核酸化學(xué)-核酸的性質(zhì)

4.分子雜交1.在變性的DNA溶液中加入外源DNA單鏈分子或RNA單鏈分子（與原DNA具有同源性），去掉變性條件后復(fù)性形成雙螺旋結(jié)構(gòu)的過(guò)程。2.這樣形成的新分子稱(chēng)為雜交DNA分子。3.利用核酸雜交可檢測(cè)特定的核苷酸片段或研究同源性等。分子雜交探針：用于雜交的異源DNA或RNA序列，其核苷酸序列是人工特定的、已知的，經(jīng)放射性標(biāo)記的一條鏈。核酸的變性、復(fù)性和雜交變性（加熱）探針雜交（緩慢冷卻）復(fù)性（緩慢冷卻）分子雜交的種類(lèi)SouthernBlot：DNA-DNA雜交NorthernBlot：DNA-RNA雜交WesternBlot：抗原-抗體進(jìn)行雜交原位雜交：活體組織上進(jìn)行雜交，顯出熒光DNA芯片技術(shù)DNA分子限制片段限制性酶切割瓊脂糖電泳轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上與放射性標(biāo)記DNA探針雜交放射自顯影帶有DNA片段的凝膠凝膠濾膜用緩沖液轉(zhuǎn)移DNA吸附有DNA片段的膜DNA芯片技術(shù)簡(jiǎn)介

DNA芯片(DNAchip)技術(shù)是采用寡核苷酸原位合成或顯微打印手段，將數(shù)以萬(wàn)計(jì)的DNA探針片段有序地固化于支持物表面上，產(chǎn)生二維DNA探針陣列，然后與標(biāo)記的樣品進(jìn)行雜交，通過(guò)檢測(cè)雜交信號(hào)來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)生物樣品的快速、并行、高效地檢測(cè)或診斷。由于常用硅芯片作為固相支持物，且在制備過(guò)程中運(yùn)用了計(jì)算機(jī)芯片的制備技術(shù)，所以稱(chēng)為DNA芯片技術(shù)。沉降特性蔗糖密度梯度超速離心是制備RNA的常用方法之一，利用物質(zhì)在不同梯度溶液中的沉降速度差別進(jìn)行分離，屬于區(qū)帶超速離心法。氯化銫密度梯度離心是分別DNA常用的方法，它在離心場(chǎng)中可自行調(diào)節(jié)形成濃度梯度，并能保持穩(wěn)定。此法稱(chēng)為等密度梯度離心。沉降系數(shù)（S）

生物大分子在單位離心力場(chǎng)作用下的沉降速度稱(chēng)為沉降系數(shù)。即沉降系數(shù)是微顆粒在離心力場(chǎng)的作用下，從靜止?fàn)顟B(tài)到達(dá)極限速度所需要的時(shí)間。其單位用Svedberg，即s表示，s=1×10-13秒。

沉降系數(shù)（S）與分子量（M）的關(guān)系M=RTsD(1-

)Svederg方程:第六節(jié)核酸的性質(zhì)及提取一、一般物理性質(zhì)二、核酸的水解三、兩性解離四、紫外吸收性質(zhì)五、穩(wěn)定性六、變性七、復(fù)性與雜交八、沉降特性及沉降系數(shù)九、核酸的提取一、一般物理性質(zhì)1.DNA白色纖維狀固體，RNA白色粉末狀固體，都微溶于水，不溶于乙醇，因此常用乙醇來(lái)沉淀DNA；DNA溶液黏度大于RNA。2.DNA難溶于0.14mol/L的NaCl溶液，可溶于1—2mol/L的NaCl溶液，RNA則相反，可據(jù)此分離二者。3.加熱條件下，

D－核糖＋濃鹽酸＋苔黑酚綠色670nm

D－2－脫氧核糖＋酸＋二苯胺藍(lán)紫色595nm二、核酸的水解核酸分子中的磷酸二酯鍵可在酸或堿性條件下水解切斷。DNA和RNA對(duì)酸或堿的耐受程度有很大差別。室溫條件下，DNA在堿中變性，但不水解，RNA水解。在細(xì)胞內(nèi)核酸分子受DNA酶作用。三、兩性解離核酸含酸性的磷酸基團(tuán)，又含弱堿性的堿基，為兩性電解質(zhì)，可發(fā)生兩性解離；核酸相當(dāng)于多元酸，pH大于4時(shí)，呈陰離子狀態(tài)；等電點(diǎn)五、DNA的穩(wěn)定性1.DNA的溶液呈粘稠狀，但實(shí)際上DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)僵直而有剛性，易斷成碎片，這也是