似,采毛后均上升,4h即達(dá)峰值,而后下降,并分別在24h和48h恢復(fù)到采毛前水平,其中藥物拔毛組變化幅度稍大。采毛前3組urea水平無(wú)差異(P>0.05),采毛后4~8h拔毛兩組均顯著高于剪毛組(P<0.05),4h藥物拔毛組又顯著高于直接拔毛組(P<0.05),其他時(shí)期3組間無(wú)差異(P>0.05)。3討論3.1剪毛應(yīng)激對(duì)家兔生化指標(biāo)的影響血清總蛋白包括血清白蛋白和球蛋白。血清白蛋白由肝臟實(shí)質(zhì)細(xì)胞合成分泌,它具有維持血漿膠體滲透壓、促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)運(yùn)輸和提供蛋白質(zhì)來(lái)源等廣泛生理功能;血清總蛋白和白蛋白水平變化反映了機(jī)體肝臟功能狀況和機(jī)體免疫狀態(tài)。巨向紅等發(fā)現(xiàn),熱應(yīng)激對(duì)巴馬香豬總蛋白、白蛋白沒(méi)有顯著影響。汪海波研究復(fù)合慢性應(yīng)激對(duì)家兔生化指標(biāo)的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)總蛋白、球蛋白和白蛋白均無(wú)明顯變化。趙宗勝等研究發(fā)現(xiàn),荷斯坦奶牛血液蛋白水平雖有低溫耐受性,卻因熱應(yīng)激影響而顯著上升。國(guó)外研究發(fā)現(xiàn),剪毛應(yīng)激可能造成卡拉庫(kù)爾母羊血清總蛋白水平升高。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),3種采毛方式均刺激總蛋白的顯著上調(diào),也可以引起白蛋白水平上升,其中藥物拔毛組在采毛后8~48h顯著高于采毛前,這與運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)仔豬和夏南牛血清蛋白影響結(jié)果相似。其原因可能是長(zhǎng)毛兔到采毛期末需要生理性的脫毛,人工采毛有助長(zhǎng)毛兔換毛并刺激了血清蛋白水平上升,有利兔體康復(fù)并為進(jìn)入下一次兔毛生長(zhǎng)做準(zhǔn)備。綿羊妊娠后期營(yíng)養(yǎng)限飼影響胎兒發(fā)育因而補(bǔ)償提高了胎兒總蛋白水平(P>0.05)。李振研究表明,復(fù)合中藥方可改善獺兔熱應(yīng)激條件下采食量、生長(zhǎng)速度,增加皮張面積和被毛密度,同時(shí)提高了總蛋白、白蛋白免疫球蛋白和甲狀腺素水平?？梢?jiàn)血清總蛋白和白蛋白水平的上升伴隨著家兔生產(chǎn)性狀良好表現(xiàn),因而有益毛發(fā)再生。3.2地塞米松和拔毛應(yīng)激對(duì)tbili的影響血清肌酐反映了腎臟腎小球的濾過(guò)能力,當(dāng)腎臟損傷厲害時(shí),血清肌酐明顯上升。本研究發(fā)現(xiàn),長(zhǎng)毛兔采毛后,肌酐急性上升,但均較快恢復(fù),可能采毛應(yīng)激只是對(duì)長(zhǎng)毛兔腎臟等產(chǎn)生急性可恢復(fù)性影響;然而藥物拔毛組采毛前肌酐水平即低于其他兩組,可能受到地塞米松抑制作用。早期已有研究發(fā)現(xiàn),地塞米松可抑制下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)活動(dòng)8~14h,但不超過(guò)24h?？偰懠t素包括直接膽紅素和間接膽紅素,主要為紅細(xì)胞血紅蛋白代謝產(chǎn)物,血清中三者水平變化反映了動(dòng)物肝臟和膽道的病變狀況和黃疸類(lèi)型。白衛(wèi)兵等利用地塞米松模擬對(duì)日本大白兔應(yīng)激,結(jié)果發(fā)現(xiàn),高劑量地塞米松可導(dǎo)致TBILI上升,應(yīng)用14d和21d其含量明顯升高,也顯著高于對(duì)照組,同時(shí)其肝重量和肝重比大幅提高。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),對(duì)于TBILI,只有藥物拔毛組在采毛后明顯上升,采毛后48h也沒(méi)有恢復(fù),而且采毛應(yīng)激后顯著高于其他兩組;對(duì)于DBILI,藥物拔毛組先上升后下降,而且在采毛后24h內(nèi)均顯著高于其他兩組,其他兩組均先下降后升高,表明拔毛和剪毛主要對(duì)直接膽紅素產(chǎn)生影響,而且地塞米松對(duì)總膽紅素和直接膽紅素均有影響,并且可能與拔毛應(yīng)激有聯(lián)合效應(yīng)。根據(jù)前期兔場(chǎng)調(diào)研發(fā)現(xiàn),如果地塞米松的應(yīng)用時(shí)間較長(zhǎng)或量較大時(shí),家兔常出現(xiàn)腹瀉、抗病力下降現(xiàn)象,因而在長(zhǎng)毛兔生產(chǎn)中應(yīng)慎重使用,或應(yīng)用其他脫毛劑。尿素是動(dòng)物體內(nèi)蛋白氮代謝主要終產(chǎn)物,尿酸是嘌呤、核酸及核蛋白代謝產(chǎn)物,兩者是體內(nèi)蛋白代謝較為準(zhǔn)確的反映指標(biāo)。Amici等研究發(fā)現(xiàn),短時(shí)熱應(yīng)激使得新西蘭白兔血漿尿素水平0.5h內(nèi)上升,而30h后又顯著下降。與之相似,本研究拔毛應(yīng)激可導(dǎo)致尿素水平急性上升而后下降恢復(fù)到采毛前水平,而剪毛對(duì)尿素水平影響不大。谷子林研究發(fā)現(xiàn),多種飼料因素可導(dǎo)致腸道應(yīng)激而發(fā)生腹瀉,其血液尿素氮等顯著升高,飼喂低纖維日糧(7%~9%)的試驗(yàn)兔尿素氮的水平略高于高纖維日糧(12%~14%)的試驗(yàn)兔,可能是腹瀉應(yīng)激引起蛋白質(zhì)分解的增加。但巨向紅等研究發(fā)現(xiàn),巴馬香豬熱應(yīng)激時(shí)血尿素氮(BUN)呈下降趨勢(shì)(P>0.05),可能不同應(yīng)激或物種存在差異。而本研究采毛應(yīng)激類(lèi)似于外傷應(yīng)激加束縛應(yīng)激,與環(huán)境溫度應(yīng)激機(jī)制可能相異。本研究還發(fā)現(xiàn),拔毛可顯著增加采毛當(dāng)天血清尿酸水平,而不受剪毛影響。目前,應(yīng)激對(duì)哺乳動(dòng)物血清尿酸水平影響研究少見(jiàn),可能是因?yàn)樗饕獮轼B(niǎo)類(lèi)代謝物,難受關(guān)注。王玉愛(ài)研究發(fā)現(xiàn),骨折外傷應(yīng)激可導(dǎo)致人體血液尿酸水平顯著下降,與本研究結(jié)果相反,其原因可能為腎臟重吸收功能障礙,有待進(jìn)一步研究。4其他研究的進(jìn)一步驗(yàn)證本研究分析了不同采毛方式對(duì)長(zhǎng)毛兔血清蛋白和含氮代謝物的影響,篩選獲得采毛應(yīng)激指標(biāo)血清總蛋白和肌酐,拔毛應(yīng)激指標(biāo)尿素和尿酸,地塞米松影響指標(biāo)肌酐、白蛋白、總膽紅素和直接膽紅素。本研究可為闡明動(dòng)物采毛方式應(yīng)激機(jī)制奠定基礎(chǔ),為減少和提前預(yù)防采毛方式應(yīng)激提供參考。當(dāng)然,本文結(jié)果只是初步的,需要其他研究相互佐證,再者研究還可以進(jìn)一步拓展,第一,雖然本研究中大部分指標(biāo)在48h內(nèi)恢復(fù)了正常水平,但試驗(yàn)時(shí)間也可以更長(zhǎng)一