潤(rùn)眾（恩替卡韋分散片）研究報(bào)告

潤(rùn)眾（恩替卡韋分散片）

研究報(bào)告

主要內(nèi)容一、潤(rùn)眾的生產(chǎn)工藝二、潤(rùn)眾的藥學(xué)研究三、潤(rùn)眾的生物等效性原料藥輔料制?；靹蛘８稍飰浩?、包衣、內(nèi)包裝、外包裝原料藥工藝設(shè)備連云港潤(rùn)眾制藥廠恩替卡韋的化學(xué)結(jié)構(gòu)化學(xué)名：2-氨基-9-[(1S,3R,4S)-4-羥基-3-羥甲基-2-亞甲戊基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮-水合物分子式：C12H15N5O3?H2O

分子量：295.3手性（Chirality）

在自然界中廣泛存在氨基酸自然界中為L(zhǎng)型核苷酸中的糖自然界中為D型手性碳原子ABCDDABC

R-構(gòu)型

S-構(gòu)型左手（手性藥物）左手套（生物大分子）不匹配匹配左手套（生物大分子）右手（手性藥物）互為對(duì)映體手性藥物作用模式均為雜質(zhì)恩替卡韋手性藥物的工藝難點(diǎn)及解決方法

難點(diǎn)1合成如何解決手性的問題，在合成過程中制備出我們真正想要的空間構(gòu)像，是手性合成工藝中的重點(diǎn)和難點(diǎn)。難點(diǎn)2純化手性藥物純化過程中將其他構(gòu)像的雜質(zhì)含量降到最低，是手性純化工藝中的難點(diǎn)。一、恩替卡韋原料合成工藝合成工藝1：施貴寶目前工藝路線1.合成工藝2：施貴寶專利路線2.合成工藝3：正大天晴專利工藝路線3..條條大路通羅馬！專利號(hào)：WO9809964

專利號(hào)：WO2004052310專利號(hào)：ZL200610088464.8三條工藝路線的比較工藝1：路線較短，但直接使用鳥嘌呤開環(huán)反應(yīng)產(chǎn)率低，產(chǎn)物為立體異構(gòu)體混合物，需用多次硅膠層析法進(jìn)行分離純化，后處理繁瑣。工藝2：路線較短，也使用鳥嘌呤開環(huán)反應(yīng)，同時(shí)由于使用了硅烷作為OH的前體，脫硅烷基時(shí)，需要非常強(qiáng)烈的條件，影響純度和產(chǎn)率，需要用樹脂層析，生產(chǎn)成本高，不具有工業(yè)化生產(chǎn)的優(yōu)勢(shì)，只是為專利保護(hù)而設(shè)計(jì)。施貴寶正大天晴工藝：避開了專利保護(hù)，雖然路線較長(zhǎng)，但是關(guān)鍵中間體均為固體，后處理簡(jiǎn)便，質(zhì)量更易控制。潤(rùn)眾原料研究：結(jié)構(gòu)確證正大天晴對(duì)恩替卡韋成品進(jìn)行了紅外（IR），紫外（UV），核磁（1H-NMR、13C-NMR、HMQC、HMBC），高分辨質(zhì)譜（HRMS），差熱分析（DSC）和X-射線粉末衍射等一系列測(cè)定，解析結(jié)果與恩替卡韋化學(xué)結(jié)構(gòu)完全相符，元素分析結(jié)果符合化學(xué)結(jié)構(gòu)中各元素的理論值，熱重分析（TG）證實(shí)本品為一分子水合物。在結(jié)構(gòu)確證研究中，正大天晴還使用了單晶X射線衍射：目前確定化學(xué)分子結(jié)構(gòu)、尤其是對(duì)手性化合物中手性碳原子絕對(duì)構(gòu)型以及晶型公認(rèn)最為有效的測(cè)試方法，測(cè)試結(jié)果顯示正大天晴恩替卡韋分子中的五元環(huán)的C1、C3和C4位置構(gòu)型為S、R和S（見下圖），三個(gè)手性碳原子的構(gòu)型與原研公司上市產(chǎn)品完全一致，晶型為一水合物晶體，也與原研公司產(chǎn)品一致。恩替卡韋單晶X射線衍射圖-----福州大學(xué)測(cè)試中心二、恩替卡韋原料藥的純化手性色譜柱分離：通過手性固定相與手性分子特異結(jié)合，從而將不同構(gòu)型的手性分子分離，得到有效構(gòu)型恩替卡韋作用靶點(diǎn)作用靶點(diǎn)AAAABBBBCCCC潤(rùn)眾的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)天晴標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)出的雜質(zhì)個(gè)數(shù)及總量均明顯高于進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)，天晴的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)更高正大天晴通過對(duì)雜質(zhì)檢測(cè)方法的控制（HPLC測(cè)定條件的調(diào)控），得出更為靈敏的檢測(cè)方法（RZJC）；對(duì)于同一批號(hào)的制劑，分別用天晴檢測(cè)方法與進(jìn)口檢測(cè)方法檢測(cè)，數(shù)據(jù)如下：比較內(nèi)容最大單雜（%）總雜（%）雜質(zhì)數(shù)（個(gè)）最后一個(gè)雜質(zhì)洗出時(shí)間（分鐘）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)恩替卡韋和雜質(zhì)分離度和非對(duì)映體2和非對(duì)映體3進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)0.180.901221.52.883.11天晴標(biāo)準(zhǔn)0.221.402724.31.813.74潤(rùn)眾制劑純度結(jié)果顯示：潤(rùn)眾的純度顯著高于進(jìn)口制劑樣品批號(hào)081212090101090201090202090203090204進(jìn)口制劑有關(guān)物質(zhì)（％）單一雜質(zhì)0.060.060.030.090.090.070.13總雜質(zhì)0.330.350.300.690.680.320.82用同一種測(cè)定方法分別對(duì)潤(rùn)眾與進(jìn)口制劑的有關(guān)物質(zhì)（雜質(zhì)）進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果如下：潤(rùn)眾制劑研究：等量遞增法混勻制劑含量均勻度測(cè)定值（A+1.8S）均控制在5.0以下（限度為15）多批次驗(yàn)證，均符合規(guī)定。等量遞增法反復(fù)摸索工藝參數(shù)0.5mg/片極低規(guī)格制劑關(guān)鍵技術(shù)：混勻存在難題解決辦法實(shí)驗(yàn)結(jié)果等量遞增法：潤(rùn)眾制劑通過對(duì)幾種輔料及有效成份的等量條件的反復(fù)摸索，最終得出含量均勻度測(cè)定值低于5.0，國(guó)家藥典標(biāo)準(zhǔn)為15以內(nèi)研發(fā)團(tuán)隊(duì)：正大天晴的藥物研究院經(jīng)過多年的發(fā)展

已經(jīng)形成了500多人的專業(yè)研發(fā)隊(duì)伍，

其中碩士230人，博士70人。研發(fā)平臺(tái)：與國(guó)內(nèi)的上海醫(yī)工院、中國(guó)藥科大學(xué)

等七家單位建立合作關(guān)系；與國(guó)外的美國(guó)華生、英國(guó)國(guó)家醫(yī)學(xué)研究

院等八家單位合作研發(fā)研發(fā)實(shí)力首批首家認(rèn)證生產(chǎn)車間為國(guó)內(nèi)首批首家通過新版GMP認(rèn)證的車間

先進(jìn)設(shè)備固體制劑車間車間主要設(shè)備有濕法制粒及流化床系統(tǒng)（德國(guó)GEA），高速壓片機(jī)（德國(guó)菲特）、高速膠囊充填機(jī)（德國(guó)博世）、高效薄膜包衣機(jī)（德國(guó)OYSTAR）、高速鋁鋁泡罩包裝線（德國(guó)烏爾曼）。達(dá)到全自動(dòng)電腦監(jiān)控混粉、缺陷產(chǎn)品全自動(dòng)剔除包裝。德國(guó)GEA配制設(shè)備固體制劑車間：德國(guó)菲特壓片機(jī)固體制劑車間：德國(guó)格拉特配制設(shè)備德國(guó)烏爾曼高速鋁-鋁泡罩裝盒機(jī)檢驗(yàn)中心：進(jìn)口檢測(cè)設(shè)備二、潤(rùn)眾藥學(xué)研究1、溶出度溶出度(Dissolutionrate)也稱溶出速率，是指在規(guī)定的溶劑和條件下，藥物從片劑、膠囊劑、顆粒劑等固體制劑中溶出的速度和程度。測(cè)定固體制劑溶出度的過程稱為溶出度試驗(yàn)(Dissolutiontest)，它是一種模擬口服固體制劑在胃腸道中的崩解和溶出的體外試驗(yàn)方法。取本品，照溶出度測(cè)定法（中國(guó)藥典2005年版二部附錄XC第二法），以pH6.8的磷酸鹽緩沖液1000ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50r/min，依法操作，經(jīng)30min時(shí)，取溶液適量，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。計(jì)算每片的溶出量。限度為標(biāo)示量的80％，應(yīng)符合規(guī)定結(jié)果：均符合規(guī)定

溶出度試驗(yàn)含量均勻度（Contentuniformity）是指小劑量口服固體制劑、粉霧劑或注射用無菌粉末中的每片（個(gè)）含量偏離標(biāo)示量的程度。取供試片10片，分別測(cè)定每片以標(biāo)示量為100%的相對(duì)含量X，求其平均和標(biāo)準(zhǔn)差S以及標(biāo)示量與均值之間的絕對(duì)值A(chǔ)=|100-|2、含量均勻度取本品10片，分別置于50ml量瓶中，加流動(dòng)相適量，充分振搖使在溶液中分散，照含量測(cè)定項(xiàng)下的方法，依法測(cè)定，計(jì)算含量，應(yīng)符合規(guī)定（中國(guó)藥典2005年版二部附錄XE）結(jié)果：均符合規(guī)定含量均勻度試驗(yàn)影響因素試驗(yàn)加速試驗(yàn)室溫長(zhǎng)期試驗(yàn)結(jié)果本品經(jīng)4500Lx光照；室溫25℃,92.5%放置10天；高溫40℃、RH75%放置6個(gè)月和長(zhǎng)期試驗(yàn)12個(gè)月。在外觀色澤、有關(guān)物質(zhì)、含量及溶出度等各項(xiàng)指標(biāo)及色譜圖與0天比較均無明顯變化。表明：本品穩(wěn)定性良好3、穩(wěn)定性試驗(yàn)高溫高濕試驗(yàn)130308301批潤(rùn)眾含量（%）溶出度（%）有關(guān)物質(zhì)（%）最大單雜總雜初始檢測(cè)101.91010.070.3325℃、RH92.5%，24h99.91000.080.2840℃、RH75%，24h100.11010.080.2925℃、RH92.5%，48h100.41000.080.2840℃、RH75%，48h100.51010.080.28結(jié)果顯示：潤(rùn)眾在高溫高濕條件，藥品的含量，溶出度及純度都無顯著影響負(fù)責(zé)單位：北京大學(xué)第一醫(yī)院參加單位：復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院四川大學(xué)華西醫(yī)院重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院第三軍醫(yī)大學(xué)附屬第一醫(yī)院華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院正大天晴恩替卡韋臨床研究3348周數(shù)據(jù)已被2012亞太肝病年會(huì)收載3496周數(shù)據(jù)已被2012美國(guó)肝病年會(huì)接收小結(jié)恩替卡韋分散片經(jīng)溶出度、含量均勻度和穩(wěn)定性試驗(yàn)考察，結(jié)果表明符合國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)要求。與市售品比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析無顯著差異。國(guó)際認(rèn)可三、潤(rùn)眾恩替卡韋分散片

健康人體相對(duì)生物利用度及生物等效性研究生物利用度（bioavailability）是指藥物被機(jī)體吸收進(jìn)入循環(huán)的相對(duì)量和速率F=（A/D）×100%,A為進(jìn)入體循環(huán)的量，D為口服劑量。生物利用度是藥物制劑質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo)。相對(duì)生物利用度：兩種制劑生物利用度的比較：Tmax、Cmax、AUC。試驗(yàn)設(shè)計(jì)單次給藥多次給藥受試劑（潤(rùn)眾）參比劑（進(jìn)口恩替卡韋）相對(duì)生物利用度受試劑（潤(rùn)眾）參比劑（進(jìn)口恩替卡韋）09天潤(rùn)眾平均相對(duì)生物利用度

是進(jìn)口恩替卡韋的107.5±24.7%(單次給藥）潤(rùn)眾平均相對(duì)生物利用度

是進(jìn)口恩替卡韋的110.5±36.4%（多次給藥）小結(jié)潤(rùn)眾恩替卡韋分散片化學(xué)結(jié)構(gòu)與進(jìn)口恩替卡韋一致受試制劑潤(rùn)眾恩替卡韋分散片經(jīng)溶出度、含量均勻度和穩(wěn)定性試驗(yàn)考察，符合國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)要求受試制劑潤(rùn)眾恩替卡韋分散片與參比制劑進(jìn)口恩替卡韋藥代動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)相似，生物等效正大天晴恩替卡韋臨床研究

144周結(jié)果匯報(bào)參加研究單位負(fù)責(zé)單位：北京大學(xué)第一醫(yī)院參加單位：復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院四川大學(xué)華西醫(yī)院重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院第三軍醫(yī)大學(xué)附屬第一醫(yī)院華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院4448周數(shù)據(jù)已被2012亞太肝病年會(huì)收載4596周數(shù)據(jù)已被2012美國(guó)肝病年會(huì)接收研究方法

采用隨機(jī)雙盲、陽性藥物（美國(guó)施貴寶公司生產(chǎn)的恩替卡韋平行對(duì)照、多中心的臨床試驗(yàn)。完成48周恩替卡韋治療后申報(bào)注冊(cè)，本研究繼續(xù)進(jìn)行至240周。

HBeAg(+)慢性乙肝HBeAg

(-)慢性乙肝A組（0.5mg，QD）B組（0.5mg，QD）正大天晴恩替卡韋組(0.5mg，QD）A組（0.5mg，QD）B組（0.5mg，QD）正大天晴恩替卡韋組（0.5mg，QD）基線24周48周揭盲研究設(shè)計(jì)

馬來酸恩替卡組(0.5mg，QD）正大天晴恩替卡韋組

(0.5mg，QD）馬來酸恩替卡韋組正大天晴恩替卡韋組

（0.5mg，QD）96周

5年采用隨機(jī)、雙盲、陽性對(duì)照、多中心臨床試驗(yàn)法組別說明48周二次揭盲，A組為進(jìn)口恩替卡韋，

B組為正大天晴ETV48-144周延續(xù)A組為進(jìn)口恩替卡韋→正大天晴ETV組

B組為正大天晴ETV組病例數(shù)變化情況（0-48-96-144w）入組279例HBeAg（+）220例A組111例A組110例A組106例A組104例A組85例B組109例B組108例B組105例B組98例B組87例HBeAg（-）59例A組28例A組26例A組25例A組23例A組23例B組31例B組31例B組31例B組31例B組30例入組基線48周96周144周檢測(cè)方法HBVDNA檢測(cè)：羅氏二代CobasTaqman實(shí)時(shí)(real-time)定量PCR法測(cè)定，最低檢測(cè)下限值為20IU/ml；HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe檢測(cè)：雅培微粒子酶免疫熒光法測(cè)定；耐藥檢測(cè)：提取HBVDNA，P區(qū)PCR擴(kuò)增直接測(cè)序。以上檢測(cè)，統(tǒng)一收集標(biāo)本，由中心實(shí)驗(yàn)室(北京大學(xué)第一醫(yī)院病毒研究室)專人統(tǒng)一檢測(cè)。ALT由各研究協(xié)作單位檢驗(yàn)科檢測(cè)。肝組織學(xué)檢測(cè)：用KnodellHAI計(jì)分和Ishak纖維化評(píng)分。統(tǒng)一由南京軍區(qū)總醫(yī)院病理科周曉軍專人統(tǒng)一檢測(cè)。療效判定標(biāo)準(zhǔn)(一)主要療效指標(biāo)：治療后血清HBVDNA水平較基線下降值療效判定標(biāo)準(zhǔn)(二)次要療效指標(biāo)：1.病毒學(xué)應(yīng)答：

(1)血清HBVDNA低于檢測(cè)下限值：HBVDNA<20IU/ml；

(2)血清HBVDNA應(yīng)答：HBVDNA<52IU/ml（<300copies/ml)；2.HBeAg轉(zhuǎn)陰率；3.HBeAg血清轉(zhuǎn)換率；4.血清ALT復(fù)常率；5.組織學(xué)改善率；

指標(biāo)A組(n=136)B組(n=139)組間比較年齡（歲）32.29±9.61(18-62)32.29±10.39(18-63)P=0.9980性別(男)101(74.26%)105(75.54%)P=0.7826病程（年）M±Q5.00±8.006.00±7.00P=0.4571HBVDNA水平(logIU)HBeAg(+)慢性乙肝7.67±0.987.68±0.91P>0.05HBeAg(-)慢性乙肝6.33±1.136.40±1.29P>0.05ALT(IU/ml)147.61±89.97153.48±104.60P>0.05HBV基因型

B型例數(shù)(％)69(51.49)68(48.51)P>0.05C型例數(shù)(％)65(48.51)69(51.49)P>0.05NUC初治例數(shù)(％)128（94）129（93）P>0.05NUC經(jīng)治例數(shù)(％)8（6）10（7）基因型耐藥LVD耐藥(rtL或/和rtM204V/I)12P>0.05ADV耐藥(rtA181T或/和rtN236T)32P>0.05兩組基線人口統(tǒng)計(jì)學(xué)和疾病基本特征的比較兩組基線人口統(tǒng)計(jì)學(xué)和疾病基本特征相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，具有可比性。

兩組治療慢性乙型肝炎的療效及比較分層時(shí)間點(diǎn)組別n±sMinMaxMQ統(tǒng)計(jì)量PHBeAg（＋）120周A組861.240.800.003.591.300.12-0.750.4555B組871.330.760.003.641.300.17144周A組851.270.730.003.691.300.03-0.680.4944B組871.360.810.004.191.300.32HBeAg（-）120周A組230.400.610.001.300.001.30-0.970.3338B組280.560.660.001.450.001.30144周A組230.230.500.001.300.000.00-2.640.0831B組300.690.660.001.301.301.30兩組第三年HBVDNA水平(lgs)的比較兩組間比較采用wilcoxon秩和檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)量為Z分層時(shí)間組別n療前－療后（療前－后）95%CI組內(nèi)前后比較差值的組間比較±s下限上限tPFPHBeAg（+）用藥120周A組866.391.206.146.6549.58<.00010.090.770B組876.341.076.126.5755.52<.0001用藥144周A組856.361.176.106.6149.96<.00010.070.788B組876.311.106.086.5553.35<.0001HBeAg（-）用藥120周A組235.961.185.456.4724.16<.00010.220.639B組285.781.345.266.3022.77<.0001用藥144周A組236.131.055.676.5828.05<.00012.270.139B組305.651.125.236.0727.62<.0001兩組第三年訪視HBVDNA較基線下降值的比較注：組內(nèi)前后比較采取配對(duì)t檢驗(yàn)。兩組間比較用兩因素方差分析，因素一為組別，因素二為中心，下同。

時(shí)間分層分組例數(shù)轉(zhuǎn)陰例數(shù)轉(zhuǎn)陰率(%)P用藥120周HBeAg（+）A組865867.440.7489B組875664.37HBeAg（-）A組2323100.001.0000B組28

27

96.43用藥144周HBeAg（+）A組856070.590.6242B組875866.67HBeAg（-）A組2323100.001.0000B組3030100.00兩組HBVDNA低于檢測(cè)限(<20IU/mL)比例時(shí)間分層分組例數(shù)轉(zhuǎn)陰例數(shù)轉(zhuǎn)陰率(%)P用藥120周HBeAg（+）A組867283.720.8412B組877181.61HBeAg（-）A組2323100.001.0000B組2828100.00用藥144周HBeAg（+）A組857385.880.3028B組877080.46HBeAg（-）A組2323100.001.0000B組3030100.00兩組HBVDNA低于檢測(cè)限(<52IU/mL)比例轉(zhuǎn)陰率的組間比較采用精確概率法時(shí)間點(diǎn)分組可評(píng)價(jià)病例轉(zhuǎn)陰例數(shù)陰轉(zhuǎn)率(%)組間比較P用藥120周A組853035.290.6247B組852630.59用藥144周A組853743.530.7574B組873540.23第三年治療后HBeAg轉(zhuǎn)陰率時(shí)間點(diǎn)分組可評(píng)價(jià)病例數(shù)轉(zhuǎn)換例數(shù)陰轉(zhuǎn)率(%)組間比較P用藥120周A組791215.190.6769B組831518.07用藥144周A組791721.521.0000B組851821.18兩組治療后HBeAg血清轉(zhuǎn)換時(shí)間點(diǎn)分層分組療前陽性例數(shù)復(fù)常例數(shù)復(fù)常率(%)組間比較P用藥120周HBeAg（+）A組827793.900.2801B組857588.24HBeAg（-）A組212095.240.3756B組282485.71用藥132周HBeAg（+）A組797088.610.4926B組816883.95HBeAg（-）A組211990.481.0000B組282589.29用藥144周HBeAg（+）A組827085.370.6764B組857082.35HBeAg（-）A組211990.480.6830B組272385.19兩組第三年治療后ALT復(fù)常情況復(fù)常率的組間比較采用精確概率法48周組織學(xué)結(jié)果--Knodell評(píng)分組別例數(shù)改善（%）未改善