細(xì)胞培養(yǎng)基本知識(shí) 基本知識(shí)1培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)特點(diǎn)和生長(zhǎng)過(guò)程

培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)特點(diǎn)和生長(zhǎng)過(guò)程2023/10/2712023/10/272一、細(xì)胞的生長(zhǎng)特點(diǎn)

1、貼附并伸展是體外培養(yǎng)細(xì)胞的基本生長(zhǎng)特點(diǎn)；大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞在體內(nèi)、體外均附著底物生長(zhǎng)。2023/10/272023/10/273貼附前：呈球形；貼附后：細(xì)胞伸展，呈現(xiàn)各種細(xì)胞形態(tài)；影響細(xì)胞貼附和伸展的因素附著因子、生長(zhǎng)因子、離子作用、溫度、培養(yǎng)液的流動(dòng)速度等；特別是小牛血清和鈣、鎂離子影響更為明顯。2023/10/272023/10/274貼附過(guò)程吸附：貼附因子先吸附于底物接觸：懸浮細(xì)胞與底物附著貼壁伸展：伸展成特定形態(tài)2023/10/272023/10/275接觸抑制：指一個(gè)細(xì)胞被其他細(xì)胞圍繞無(wú)處可去而發(fā)生接觸時(shí)，細(xì)胞不再移動(dòng)，接觸區(qū)域細(xì)胞膜皺褶樣運(yùn)動(dòng)停止的現(xiàn)象。正常細(xì)胞：接觸抑制保證培養(yǎng)過(guò)程中不重疊。轉(zhuǎn)化和腫瘤細(xì)胞：無(wú)接觸抑制現(xiàn)象，能繼續(xù)移動(dòng)和增殖，細(xì)胞發(fā)生堆積。2023/10/272、接觸抑制2023/10/2762023/10/272023/10/2772023/10/272023/10/2782023/10/27

不受正常生長(zhǎng)調(diào)控系統(tǒng)的控制，能持續(xù)的分裂與增殖。

許多癌細(xì)胞具有變形運(yùn)動(dòng)能力，并且能產(chǎn)生酶類，使血管基底層和結(jié)締組織穿孔，使它向其它組織遷移2023/10/279(二)細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖過(guò)程1、單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞周期細(xì)胞周期：一個(gè)細(xì)胞分裂結(jié)束后形成的細(xì)胞至下一次分裂結(jié)束形成兩個(gè)子細(xì)胞的這段時(shí)期。間期+分裂期（1）間期（G1，S，G2）:大多數(shù)細(xì)胞處于間期，間期時(shí)間長(zhǎng)，DNA合成。G1:DNA合成前期，為DNA和蛋白質(zhì)合成、中心體復(fù)制準(zhǔn)備。S:DNA合成期，易受致癌物影響。G2：DNA合成后期

，進(jìn)行RNA和蛋白質(zhì)合成。2023/10/272023/10/2710（2）分裂期:M期（前，中，后，末）：時(shí)間短，主要是分裂。細(xì)胞周期=間期+M期=G1+S+G2+M2023/10/272023/10/2711單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞周期2023/10/272023/10/27122、細(xì)胞系的生長(zhǎng)過(guò)程細(xì)胞系：原代培養(yǎng)經(jīng)首次傳代成功后即成細(xì)胞系。正常細(xì)胞體外培養(yǎng)有壽命期限，大致分三個(gè)階段：2023/10/272023/10/2713(1)原代培養(yǎng)期---亦稱初代培養(yǎng)期新鮮組織從體內(nèi)取出接種培養(yǎng)到第一次傳代的階段,一般持續(xù)1~4周。特點(diǎn)：原代細(xì)胞培養(yǎng)通常為異質(zhì)性細(xì)胞獨(dú)立生存能力差多呈二倍體核型更能代表其來(lái)源組織的細(xì)胞類型及組織特異性，是藥物檢測(cè)的很好實(shí)驗(yàn)工具。2023/10/272023/10/2714(2)傳代期原代細(xì)胞長(zhǎng)滿后，分至多個(gè)容器培養(yǎng)。此期的持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)，一般為30—50代；能維持二倍體核型，特性穩(wěn)定；一般在原代、5代、10代凍存。若持續(xù)反復(fù)傳代，將逐漸失去二倍體性，增殖變慢，停止分裂，進(jìn)入衰退期。2023/10/272023/10/2715(3)衰退期細(xì)胞雖存活，但增殖基本停止，細(xì)胞形態(tài)輪廓增強(qiáng)，發(fā)生衰退、死亡。有限生長(zhǎng)細(xì)胞系:細(xì)胞系的壽命是有限的，只能維持一定的期限。無(wú)限生長(zhǎng)細(xì)胞系：細(xì)胞在第二期末或第三期初通過(guò)所謂“危機(jī)期”(crisis)；獲得不死性；具有持久或無(wú)限增殖的能力；失去接觸抑制。2023/10/272023/10/27163.每代細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程細(xì)胞的一代：從接種開始到下一次再傳代接種的時(shí)間。每代細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程分三個(gè)階段1)滯留期(latentphase)：生長(zhǎng)緩慢2)指數(shù)生