一測多評法在中藥化學成分含量測定中的應用

一測多評法在中藥化學成分含量測定中的應用

中藥及其制劑包含許多組件，具有化學成分多樣性和復雜性的特點。這也是中醫(yī)具有各種功能和多種藥理基礎的基本原因。因此，在研究中藥及其制劑的有效性和安全性時，我們不僅要選擇單一成分的含量測定來表達中藥的質(zhì)量，還要選擇不同成分的含量測定來對影響的化學指標進行綜合評價。近年來,各種新的分析技術和方法在中藥質(zhì)量控制中不斷出現(xiàn),王智民等提出了一測多評法(quantitativeanalysisofmulti-componentsbysinglemarker,QAMS),即利用中藥有效成分內(nèi)在的函數(shù)關系和比例關系,只測定一個成分(對照品易得者),來實現(xiàn)多個成分(對照品難以得到或難供應)的同步測定。中國藥典2010年版中,已經(jīng)收錄利用該方法測定黃連小檗堿、巴馬汀、黃連堿、表小檗堿、藥根堿等成分的含量。本文主要探討目前一測多評法在中藥化學成分含量測定中的應用進展,為進一步推廣一測多評法在中藥質(zhì)量控制模式中的應用提供數(shù)據(jù)參考。1類多成分同時測定時樣品、分析方法及結(jié)果一測多評法是通過只測定某個代表性成分,來計算出其他待測有效成分的含量,使其計算值與實測值符合定量方法學的要求。主要適用于對照品難得或制備成本高或不穩(wěn)定的情況下同類多成分同時測定。因此在使用該方法時,首先應選擇適當?shù)臋z測指標,收集研究樣品,并制備對照品溶液,進行HPLC分析條件的確定。參照藥典附錄ⅩⅧA要求完成多成分同時測定的方法學考察,并利用對照品溶液和確定的分析條件,建立內(nèi)參物與待測成分之間的相對校正因子(RCF),同時進行待測成分的色譜峰定位。然后按常規(guī)方法測定待測成分的含量,同時利用RCF計算待測成分的含量,并將實測值與計算值進行分析比較,以驗證QAMS的合理性和可行性。2中藥中n類、類、苯丙素類等3種分類含量測定,能夠檢測香豆素、及其他類目前,一測多評法已在中藥多種化學成分的含量測定中得到廣泛應用,如中藥苷類、醌類中的蒽醌類和菲醌類、苯丙素中的香豆素類和木脂素類、黃酮類、揮發(fā)油類、三萜類、生物堿類、鞣質(zhì)類等成分的含量測定。2.1朝激勵因子確定李發(fā)美等以淫羊藿藥材為研究對象,以藥材中4種主要成分為指標成分,分別建立了淫羊藿苷與朝藿定A、B、C的相對校正因子,計算朝藿定A、B、C的含量(計算值),實現(xiàn)一測多評;同時采用外標法測定藥材中4種指標成分的含量(實測值),并比較計算值與實測值的差異,結(jié)果顯示一測多評法和外標法所得的含量結(jié)果無顯著性差異。2.2大黃素甲醚與參與物的相對校正因子孟繁穎等以復方黃白膠囊為研究對象,以大黃酚為內(nèi)參物,計算大黃酸、大黃素和大黃素甲醚與大黃酚的相對校正因子;分別采用一測多評法和外標法測定復方黃白膠囊中4種大黃蒽醌類成分的含量,結(jié)果表明相對校正因子的重現(xiàn)性良好,且采用校正因子計算的含量值與外標法實測值之間無顯著性差異。王鈺瑩等以三黃片為研究對象,建立了大黃酸、大黃酚和大黃素甲醚與內(nèi)參物大黃素之間的相對校正因子,分別采用外標法和一測多評法測定三黃片中4種蒽醌類成分的含量,并將一測多評法的計算值與外標法的實測值用相對誤差進行評價,結(jié)果表明兩者差異無統(tǒng)計學意義,實驗所得的相對校正因子可信,表明該法具有合理性、可行性和可重復性。范玲等以虎杖為研究對象,選取大黃素為內(nèi)標物,分別建立了大黃素與虎杖苷、白藜蘆醇和大黃素甲醚的相對校正因子,并用該校正因子進行虎杖苷、白藜蘆醇、大黃素甲醚的含量計算,實現(xiàn)一測多評,同時采用外標法測定飲片中大黃素、虎杖苷、白藜蘆醇和大黃素甲醚的含量,比較計算值與實測值的差異,結(jié)果表明11批虎杖飲片中3種成分含量的計算值與實測值的RSD<3%,表明兩者無顯著性差異。李倩等以丹參藥材為研究對象,藥材中4個有效成分為指標成分,分別建立丹參酮ⅡA與二氫丹參酮Ⅰ、隱丹參酮,丹參酮Ⅰ的相對校正因子,計算二氫丹參酮Ⅰ、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ的含量,同時采用外標法測定藥材中4個指標性成分的含量,比較計算值與實測值的差異,結(jié)果顯示16批丹參中4個指標成分含量的計算值與實測值之間無顯著性差異。2.3藥物中香豆素含量測定結(jié)果楊芳等采用一測多評法測定川白芷藥材中3種香豆素成分的含量,實驗以歐前胡素對照品為內(nèi)參物,在線性范圍內(nèi)采用HPLC-DAD建立其與異歐前胡素、氧化前胡素的相對校正因子,并用該校正因子進行異歐前胡素、氧化前胡素的含量計算實現(xiàn)“一測多評”,同時采用外標法測定藥材中這3種香豆素的含量,并比較計算值與實測值的差異,結(jié)果顯示20批藥材中3種香豆素含量的計算值與實測值無顯著性差異(RSD<5%)。丁黎艷等以補骨脂藥材為研究對象,選取補骨脂素為指標,確定該成分與其他藥效成分——異補骨脂素、補骨脂甲素(補骨脂二氫黃酮)、補骨脂乙素(異補骨脂査兒酮)間的校正因子,考察一測多評法和外標法測得結(jié)果的差異性,并研究了不同儀器及色譜柱對相對校正因子的影響,結(jié)果表明一測多評法和外標法測得的數(shù)據(jù)RSD均<3%,且不同儀器及色譜柱所得相對校正因子無顯著性差異。賀鳳成等建立了五味子中4個木脂素類化合物一測多評方法學考察模式,實驗以五味子醇甲為內(nèi)參物,建立五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素與五味子醇甲的相對校正因子,并進行含量計算,同時采用外標法測定13批五味子藥材中4個成分的含量。結(jié)果表明建立的校正因子重現(xiàn)性良好,同時采用校正因子計算的含量值與外標法實測值之間無顯著性差異,表明該方法準確可行。2.4不同類型的著性差異楊菲等以銀黃制劑為研究對象,建立漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素與黃芩苷間的相對校正因子,分別采用外標法和一測多評法測定銀黃制劑中4種黃酮類成分的含量,并將一測多評法的計算值與外標法實測值用相對誤差進行比較,結(jié)果表明一測多評法的計算結(jié)果與外標法的實測值之間沒有顯著性差異。徐娜等以芹菜籽原料藥中主要成分芹菜甲素、芹菜乙素和新蛇床內(nèi)酯為指標,在一定范圍內(nèi),建立芹菜甲素與芹菜乙素、新蛇床內(nèi)酯的校正因子,用該校正因子測定芹菜乙素和新蛇床內(nèi)酯的含量,同時采用外標法測定6批不同批次中3個成分的含量,結(jié)果顯示建立的校正因子重現(xiàn)性良好,原料藥中采用校正因子計算的值與外標法實測值間沒有顯著性差異。另有張坤等建立以木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷為對照品的校正因子方法,測定苦碟子提取物中咖啡酸、菊苣酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷-(1→6)-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷與木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷5種主要成分的含量,同時采用外標法測定苦碟子提取物中5種成分含量,并將校正因子法與外標法的測定結(jié)果進行比較,經(jīng)t檢驗,P>0.05,表明這2種方法的測定結(jié)果無顯著性差異。2.5與現(xiàn)行標準的比較付瀅舟等采用一測多評法測定速效救心丸中冰片的含量,實驗以正十四烷為內(nèi)標物,以右旋龍腦為參照物建立其與異龍腦、左旋龍腦的相對校正因子進行含量測定,同時與現(xiàn)行標準的測定結(jié)果進行比較,結(jié)果表明采用一測多評法的測定結(jié)果與現(xiàn)行標準測定結(jié)果基本一致。2.6相對校正因子的測定宋永貴等采用一測多評法同時測定預知子中4種三萜皂苷成分,以常春藤皂苷元3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(皂苷PD)為內(nèi)標物考察在不同色譜柱、流動相系統(tǒng)、HPLC儀器條件下,皂苷PD與常春藤皂苷元3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(皂苷X)、常春藤皂苷元3-O-β-D-吡喃木糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(皂苷B)、常春藤皂苷元3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(皂苷A)之間的相對校正因子,并利用該校正因子計算皂苷X、皂苷B和皂苷A的含量。采用外標法同時測定藥材中該4種成分的量,將測定值與計算值進行多種統(tǒng)計學檢驗,結(jié)果表明,在不同的條件下相對校正因子重現(xiàn)性良好,10批預知子中皂苷X、皂苷B及皂苷A的計算值與外標法實測值相比沒有顯著性差異。張勇等建立一測多評法同時測定木瓜中齊墩果酸和熊果酸2種三萜酸成分。實驗以齊墩果酸為內(nèi)參物,考察了HPLC和UPLC2種色譜體系,建立相對校正因子計算熊果酸的量,并與外標法進行比較,結(jié)果表明,在不同的色譜分析體系中,熊果酸相對校正因子及保留時間的重現(xiàn)性良好,且計算值與實測值偏差范圍較小。2.7外標法測樣品中的化合物測定劉永利等以咳喘寧片為研究對象,以嗎啡為對照,建立嗎啡與磷酸可待因、鹽酸罌粟堿、鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的校正因子,并利用校正因子計算磷酸可待因、鹽酸罌粟堿、鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量,同時利用外標法測定這4種成分的含量,結(jié)果顯示采用校正因子計算的含量值與外標法實測值之間沒有明顯差異,表明該法的準確性和科學性。陳曉斌等以熱痹消顆粒為研究對象,建立小檗堿與黃柏堿、藥根堿、巴馬汀的相對校正因子,并將該因子用于這4種生物堿的含量測定,同時采用外標法測定4種生物堿的含量。結(jié)果表明一測多評法對不同的色譜柱和儀器的計算值與外標法實測值之間沒有明顯差異。2.8相對校正因子的計算林永強等采用一測多評法同步測定銀黃片中6種咖啡酰奎寧酸,實驗以綠原酸(5-O-咖啡?？鼘幩?為指標,建立該成分與3-O-咖啡酰奎寧酸、4-O-咖啡酰奎寧酸、4,5-O-二咖啡?？鼘幩?、3,5-O-二咖啡?？鼘幩?、3,4-O-二咖啡?？鼘幩岬南鄬πＵ蜃?用相對校正因子計算各成分的量,同時對13批銀黃片一測多評的計算結(jié)果與外標實測值進行比較,并考察了不同品牌儀器和不同廠家色譜柱進行考察。方法準確性評價結(jié)果表明利用一測多評法在不同色譜柱的計算值與外標實測值之間沒有顯著性差異。3樣點測定結(jié)果目前一測多評法中校正因子的計算,文獻[11，21]普遍采用多點校正后求平均值的方法。但如果其中2個點前后偏差較大時,便直接影響整個平均值,導致計算值出現(xiàn)一定的偏差。另外,色譜峰的準確定位是一測多評法技術的應用前提,一般采用保留時間差或相對保留值等參數(shù)結(jié)合色譜圖整體特征,以及每個峰的紫外吸收特征來定位其余待測成分的色譜峰。但由于不同實驗儀器及色譜柱的差異較大,保留時間出現(xiàn)漂移,導致有些結(jié)果可能出現(xiàn)較大偏差。何兵等以雙黃連口服液為研究對象,采用3種校正方法(多點校正、斜率校正、定量因子校正)建立雙黃連口服液中綠原酸與11個活性成分(新綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、連翹酯苷A、野黃芩苷、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C、黃芩苷、連翹苷及漢黃芩苷)之間的相對校正因子,同時采用線性回歸法定位色譜峰,實現(xiàn)只用一個對照品測定雙黃連口服液中12個成分的含量。結(jié)果表明在一定線性范圍內(nèi),以3種校正方式所得校正因子計算結(jié)果與外標法或線性回歸法并無顯著性差異,且該法更簡便快捷、結(jié)果準確可靠、具有良好的重現(xiàn)性,而線性回歸法定位色譜峰比文獻采用相對保留時間更準確?？梢姴捎脴藴是€斜率之比計算校正因子,即使有幾個點存在較大偏差,其對整個標準曲線斜率影響不大,相對多點校正更科學合理。而且斜率校正無需逐個濃度計算校正因子求平均值,直接以標準曲線斜率計算,相對更快捷。此外,通過線性回歸法推導出相應的校正方程,并用該方程快速推測各成分理論出峰時間,若該色譜峰臨近還有其他色譜峰,再根據(jù)紫外吸收光譜、整體峰形或峰面積比,即能在一定程度上準確定位色譜峰。4測多評法的原則中藥化學成分的研究是一項復雜龐大的工程,涉及眾多學科的交叉結(jié)合。一測多評法的提出,解決了部分因?qū)φ掌穬r格昂貴或難供應成分指標檢測的難題,實現(xiàn)了多指標成分同時檢測,也為中藥質(zhì)量新的評價模式提供了更好的分