橘小實(shí)蠅幼蟲人工飼料配方篩選試驗(yàn)

橘小實(shí)蠅幼蟲人工飼料配方篩選試驗(yàn)

幾十年來，國內(nèi)外關(guān)于橘生豆、廣州白鼠、國際灰鼠和瓜狀蒼蠅等重要檢疫害蟲以及昆蟲人工飼料的報(bào)道有很多（王宗凱，1968；michiletal.1965；梁愛兵，1968；sunka等人，1969；西格爾和莫洛1985；vargo，1988；王燕年，1990；高地，2005；袁勝勇等，2006；李立立，2009）。實(shí)蠅人工飼養(yǎng)繁殖技術(shù)的長足進(jìn)步,逐步實(shí)現(xiàn)常年持續(xù)不斷地提供大量同一發(fā)育階段(蟲態(tài)或蟲齡)的供試蟲源,為深入探討其生物學(xué)和生態(tài)學(xué)、綜合防治及果蔬產(chǎn)品檢疫除害處理等打下了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ),有力地推動了相關(guān)學(xué)科領(lǐng)域的研究進(jìn)展,促進(jìn)了各國果蔬種植業(yè)及其農(nóng)產(chǎn)品進(jìn)出口國際貿(mào)易的發(fā)展。然而,由于飼養(yǎng)目的和規(guī)模的不同,目前國內(nèi)外所采用的實(shí)蠅人工飼料的配方繁簡不一,效果也各異,理想與實(shí)用的人工飼料亟待進(jìn)一步研究。為此,作者在前人工作的基礎(chǔ)上,通過采用不同配方配制成的成蟲人工飼料飼養(yǎng)橘小實(shí)蠅和瓜實(shí)蠅,以及幼蟲人工飼料飼養(yǎng)橘小實(shí)蠅、瓜實(shí)蠅和南亞果實(shí)蠅B.tau(Walker)的效果比較,篩選適宜于這3種實(shí)蠅生長發(fā)育的廉價(jià)人工飼料優(yōu)化配方,以便為實(shí)現(xiàn)其規(guī)?；斯わ曫B(yǎng)和繁殖提供科學(xué)依據(jù)。1材料和方法1.1蒼蠅人工飼養(yǎng)設(shè)備1.1.1防實(shí)蠅逃逸實(shí)蠅人工飼養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配有紗門紗窗以防實(shí)蠅逃逸。室內(nèi)溫度25~28℃,相對濕度70%~75%,光照周期L∶D=14∶10,保持潔凈與通風(fēng)。1.1.2籠的下天科和孔口分大、小型兩種規(guī)格:小型飼養(yǎng)籠長×寬×高=58cm×42cm×33cm,籠的上下、前后鑲有玻璃,兩側(cè)為紗網(wǎng);前面中間留有1個(gè)直徑約15cm的圓形操作空,孔口帶有約35cm長的紗布袖口。大型飼養(yǎng)籠長×寬×高=80cm×46cm×120cm,中間有2層玻璃隔板,供放置人工飼料、水杯和集卵器。1.1.3集卵瓜皮的制備供成蟲產(chǎn)卵及卵的收集。(1)集卵杯:適用于橘小實(shí)蠅等;由一次性塑料杯制成,杯內(nèi)放入切成小塊的鮮橙等水果,杯口用保鮮膜封閉,再用橡皮筋扎緊,用針在距杯底約1.5cm以上的杯壁扎有多個(gè)直徑約1mm的微孔,孔間距約1cm。(2)集卵瓜皮:適用于瓜實(shí)蠅和南亞果實(shí)蠅等;將鮮黃瓜、苦瓜或絲瓜剖開切成長約10cm小段,去除多數(shù)瓜肉后將其表面用保鮮膜封住,用針在瓜皮上扎多個(gè)微孔即可。1.1.4塑料盒的制作由長×寬×高=36cm×23cm×15cm白色塑料盒制成,盒蓋中央開一個(gè)大小約9cm×6cm長方形通氣口并用細(xì)密紗網(wǎng)密封,供盛裝人工飼料和幼蟲飼養(yǎng)。1.1.5色塑料盒的制作由長×寬×高=48cm×33cm×28cm白色塑料盒制成,盒蓋中央開一個(gè)大小約20cm×10cm長方形通氣口并用細(xì)密紗網(wǎng)密封,箱底鋪有一層深度約3~5cm的潔凈潮濕細(xì)沙,供老熟幼蟲化蛹。1.2試劑、藥品和藥劑玉米(細(xì)碎粒狀,使用前浸泡1min后蒸熟)、麥片、米糠、麥麩和蔗糖(均為市售),啤酒酵母粉(上海杰諾生物科技有限公司生產(chǎn)),對羥基苯甲酸甲酯(分析純,汕頭市西隴化工廠有限公司生產(chǎn),防腐劑),鹽酸(分析純,廣州市東紅化工廠生產(chǎn)),紙巾(維達(dá)紙業(yè)有限公司生產(chǎn))和自來水。1.3人工飼料的制備和過濾1.3.1實(shí)蠅幼蟲1的飼養(yǎng)從海南省各市縣果園和瓜菜園中采集被害果,帶回室內(nèi)培養(yǎng)獲取實(shí)蠅的幼蟲和蛹,待大量羽化后按種類分籠飼養(yǎng)。以室內(nèi)飼養(yǎng)的第1代橘小實(shí)蠅和瓜實(shí)蠅成蟲作為供試蟲源。1.3.2不同人工飼料的飼料量以蔗糖與啤酒酵母作供試成蟲人工飼料配方,按不同重量比例配制成下列3種不同人工飼料:飼料1∶蔗糖∶啤酒酵母=1∶1;飼料2:蔗糖∶啤酒酵母=1∶2;飼料3:蔗糖∶啤酒酵母=1∶3。將各人工飼料混勻分別放入直徑為10cm的培養(yǎng)皿中,備用。1.3.3參數(shù)的統(tǒng)計(jì)1.3.3.人工飼料的配制取飼養(yǎng)籠6個(gè)分成2組,每組3個(gè)籠分別放入橘小實(shí)蠅和瓜實(shí)蠅成蟲各25對(雄雌性比1∶1),將盛有不同配方人工飼料的培養(yǎng)皿和供水杯(杯內(nèi)盛水,將折疊成長方形的紙巾一端沿塑料杯蓋中央切口浸入水中,另一端平鋪于杯蓋上)分放于籠中供成蟲補(bǔ)充營養(yǎng)和飲水。在飼養(yǎng)室溫濕度及光照條件下,交配后的成蟲飼養(yǎng)至12d后開始進(jìn)入產(chǎn)卵期。1.3.3.產(chǎn)卵量的測定自進(jìn)入產(chǎn)卵期開始,每隔3d將備好的集卵杯和集卵瓜皮分別放入橘小實(shí)蠅和瓜實(shí)蠅的飼養(yǎng)籠內(nèi)供其產(chǎn)卵,產(chǎn)卵時(shí)間9:00—17:00,取出集卵杯和集卵瓜皮用水沖將卵洗至100mL燒杯內(nèi),傾去上層水后用細(xì)密絲織紗網(wǎng)過濾收集卵,分別記錄2種實(shí)蠅的卵數(shù),直至產(chǎn)卵期結(jié)束為止。連續(xù)飼養(yǎng)3代,分別記錄和統(tǒng)計(jì)2種實(shí)蠅雌成蟲的產(chǎn)卵期和總產(chǎn)卵量,計(jì)算其單雌產(chǎn)卵量。產(chǎn)卵期=雌成蟲平均產(chǎn)卵持續(xù)天數(shù),單雌產(chǎn)卵量(粒)=總產(chǎn)卵量(粒)/供試雌蟲數(shù)。1.3.3.實(shí)蠅卵孵化率測定將每隔3d收集的2種實(shí)蠅的卵分別接入盛有幼蟲人工飼料(以麥麩為介質(zhì),配方見后)的飼養(yǎng)盒內(nèi),在飼養(yǎng)室條件下飼養(yǎng)6d后檢查和記錄孵化的幼蟲數(shù),直至產(chǎn)卵期結(jié)束。連續(xù)飼養(yǎng)3代,統(tǒng)計(jì)和計(jì)算2種實(shí)蠅卵的孵化率。孵化率(%)=孵化幼蟲數(shù)/接入卵量×100。1.4混合昆蟲飼料的選擇1.4.1試驗(yàn)昆蟲的來源以海南出入境檢驗(yàn)檢疫局熱帶植物隔離檢疫中心實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)的橘小實(shí)蠅第7代種群、瓜實(shí)蠅和南亞果實(shí)蠅第6代種群為供試蟲源。1.4.2試驗(yàn)對象的人工飼料和配方1.4.2.1.不同單巢飼料的混合以麥片、玉米、米糠作供試介質(zhì),麥麩為對照,分別與一定量其他組分配制成4種不同幼蟲人工飼料,其編號及配方如表1所示。1.4.2.利用不同劑量的蔗糖和啤酒酵母作為生產(chǎn)飼料選用玉米和麥麩、麥片和麥麩作供試混合介質(zhì),分別與不同量的蔗糖和啤酒酵母正交組合,再與一定量的其他組分(均同單一介質(zhì))配制成18種不同的幼蟲人工飼料。其主要配方及用量分別如表2,表3所示。1.4.3配方配方設(shè)計(jì)單一與混合介質(zhì)幼蟲人工飼料的配制方法相同,依下列步驟進(jìn)行:(1)準(zhǔn)確稱量人工飼料各配方成分;(2)將衛(wèi)生紙放入攪拌器內(nèi)打成碎屑;(2)把蔗糖、啤酒酵母和對羥基苯甲酸甲酯加水溶解后倒入攪拌器中攪拌成漿狀,盛放于飼養(yǎng)盒中;(3)加入單一或混合介質(zhì)混勻;(4)再加1mol/L鹽酸攪拌均勻,用酸性或堿性中和劑調(diào)至pH值4~5,備用。1.4.4參數(shù)的統(tǒng)計(jì)1.4.4.單一介質(zhì)飼料的制備分別取飼養(yǎng)盒12個(gè)與54個(gè)按3種實(shí)蠅分為3組,前者每組4個(gè)盒分別盛裝配制好的4種不同單一介質(zhì)幼蟲人工飼料,后者每組18個(gè)盒,每9個(gè)盛裝1種混合介質(zhì)正交試驗(yàn)配方人工飼料。每盒接入卵200粒于飼料表面鋪好的紙巾上,蓋上盒蓋后再用遮光布覆蓋,置于飼養(yǎng)室的條件下進(jìn)行飼養(yǎng)。當(dāng)卵孵化后幼蟲即鉆入飼料內(nèi)取食,發(fā)育至成熟。試驗(yàn)重復(fù)3次。1.4.4.老熟幼蟲化蛹性能測定當(dāng)多數(shù)幼蟲發(fā)育至3齡時(shí),將幼蟲飼養(yǎng)盒置于直徑為150cm水盆內(nèi)的支架上,打開盒蓋后具有彈跳習(xí)性的老熟幼蟲先后跳入盆內(nèi)水中,每隔1.5h收集3齡幼蟲1次,各選其中100頭放入化蛹箱內(nèi)供其入底部略濕沙層中化蛹,經(jīng)3d化蛹結(jié)束后篩沙取蛹。分別記錄和統(tǒng)計(jì)其蛹數(shù)和蛹總重量,計(jì)算其化蛹率和平均蛹重?；悸?%)=蛹數(shù)/供試3齡幼蟲數(shù)×100,平均蛹重(mg)=蛹總重量(mg)/蛹數(shù)。1.4.4.各成蟲的地錨定將收集的3種實(shí)蠅蛹(計(jì)數(shù))放入底部鋪有一層深度約2cm潔凈濕沙的塑料碗(直徑10cm)內(nèi),分別置于不同飼養(yǎng)籠內(nèi),待成蟲全部羽化后,檢查和記錄已羽化的蛹?xì)?shù)(=羽化成蟲數(shù))和未羽化的蛹數(shù),計(jì)算其羽化率。羽化率(%)=羽化成蟲數(shù)/供試蛹數(shù)×100。1.4.4.不同配方幼蟲子代卵孵化率羽化后的3種實(shí)蠅成蟲經(jīng)飼養(yǎng)進(jìn)入產(chǎn)卵期后,各取卵200粒接入不同配方幼蟲人工飼料內(nèi)飼養(yǎng),6d后檢查記錄孵化幼蟲數(shù),計(jì)算其子代卵孵化率。子代孵化率(%)=孵化幼蟲數(shù)/供試卵數(shù)×100。2結(jié)果與分析2.1種實(shí)蠅對食瓜實(shí)蠅的生長特性用不同重量比例混合的蔗糖與啤酒酵母成蟲人工飼料飼養(yǎng)橘小實(shí)蠅和瓜實(shí)蠅的試驗(yàn)結(jié)果(表4,表5)顯示,以飼料2(蔗糖∶啤酒酵母=1∶2)的效果最好,其成蟲的產(chǎn)卵期、總產(chǎn)卵量、單雌產(chǎn)卵量和羽化率均與飼料1(蔗糖∶啤酒酵母=1∶1)和飼料3(蔗糖∶啤酒酵母=1∶3)差異顯著,2種實(shí)蠅的產(chǎn)卵期分別為(31.87±0.38)d與(30.90±0.47)d,各延長5.5~9.5d與5.7~7.9d;單雌產(chǎn)卵量分別為(445.75±2.75)粒與(424.16±0.66)粒,各多產(chǎn)卵171.85~206.60粒與207.91~218.30粒;子代孵化率分別為75.40%±0.99%與74.60%±1.21%,相應(yīng)提高6.47%~7.43%與6.98%~7.90%。其次是飼料1,飼養(yǎng)成蟲的效果比飼料3略好,但對瓜實(shí)蠅的飼養(yǎng)其效果與后者大致相當(dāng),差異不顯著。不同配比蔗糖與啤酒酵母混合人工飼料飼養(yǎng)實(shí)蠅效果的差異,在一定程度上反映了成蟲期補(bǔ)充營養(yǎng)和雌性體內(nèi)受精卵的發(fā)育對糖類與蛋白質(zhì)需求量的不同。2.2混合昆蟲飼料的選擇2.2.1幾種介質(zhì)對正常飼養(yǎng)的效果試驗(yàn)結(jié)果(表6~表8)顯示,采用玉米或麥片作介質(zhì)配制成的幼蟲人工飼料飼養(yǎng)橘小實(shí)蠅、瓜實(shí)蠅和南亞果實(shí)蠅的效果明顯優(yōu)于麥麩(對照),除羽化率外,其化蛹率、平均蛹重和子代孵化率均高于后者,且差異顯著。其中,以玉米作介質(zhì)為最佳,3種實(shí)蠅的化蛹率介于95%~97%,平均蛹重接近或等于18mg,羽化率和子代孵化率分別介于90%~98%與72%~77%。麥片作介質(zhì)為其次,飼養(yǎng)橘小實(shí)蠅和瓜實(shí)蠅幼蟲的效果除平均蛹重外,化蛹率、羽化率和子代孵化率均相對較低。米糠作介質(zhì)效果最差,與麥麩相比,飼養(yǎng)幼蟲的各項(xiàng)指標(biāo)明顯低于后者。上述結(jié)果表明,幼蟲飼養(yǎng)效果的優(yōu)劣與飼料中介質(zhì)所含營養(yǎng)成分的高低密切相關(guān),麥麩的主要營養(yǎng)成分顯著低于玉米和麥片,故子代孵化率較低、平均蛹重也較小。此外,飼料理化性狀的適宜度也是影響幼蟲發(fā)育的因素之一,以麥片作介質(zhì)配制成的人工飼料黏度過大,因而飼養(yǎng)效果尚不理想;麥麩作介質(zhì)也有其優(yōu)點(diǎn),富含幼蟲發(fā)育所需的纖維素,而良好的吸水、保水特性有利于改善固態(tài)飼料的理化性狀。2.2.2通過不同混合手段制備的各種昆蟲飼料2.2.2.不同飼料的飼養(yǎng)效果試驗(yàn)結(jié)果(表9,表10)顯示,混合介質(zhì)玉米+麥麩與麥片+麥麩相比,飼養(yǎng)橘小實(shí)蠅的總體效果相對較好,除子代孵化率和化蛹率二者大致相同外,平均蛹重和羽化率均高于后者。在試驗(yàn)的9種幼蟲人工飼料中,以A1B1C1、A2B2C3和A3B1C3的飼養(yǎng)效果較好,其化蛹率、羽化率大致相同,分別介于96.31%~96.62%與94.85%~95.57%。其中,A3B1C3的子代孵化率最高(81.17%±0.05%),其次是A1B1C1(79.83%±0.06%),與A2B2C3的最大差異為7.17%;其平均蛹重(19.40±0.08)mg接近于A2B2C3,而高于A1B1C1;從幾項(xiàng)指標(biāo)的綜合比較來看,橘小實(shí)蠅幼蟲的人工飼料以A3B1C3最優(yōu)。2.2.2.各性代孵化率試驗(yàn)結(jié)果(表11,表12)顯示,9種幼蟲人工飼料中飼養(yǎng)瓜實(shí)蠅總體效果較好的分別為A2B2C3與D1E2F2,二者的平均蛹重和羽化率大致相同,但前者的子代孵化率達(dá)78.50%±0.04%,高于后者約6.3%;而化蛹率為95.73%±0.03%,低于后者約1.6%;相比之下,幼蟲人工飼料A2B2C3更適宜于瓜實(shí)蠅幼蟲的飼養(yǎng)。2.2.2.混合介質(zhì)與麥麩、玉米飼料的用量比對橘小實(shí)蠅幼蟲飼養(yǎng)的影響試驗(yàn)結(jié)果(表13,表14)顯示,9種幼蟲人工飼料中飼養(yǎng)南亞果實(shí)蠅效果較好的分別為A2B2C3與D3E1F3,二者子代孵化率和化蛹率接近,但A2B2C3的平均蛹重和羽化率分別為(22.83±1.38)mg與95.82%±0.03%,分別高于后者約2.77mg與2.52%,更適用于南亞果實(shí)蠅幼蟲的飼養(yǎng)。上述數(shù)據(jù)表明,混合介質(zhì)玉米+麥麩總體上優(yōu)于麥片+麥麩;人工飼料A3B1C3適宜于橘小實(shí)蠅幼蟲的飼養(yǎng),其子代孵化率、化蛹率、羽化率和平均蛹重分別為;81.17%±0.05%,96.41%±0.02%,94.85%±0.01%,(19.40±0.08)mg。而A2B2C3適宜于瓜實(shí)蠅和南亞果實(shí)蠅幼蟲的飼養(yǎng),其子代孵化率、化蛹率、羽化率和平均蛹重分別介于76.96%~78.50%,94.69%~96.31%,94.57%~95.82%,18.62~22.83mg。3配方材料的選擇試驗(yàn)結(jié)果表明:(1)飼養(yǎng)橘小實(shí)蠅和瓜實(shí)蠅的最佳成蟲人工飼料是1∶2重量比例混合的蔗糖與啤酒酵,用其飼養(yǎng)的單雌產(chǎn)卵量、產(chǎn)卵期和孵化率分別為424.16~445.75粒,30.90~31.87d,74.60%~75.40%。這比高強(qiáng)(2005)用蔗糖∶啤酒酵母∶水=3∶1∶20配方飼