細(xì)胞的通透性

動(dòng)物細(xì)胞融合一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私馊苎F(xiàn)象及其發(fā)生機(jī)制。了解細(xì)胞膜的滲透性及各類物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的速度。二、 實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞膜是細(xì)胞與環(huán)境進(jìn)行物質(zhì)的選擇通透性屏障，是一種半透膜，可選擇性地控制物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞。將紅細(xì)胞放在低滲溶液中，水分子大量滲透到細(xì)胞內(nèi)，可使細(xì)胞脹破，血紅蛋白釋放到介質(zhì)中，溶液有不透明的紅細(xì)胞懸液變?yōu)榧t色透明的血紅蛋白溶液，這種現(xiàn)象稱為溶血(hemolysis)。由于溶質(zhì)滲透入細(xì)胞的速度不同，溶血時(shí)間不同，因此，發(fā)生溶血現(xiàn)象所需的時(shí)間長短可作為測量物質(zhì)進(jìn)入紅細(xì)胞速度的一種指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)選用紅細(xì)胞作為細(xì)胞膜滲透性德實(shí)驗(yàn)材料，將其放入不同的介質(zhì)溶液中，觀察紅細(xì)胞的變化。有時(shí)在某些等滲溶液中，由于細(xì)胞膜對(duì)各種溶質(zhì)的通透性不同，膜兩側(cè)的通透性發(fā)生改變，發(fā)生溶血。溶血后，膜發(fā)生皺縮，體積變?yōu)?/3。TritonX-100抽提膜蛋白，改變細(xì)胞膜活性。P=KD/t三、 實(shí)驗(yàn)材料材料：雞血試劑：0.85%氯化鈉溶液，0.0085%氯化鈉溶液，0.8mol/L甲醇，0.8mol/L丙三醇，6%葡萄糖溶液，2%TritonX-100器材：小試管9只，試管架，膠頭滴管，顯微鏡，載玻片，蓋玻片，離心機(jī)四、 實(shí)驗(yàn)步驟取雞血6ml，加0.85%氯化鈉溶液4ml，在1000r/min條件下離心5min(RBC壓積量應(yīng)不少于0.6ml，否則應(yīng)補(bǔ)加雞血)將上述離心的紅細(xì)胞按沉淀量配成50%濃度，總體積應(yīng)不少于1.2ml每組取6支試管分別加入如下溶液各3ml0.85%氯化鈉溶液0.0085%氯化鈉溶液0.8mol/L甲醇0.8mol/L丙三醇6%葡萄糖溶液2%TritonX-100向上述6試管中分別加入50%紅細(xì)胞懸液1滴，用吸管吹吸均勻。觀察各管是否有溶血現(xiàn)象發(fā)生(觀察時(shí)間一小時(shí))。記錄溶血時(shí)間并于顯微鏡下觀察各溶液中細(xì)胞。五、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯微鏡下(10*40)；宏觀對(duì)比(本組試劑與0.85%氯化鈉溶液)(2)0.0085%氯化鈉溶液(3)0.8mol/L甲醇(4)0.8mol/L丙三醇(6)2%TritonX-100編號(hào)溶液類型是否溶血溶血時(shí)間結(jié)果分析10.85%氯化鈉溶液不溶血顏色暗紅，渾濁，不透明，細(xì)胞部分仍存活，在運(yùn)動(dòng)狀態(tài)20.0085%氯化鈉完全溶血3s溶液變?yōu)轷r紅透明，細(xì)胞完全溶血速度較快30.8mol/L甲醇完全溶血5s細(xì)胞發(fā)生溶血，體積縮小40.8mol/L丙三醇部分溶血1min細(xì)胞溶血速度較慢，細(xì)胞形狀變化較小56%葡萄糖部分溶血30min細(xì)胞變化較小，基本維持正常形溶液態(tài)66%TritonX-100完全溶血20s細(xì)胞溶血，顏色鮮艷，有一定渾濁，細(xì)胞形態(tài)變化較大七、討論與結(jié)論1、 先做溶血速度較慢的組別，再做速度較快的組別利于節(jié)約時(shí)間。2、 細(xì)胞通透性與溶血時(shí)間成反比，所以通透性由大到小為：0.0085%氯