流感嗜血桿菌

嗜血桿菌（學(xué)名Haemophilusinfluenzae）是流感嗜血桿菌的簡(jiǎn)稱，前稱費(fèi)佛氏桿菌（或譯拜菲爾氏菌）或流感桿菌，屬孤菌科嗜血桿菌屬。是一種沒有運(yùn)動(dòng)力的革蘭氏陰性桿菌。嗜血桿菌是1892年由費(fèi)佛博士在流行性感冒的瘟疫中發(fā)現(xiàn)。嗜血桿菌普通都是好氧生物，但能夠成長(zhǎng)為兼性厭氧生物。流感嗜血桿菌最初被誤認(rèn)為是流行性感冒的病因，但直至1933年，當(dāng)發(fā)現(xiàn)流行性感冒的病毒性病原后，才消除了這種誤解。但是，流感嗜血桿菌仍是會(huì)造成其它不同種類的病癥。因其稀少的基因體，流感嗜血桿菌是第一種排列全數(shù)基因體，而又能自由生存的生物。它的基因體包含了1,830,140的DNA堿基對(duì)及1740個(gè)基因。流感嗜血桿菌的基因排序計(jì)劃由基因組研究所策劃，于1995年完畢及發(fā)表于《科學(xué)》雜志上。流感嗜血桿菌生長(zhǎng)所需的V因子為NADH，X因子為血紅素，凝血因子V和X均為肝臟產(chǎn)生的球蛋白。流感嗜血桿菌需要Х、Ⅴ兩種因子，Ⅹ因子是高鐵血紅素，Ⅴ因子是輔酶Ⅰ或輔酶Ⅱ，兩者為細(xì)菌呼吸所必需.比較常見的需要V因子和X因子的細(xì)菌是嗜血桿菌屬的細(xì)菌，如流感嗜血桿菌、杜克雷嗜血桿菌（軟下疳的病原體)、副流感嗜血桿菌、溶血嗜血桿菌、副溶血嗜血桿菌、嗜泡沫嗜血桿菌、副嗜泡沫嗜血桿菌、埃及嗜血桿菌等.我們始終在用英國(guó)Oxoid公司的V因子、X因子、V+X因子紙片，尚有Optochin紙片，質(zhì)量較好的。ChocolateIIAgar第二巧克力瓊脂生長(zhǎng)因子(growthfactor)是一類對(duì)微生物正常代謝必不可少且不能用簡(jiǎn)樸的碳源或氮源自行合成的有機(jī)物。它的需要量普通極少。廣義的生長(zhǎng)因子除了維生素外，還涉及堿基、卟啉及其衍生物、甾醇、胺類、C4～C6的分枝或直鏈脂肪酸，以及需要量較大的氨基酸；而狹義的生長(zhǎng)因子普通僅指維生素。生長(zhǎng)因子雖是一種重要的營(yíng)養(yǎng)要素，但它與碳源、氮源和能源不同，并非任何一種微生物都須從外界吸取的。多個(gè)微生物與生長(zhǎng)因子的關(guān)系可分下列幾類：(1)生長(zhǎng)因子自養(yǎng)型微生物(auxoautotrophs)多數(shù)真菌、放線菌和不少細(xì)菌，如E．coli(大腸桿菌)等都是不需要外界提供生長(zhǎng)因子的生長(zhǎng)因子自養(yǎng)型微生物。(2)生長(zhǎng)因子異養(yǎng)型微生物(auxoheterotrophs)它們需要多個(gè)生長(zhǎng)因子，如乳酸細(xì)菌、多個(gè)動(dòng)物致病菌、原生動(dòng)物和支原體等(表5-5)。例如，普通的乳酸菌都需要多個(gè)維生素；許多微生物及其營(yíng)養(yǎng)缺點(diǎn)型(突變株)都需要不同的嘌呤、嘧啶堿基；Haemophilusinfluenzae(流感嗜血桿菌)需要卟啉及其衍生物作為其生長(zhǎng)因子；支原體常需要甾醇；Haemophilusparahaemolyti-cus(副溶血嗜血菌)需要胺類；某些瘤胃微生物需要C4～C6分枝或直鏈脂肪酸；某些厭氧菌如Bacteroidesmelaninogenicus(產(chǎn)黑素?cái)M桿菌)需要維生素K和氯高鐵血紅素，等等。生長(zhǎng)因子異養(yǎng)型的微生物可用作維生素等生長(zhǎng)因子生物測(cè)定時(shí)的實(shí)驗(yàn)菌。(3)生長(zhǎng)因子過(guò)量合成微生物有些微生物在其代謝活動(dòng)中，會(huì)分泌出大量的維生素等生長(zhǎng)因子，因此，它們能夠作為維生素等的生產(chǎn)菌。最突出的例子是生產(chǎn)維生素B2的Eremothe-ciumashbya(阿舒假囊酵母，其B2產(chǎn)量可達(dá)2.5g/L發(fā)酵液)和Ashbyagossypii(棉阿舒囊霉)；生產(chǎn)維生素B12的Propionibacteriumshermanii(謝氏丙酸桿菌)、某些鏈霉菌(如Streptomycesolivaceus[橄欖色鏈霉菌，3.3mg/L]，S．griseus[灰色鏈霉菌，0.3mg/L])和產(chǎn)甲烷菌等。在配制微生物培養(yǎng)基時(shí)，如果配制的是天然培養(yǎng)基(詳后)，則可加入富含生長(zhǎng)因子的原料——酵母膏(yeastextract)、玉米漿(cornsteepliquor)、肝浸液(liverinfusion)、麥芽汁(maltextract)或其它新鮮的動(dòng)植物組織浸液(表5-6，5-7)；如果配制的是組合培養(yǎng)基，則可加入復(fù)合維生素溶液Thestoredisolatesweregrownovernightonchocolateagarplates(BDDiagnostics,Sparks,MD)at37Cwith5%CO2inahumidenvironment.H.in?uenzaeisolates,maintainedwithMinimalpassaging,werestoredinskimmilkat80°CandwereculturedfortestingonchocolateIIagar(BDDiagnostics)at37°Cinthepresenceof5%CO2.衛(wèi)星現(xiàn)象:當(dāng)流感嗜血桿菌和金黃色葡萄球菌在血瓊脂平板上共同培養(yǎng)時(shí)由于金黃色葡萄球菌能合成較多的V因子，能增進(jìn)流感嗜血桿菌生長(zhǎng)，故在金黃色葡萄球菌菌落周邊生長(zhǎng)的流感嗜血桿菌菌落較大，距離金黃色葡萄球菌菌落較遠(yuǎn)的流感嗜血桿菌菌落越小，此為“衛(wèi)星現(xiàn)象”。

X因子、V因子生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)：在以酵母浸出粉、牛肉浸出粉、酪蛋白水解物為基礎(chǔ)培養(yǎng)基上，未加X因子和V因子時(shí)，流感嗜血桿菌不生長(zhǎng)，將分別浸有X因子V因子的紙片貼于該基礎(chǔ)培養(yǎng)基上，單貼有X因子或單貼有V因子紙片的平碟流感嗜血桿菌不生長(zhǎng)，同時(shí)貼有X因子和V因子紙片的平碟，流感嗜血桿菌可生長(zhǎng)，在兩紙片中線附近菌落較大。

此兩項(xiàng)實(shí)驗(yàn)均為證明培養(yǎng)基中需含有X、V因子，流感嗜血桿菌才干生長(zhǎng)，本質(zhì)上沒有區(qū)別。衛(wèi)星現(xiàn)象（satellitephenomenon）概念：當(dāng)將金黃色葡萄球菌與流感嗜血桿菌在同一血瓊脂平板上共同培養(yǎng)時(shí)，由于前者能合成較多的V因子，增進(jìn)后者生長(zhǎng)，故在金黃色葡萄球菌菌落周邊生長(zhǎng)的流感嗜血桿菌菌落較大，距離越遠(yuǎn)的菌落越小，此現(xiàn)象稱為“衛(wèi)星現(xiàn)象”（satellitephenomenon）辦法：挑取可疑菌落密涂劃種于血平板上和M-H平板上，再將金黃色葡萄球菌點(diǎn)種或劃種于其上，35℃孵育24h成果：如葡萄球菌菌落鄰近處被檢菌的菌落較大，遠(yuǎn)離葡萄球菌落鄰近處被檢菌的菌落較大，遠(yuǎn)離葡萄球菌菌落處的菌落小或不生長(zhǎng)，即衛(wèi)星實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性注意點(diǎn)：在血平板上點(diǎn)種葡萄球菌時(shí)，X、V因子都含有；在M-H平板上接種葡萄球菌時(shí)，只含有V因子；流感嗜血桿菌生長(zhǎng)需要X和V因子；副流感嗜血桿菌生長(zhǎng)只需要V因子；意義：能在M-H平板上呈衛(wèi)星生長(zhǎng)的菌為副流感嗜血桿菌不能在M-H平板上呈衛(wèi)星生長(zhǎng)的菌為流感嗜血桿菌苛養(yǎng)菌是一大類對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)規(guī)定較苛刻的細(xì)菌，在普通環(huán)境中不能或難以生長(zhǎng)。體外培養(yǎng)需需添加特殊因子或其它營(yíng)養(yǎng)成分。常見苛養(yǎng)菌有嗜血桿菌屬、鮑特菌屬、肺炎鏈球菌、淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌、卡他莫拉菌等。2重要苛養(yǎng)菌介紹嗜血桿菌屬（1）分類與人類親密有關(guān)的嗜血桿菌有8種，比較常見的是流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌。（2）細(xì)菌特性嗜血桿菌培養(yǎng)時(shí)必須供應(yīng)X、V因子，新鮮血液含X、V因子，但V因子處在克制狀態(tài)，必須將其加熱80℃～90℃才干釋放出來(lái)，故巧克力瓊脂適合于嗜血桿菌生長(zhǎng)。不同的嗜血桿菌對(duì)X、V因子需求有所不同。將流感嗜血桿菌與金黃色葡萄球菌共同培養(yǎng)后，后者合成較多V因子，可增進(jìn)流感嗜血桿菌生長(zhǎng)，靠近金黃色葡萄球菌的流感嗜血桿菌菌落較大，反之，菌落較小，稱之為衛(wèi)星現(xiàn)象。（3）臨床意義嗜血桿菌常借居于正常人上呼吸道，可引發(fā)上呼吸道、泌尿生殖道感染、腦膜炎、中耳炎、心內(nèi)膜炎、菌血癥。流感嗜血桿菌重要引發(fā)原發(fā)性化膿感染和繼發(fā)性感染，其莢膜b型株毒力最強(qiáng)。杜克雷嗜血桿菌為軟下疳病原菌。（4）微生物檢查采集腦脊液、血液、膿液、痰液、咽拭子等標(biāo)本進(jìn)行檢查，因苛養(yǎng)菌不易存活，標(biāo)本宜保持濕潤(rùn)，及時(shí)送檢血平板（1）成分：普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂（或哥倫比亞瓊脂），脫纖維羊血（2）制法：取所需要量的普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂（或哥倫比亞瓊脂），加蒸餾水溶解后，高壓滅菌。冷卻至50℃，加入一定量（5%）的羊血，傾注平板。（3）用途：適于各類細(xì)菌的生長(zhǎng)。巧克力平板（1）成分：普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂（或哥倫比亞瓊脂），氯化血紅素，萬(wàn)古霉素，輔酶A（2）制法：取所需要量的普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂（或哥倫比亞瓊脂），加蒸餾水溶解后，高壓滅菌。冷卻至60℃左右加入一定量的羊血，置85℃水浴中搖動(dòng)10-15分鐘，冷卻到50℃左右后加入對(duì)應(yīng)量的萬(wàn)古霉素和輔酶A，搖勻后傾注平板。（3）用途：除能夠分離奈瑟菌，嗜血桿菌外，由于加入了萬(wàn)古霉素，可克制絕大多數(shù)的革蘭陽(yáng)性菌的生長(zhǎng)，在分離培養(yǎng)上含有重要意義，而非樓主所說(shuō)的可用血平板來(lái)替代。血液中有V，X因子是位于紅細(xì)胞中的，普通細(xì)菌不能運(yùn)用，輕微的加熱使紅細(xì)胞破壞釋放到細(xì)胞外方可運(yùn)用。普通來(lái)說(shuō)，臨床上分離細(xì)菌用血平板可滿足大多數(shù)細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)規(guī)定，因此普通首選血平板分離培養(yǎng)臨床標(biāo)本，但是由于需要X因子和V因子的流感嗜血桿菌在血平板上不能生長(zhǎng)。因此要分離到流感嗜血桿菌或其它嗜血桿菌，必須接種巧克力平板。這也就是說(shuō)，在巧克力平板上生長(zhǎng)的細(xì)菌比血平板要多，因此巧克力平板固然能夠替代血平板作為分離培養(yǎng)用，其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值比血平板要高些。有誰(shuí)碰到過(guò)在血平板上衛(wèi)星實(shí)驗(yàn)陰性，而在瓊脂平板上衛(wèi)星實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性？bjyy老師：這個(gè)有可能！嗜血桿菌須在含有新鮮血液（因其含有X因子和V因子）的培養(yǎng)基（血平板，事實(shí)上重要是巧克力平板）才干生長(zhǎng)，在普通瓊脂平板中是不能生長(zhǎng)的（除非加入上述兩因子）。在血平板和普通瓊脂平板（已加入X因子和V因子）上進(jìn)行衛(wèi)星實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)兩種不同的成果，我想：血平板所產(chǎn)生的V因子需要經(jīng)金黃色葡萄球菌的合成。而普通瓊脂平板中的V因子是現(xiàn)成的，不需要經(jīng)金黃色葡萄球菌合成的這一種環(huán)節(jié)，違反了衛(wèi)星實(shí)驗(yàn)的原理。因此在瓊脂平板上進(jìn)行的事實(shí)上并不是衛(wèi)星實(shí)驗(yàn)。在普通瓊脂平板上（已加入X因子和V因子），為了生長(zhǎng)發(fā)育，兩種細(xì)菌展開了競(jìng)爭(zhēng)培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)的過(guò)程，在金黃色葡萄球菌菌落附近，由于金黃色葡萄球菌勢(shì)力強(qiáng)大，競(jìng)爭(zhēng)力強(qiáng)，因此嗜血桿菌生長(zhǎng)受到克制，菌落細(xì)小，越遠(yuǎn)離金黃色葡萄球菌菌落其菌落（嗜血桿菌）越大。形成了假的衛(wèi)星實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象．請(qǐng)指教．謝謝！萬(wàn)古霉素巧克力瓊脂平板（培養(yǎng)嗜血桿菌）普通巧克力平板與血平板的區(qū)別是：巧克力平板配制時(shí)在加入血液后再次加溫至80度15分鐘，血紅素及輔酶釋放出來(lái)，RBC破裂，此平板適合某些需特殊生長(zhǎng)因子細(xì)菌生長(zhǎng)；但在此過(guò)程中同樣破壞血液中的某些成分，可能會(huì)影響某些細(xì)菌的生長(zhǎng)，因此應(yīng)當(dāng)有在血平板生長(zhǎng)良好的，而在巧克力平板生長(zhǎng)不好的細(xì)菌；現(xiàn)在某些專用淋球菌平板，加入萬(wàn)古、多粘菌素等抗生素，克制了大量雜菌生長(zhǎng)，此平板與血平板相差遠(yuǎn)矣！1892年，費(fèi)佛博士在流行性感冒的瘟疫中發(fā)現(xiàn)了流感嗜血菌，這種微生物是一種沒有運(yùn)動(dòng)力的革蘭氏陰性桿菌。它們普通都是好氧生物，但能夠成長(zhǎng)為兼性厭氧生物。流感嗜血桿菌最初被誤認(rèn)為是流行性感冒的病因，但直至1933年，當(dāng)發(fā)現(xiàn)流行性感冒的病毒性病原后，才消除了這種誤解。。1995年，克雷格·文特爾(CraigVenter)、史密斯(HamiltonSmith)、弗雷澤(ClaireFraser)以及其在美國(guó)遺傳學(xué)研究院(TIGR)的同事們闡明了首個(gè)微生物――-流感嗜血桿菌的全基因組序列。1998年，克雷格·文特爾在帕金·埃爾默公司3.3億美元投資的支持下，組建了塞萊拉公司——一種私營(yíng)性質(zhì)的基因研究機(jī)構(gòu)。文特爾“狂妄地”聲稱，要在3年內(nèi)完畢人類基因組的序列測(cè)定，目的是搶在“國(guó)際人類基因組計(jì)劃”前完畢，方便將人類基因組圖譜申請(qǐng)成專利，靠壟斷人類基因組信