干擾素的研究進(jìn)展及應(yīng)用前景

干擾素的研究進(jìn)展及應(yīng)用前景高等生物化學(xué)中期答辯作者：ZJJ學(xué)院：化學(xué)化工學(xué)院專業(yè)：藥品化學(xué)學(xué)號(hào)：干擾素的研究進(jìn)展及應(yīng)用前景作者：摘要：干擾素是人體受到病毒或雙股RNA刺激物的刺激產(chǎn)生免疫應(yīng)答，由細(xì)胞合成及分泌的一族蛋白質(zhì)類，含有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功效、抗病毒、抗腫瘤等多個(gè)作用,是機(jī)體防御系統(tǒng)的重要構(gòu)成部分。它通過干擾病毒基因轉(zhuǎn)錄或病毒蛋白組分的翻譯，從而制止或限制病毒感染，是現(xiàn)在最重要的抗病毒感染和抗腫瘤生物制品。本文就干擾素的分類、分子構(gòu)造、作用機(jī)理、生物學(xué)活性、體外重組技術(shù)以及臨床應(yīng)用等方面的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述，并對(duì)其應(yīng)用前景做出預(yù)測(cè)展望。核心詞：干擾素研究進(jìn)展應(yīng)用前景ResearchprogressandapplicationprospectofinterferonAuthor:(TianjinUniversityofTechnology,Tianjin300072,China)Interferon(IFN)ishumanbodygetsvirusordoublestrandedtheexcitinggenerationimmunityofRNAexciterisrespondent,bythecellsynthesisreachesexcretivegensproteinkind,hasthefunctionofregulatingtheimmunefunction,antiviralandantitumor,isanimportantpartofthebody'sdefensesystem.Itcanpreventorlimitviralinfectionbyinterferingwithviralgenetranscriptionortranslationoftheviralproteins，soitisthemainantiviralandantitumorbiologicalproducts.Theresearchofinterferonclassification,molecularstructure,mechanismofaction,biologicalactivity,vitriolrecombinationtechniquesandrelatedresearchdevelopmentofclinicalapplicationarereviewedinthepaper,andforecaststheprospecttoitsapplicationprospect.Keywords:InterferonResearchprogressApplicationProspects前言干擾素是由干擾素誘生劑誘導(dǎo)生物細(xì)胞后所產(chǎn)生的一類高活性多功效的糖蛋白，由Isaacs和Lindenmann等于1957年運(yùn)用雞胚絨毛尿囊膜研究流感病毒干擾現(xiàn)象時(shí)發(fā)現(xiàn)的。干擾素自被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，其廣譜的抗病毒、抗腫瘤活性及其強(qiáng)大的免疫調(diào)節(jié)作用而受到研究者們的重視。近年來(lái)，IFN已經(jīng)成為病毒學(xué)、細(xì)胞學(xué)、分子遺傳學(xué)、免疫學(xué)、生化學(xué)、腫瘤學(xué)、以及臨床學(xué)家研究的重點(diǎn)對(duì)象，有逐步形成一種新興邊沿學(xué)科的趨向。該文章是對(duì)干擾素的研究進(jìn)展及發(fā)展前景進(jìn)行綜述。1.干擾素的產(chǎn)生機(jī)理與分類1.1干擾素的產(chǎn)生機(jī)理IFN是人和動(dòng)物在細(xì)胞受到適宜刺激條件下產(chǎn)生的一種微量的、含有高度生物學(xué)活性的糖蛋白。IFN的產(chǎn)生是受細(xì)胞基因組控制的，由于細(xì)胞中IFN基因克制物（IFNsurpressor）與IFN基因結(jié)合克制復(fù)制酶系統(tǒng)，因此普通狀況下，IFN基因處在克制狀態(tài)。當(dāng)病毒或者其它誘生劑作用于細(xì)胞膜后，使IFN基因脫解克制。IFN操縱子開始轉(zhuǎn)錄，合成mRNA,mRNA快速轉(zhuǎn)移至細(xì)胞漿，在核糖體上轉(zhuǎn)議成IFN前體，切除信號(hào)肽后，成熟的IFN分泌到細(xì)胞外[1-2]。1.2干擾素的分類在過去,干擾素是按其與受體結(jié)合的原則,分為Ⅰ型和Ⅱ型,后來(lái)發(fā)現(xiàn)Ⅰ型干擾素按其與抗體結(jié)合的抗原性不同又可分為二類,故把Ⅰ型干擾素又分為A、B兩大類,將原來(lái)的Ⅱ型干擾素命名為γ,此后30數(shù)年都把干擾素分為A、B、C三大類,其中即使有諸多人聲稱發(fā)現(xiàn)了第四、第五類干擾素等,但均未得到國(guó)際干擾素和細(xì)胞因子研究學(xué)會(huì)(ISICR)的必定,最后均被否認(rèn)。直到近幾年,干擾素的研究又有了十分重大的突破性進(jìn)展。新發(fā)現(xiàn)的IFN-K1(lambda1)、IFN-K2和IFN-K3,或IL-28A、IL-28B和IL-29都有干擾素活性,但它結(jié)合的受體與Ⅰ型干擾素受體不同[3-4]。這些新發(fā)現(xiàn)的干擾素,按其與受體結(jié)合的不同，將IL-28A、IL-28B、IL-29或IFN-K1(lambda1)、IFN-K2和IFN-K3命名為Ⅲ型干擾素。因此,按干擾素與其結(jié)合的受體不同分為TypeⅠ、TypeⅡ和TypeⅢ。干擾素的具體分類以下:Ⅰ型干擾素涉及IFN-A(亞型IFNA-1、2、3等；亞亞型IFNα-1a、1b、1c或IFNα-2a、2b、2c等);IFN-β;IFN-κ;IFN-ε;IFN-ω等。Ⅱ型干擾素即過去的IFN-γ。Ⅲ型干擾素涉及IFN-λ1、IFN-λ2和IFN-λ3[5]。2.干擾素的生物活性及作用機(jī)理2.1干擾素的生物學(xué)特性2.1.1高度的生物活性IFN含有廣譜抗病毒活性,一種IFN既可克制多個(gè)RNA病毒,又可克制多個(gè)DNA病毒。不同病毒對(duì)IFN的敏感性不同,有囊膜的病毒最敏感。不僅不同種類的病毒對(duì)IFN的敏感性有差別,并且同一種的不同變種對(duì)IFN的敏感性也不完全相似。除廣譜抗病毒活性外,IFN還能克制病毒以外其它微生物的生長(zhǎng),克制細(xì)胞分裂,克制腫瘤細(xì)胞增殖和參加調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。2.1.2相對(duì)的種屬特異性IFN的活力含有相對(duì)的種屬特異性,即某一種屬動(dòng)物(或組織細(xì)胞)產(chǎn)生的IFN只能對(duì)同種屬或種屬非?？拷膭?dòng)物或細(xì)胞有保護(hù)力,即IFN活力在同種細(xì)胞上高,在異種細(xì)胞上低。雞IFN在雞細(xì)胞上,1/4000的滴度即可抵抗水泡性口炎病毒(VSV)的攻擊,而在鼠細(xì)胞上,滴度1/30仍不能保護(hù)。但是這種特異性是相對(duì)的,不是絕對(duì)的,如猴細(xì)胞產(chǎn)生的IFN除對(duì)猴有保護(hù)作用外,對(duì)人和兔的細(xì)胞也有一定的保護(hù)作用。2.1.3微弱的抗原性1975年有人報(bào)告,用鼠或雞IFN免疫兔或豚鼠,每七天1次,在第10次出現(xiàn)抗體,第18次后來(lái)抗體滴度稍高。也有人報(bào)告,用人和兔的IFN免疫豚鼠,每七天1次,持續(xù)六個(gè)月才獲得中和抗體。2.2抗病毒作用及作用機(jī)理IFN-α、β、γ都有抗病毒作用[6]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)成果證明,IFN-C抗病毒活性遠(yuǎn)較Ⅰ型低,IFN-C和IFN-B能互相加強(qiáng)抗病毒作用。IFN抗病毒含有廣譜性,但它對(duì)細(xì)胞抗病毒作用是間接的,并且是非特異性[7]。病毒感染細(xì)胞造成IFN的產(chǎn)生,并隨被感染細(xì)胞死亡、崩解而釋出。IFN分子向附近擴(kuò)散,隨血液循環(huán)至全身。IFN圖2.2.1干擾素抗病毒作用Fig2.2.1Antiviraleffectofinterferon是由宿主細(xì)胞編碼的蛋白質(zhì),因其是通過作用于靶細(xì)胞,激活靶細(xì)胞內(nèi)的基因而發(fā)揮作用的,故其含有廣譜抗病毒作用。當(dāng)IFN進(jìn)入細(xì)胞后,干擾素與細(xì)胞表面的干擾素受體結(jié)合后,可誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生含有酶活性的抗病毒蛋白(AntivirualProtein,AVP)。已經(jīng)懂得的AVP最少有3種:蛋白激酶、磷酸二脂酶和2.-5.寡腺苷酸合成酶[8]。蛋白激酶和磷酸二脂酶能破壞細(xì)胞核糖體轉(zhuǎn)譯病毒蛋白質(zhì),2.-5.寡腺苷酸合成酶能降解mRNA。這些抗病毒蛋白或克制轉(zhuǎn)錄酶,制止mRNA的形成,或克制病毒DNA和RNA的合成。因此,能夠說(shuō)干擾素是通過AVP間接地克制病毒的增殖而達(dá)成抗病毒作用。2.3免疫調(diào)節(jié)作用及作用機(jī)理干擾素含有很強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)作用。它能夠調(diào)節(jié)T、B淋巴細(xì)胞的免疫功效,小劑量起增進(jìn)作用,大劑量起克制作用。干擾素也可增加IgG的Fc受體體現(xiàn)，從而有助于巨噬細(xì)胞對(duì)抗原的吞噬，K細(xì)胞、NK細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷以及T、B淋巴細(xì)胞的激活，增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答能力。IFN或IFN誘生劑解決后,可引發(fā)IFN敏感細(xì)胞表面抗原和某些受體的體現(xiàn)增加。。另外，IFN還能影響抗原提呈作用，如IFN-γ能明顯增加抗原提呈細(xì)胞體現(xiàn)MHC-Ⅱ類抗原的數(shù)量，增強(qiáng)抗原提呈細(xì)胞與T細(xì)胞的互相作用，增加輔助T細(xì)胞的數(shù)量并增強(qiáng)遲發(fā)型超敏反映。IFN含有巨噬細(xì)胞活化因子的作用，能引發(fā)巨噬細(xì)胞的殺腫瘤效應(yīng)。IFN-A/B重要是通過對(duì)淋巴細(xì)胞和巨嗜細(xì)胞的調(diào)節(jié)或誘導(dǎo)MHCI型分子的體現(xiàn)起免疫調(diào)節(jié)作用的[10]。IFN-α/β能誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞釋放腫瘤壞死因子(TNF),啟動(dòng)細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CLT)和NK細(xì)胞的分化;IFN-α/β能誘導(dǎo)巨嗜細(xì)胞提高Fc受體的體現(xiàn),增強(qiáng)巨嗜細(xì)胞吞噬抗原的能力;IFN-α/β能誘導(dǎo)病毒感染細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞提高M(jìn)HCI型分子的體現(xiàn)水平,增強(qiáng)免疫系統(tǒng)對(duì)其的去除作用。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),IFN-α/β在先天性免疫與獲得性免疫的轉(zhuǎn)變過程中起重要的作用。IFN-α/β這一重要功效以樹突狀細(xì)胞的產(chǎn)生和激活為紐帶[11]。IFN-γ對(duì)克制性T細(xì)胞的作用有雙向性［12］。首先,IFN-γ可激活NK等細(xì)胞,增強(qiáng)抗病毒、抗腫瘤的功效;另首先,它能克制B細(xì)胞分泌IgE,從而避免因IgE水平過高而發(fā)生Ⅰ型超敏反映,它還能恢復(fù)克制性T細(xì)胞的功效,減少免疫復(fù)合物的局部沉積,克制Ⅲ型超敏反映的發(fā)生。IFN-γ克制TH細(xì)胞的增殖和產(chǎn)生IL-4、IL-10等細(xì)胞因子，這種克制作用能變化免疫反映的類型和產(chǎn)生抗體的類型。IFN-γ能誘導(dǎo)人B細(xì)胞的增殖和分化，與IL-2協(xié)同增加輕鏈合成，IFN-γ對(duì)B細(xì)胞的促增殖作用可能由其它因素介導(dǎo)，由于完全純化的B細(xì)胞對(duì)IFN-γ無(wú)反映。IFN-γ能夠明顯增加病毒感染細(xì)胞和抗原遞呈細(xì)胞體現(xiàn)MHCII型分子產(chǎn)生的能力。IFN-γ可誘導(dǎo)單核細(xì)胞、巨嗜細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、皮膚成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等MHCII類抗原的識(shí)別過程;IFN-γ可使靜止的CD4+T細(xì)胞分化為Th1細(xì)胞,并克制Th2細(xì)胞的增殖,可增進(jìn)CD8+CLT的成熟及殺傷活性;IFN-C可作用于B細(xì)胞,促使其增殖分化,產(chǎn)生抗體,并誘導(dǎo)IgG2a和IgG3的類型轉(zhuǎn)換；2.4抗腫瘤作用及作用機(jī)理實(shí)驗(yàn)表明,在體內(nèi)外干擾素都能夠控制腫瘤生長(zhǎng),克制腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移[13]。在3類干擾素中,抗腫瘤作用以IFN-γ最強(qiáng)。干擾素抗腫瘤重要體現(xiàn)在：第一，克制腫瘤的增殖，但需連圖2.4.1IFN抗腫瘤作用機(jī)理示意圖Fig2.4.1SchematicdiagramofIFNanti-tumoreffect續(xù)使用干擾素，才干顯示抑瘤效果；有些腫瘤的發(fā)生與病毒有關(guān),這些病毒的核酸往往需要整合到細(xì)胞的DNA中去,形成病毒基因,這些基因持續(xù)存在是腫瘤的發(fā)生因素之一。由于IFN的克制作用,感染病毒的量明顯減少,這樣就可避免新細(xì)胞受病毒侵犯而轉(zhuǎn)化成腫瘤細(xì)胞。第二，克制腫瘤細(xì)胞的增生,干擾素作用于細(xì)胞膜,刺激腺苷酸環(huán)化酶,使cAMP增加,克制DNA的合成及細(xì)胞分裂,故有抗腫瘤作用；第三，調(diào)動(dòng)機(jī)體免疫系統(tǒng),提高機(jī)體抗瘤免疫力。研究者已將IFN-γ基因借助逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)移入腫瘤細(xì)胞，使腫瘤細(xì)胞自行分泌IFN-γ，發(fā)揮殺瘤效應(yīng)。IFN能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞及NK細(xì)胞的殺傷性,增加細(xì)胞表面抗原和受體的體現(xiàn),克制B細(xì)胞的功效,從而減少腫瘤細(xì)胞表面封閉抗體的水平。第四，干擾素能變化瘤細(xì)胞表面性能,誘發(fā)新的抗原,從而易被免疫監(jiān)視細(xì)胞識(shí)別并加以排斥。3.干擾素的基本特性3.1普通特性干擾素可在多個(gè)誘導(dǎo)劑的誘導(dǎo)下產(chǎn)生,用植物凝集素(PHA)、病毒等作為誘導(dǎo)劑,均可運(yùn)用半數(shù)細(xì)胞病變克制法(CPEI50)測(cè)到誘導(dǎo)生成的干擾素活性[14]。項(xiàng)黎新等還用草魚出血病病毒(GCHV)體外誘導(dǎo)草魚白細(xì)胞產(chǎn)生干擾素。干擾素的分子質(zhì)量普通為20ku~100ku,不能透過普通透析膜,但可通過濾菌器,干擾素比病毒顆粒小,能沉淀病毒的離心力不能沉降干擾素[15]。干擾素普通在56℃下30min不會(huì)被滅活,-20℃下可長(zhǎng)久保存。Ⅰ型干擾素含有耐酸性,在pH2.0~10.0條件下很穩(wěn)定。Ⅱ型干擾素不耐酸,也不耐熱,在pH2時(shí)不穩(wěn)定,在56℃下30min會(huì)被破壞。干擾素普通由130個(gè)~170個(gè)氨基酸構(gòu)成,含17種以上的氨基酸,其中的天冬氨酸、谷氨酸和亮氨酸含量較高,不含核酸,因此不被DNA酶或RNA酶破壞,但易被胰蛋白酶、乙醚、氯仿、酮基等破壞。干擾素含有廣譜性，即干擾素作用于機(jī)體有機(jī)組織細(xì)胞后，可使其獲得抗多個(gè)病毒和微生物的能力。但干擾素僅作用于異常細(xì)胞，對(duì)正常細(xì)胞的作用很小，也就是說(shuō)，干擾素對(duì)一種體細(xì)胞來(lái)說(shuō)又有嚴(yán)格的選擇性，并且有相對(duì)的種屬特異性，即由某一種生物細(xì)胞產(chǎn)生的干擾素只作用于同種生物細(xì)胞，使其獲得保護(hù)力[16]。對(duì)其它種生物細(xì)胞則無(wú)作用，因而其應(yīng)用受到限制。3.2干擾素的分子構(gòu)造和基因IFN-α和IFN-β基因位于人9號(hào)染色體和小鼠4號(hào)染色體上,并連鎖在一起,而人和小鼠IFN-γ基因分別定位于12號(hào)和10號(hào)染色體[17]。在DNA水平上,IFN-γ基因與IFN-α/β基因無(wú)同源性,而人和小鼠的IFN-γ有65%左右同源性。IFN-α有多個(gè)亞型,各亞型均含165~166個(gè)氨基酸殘基,構(gòu)造相似。IFN-α1型分子中含有5個(gè)半胱氨酸的殘基,形成2對(duì)二硫鍵,分別為Cys1-Cys98和Cys29-Cys138。第85位上半胱氨酸的巰基游離。IFN-α2型分子在第85位不是半胱氨酸,而是酪氨酸,它所形成的二硫鍵與IFN-α1型完全相似。IFN-α活性形式為單體,盡管某些干擾素在翻譯后進(jìn)行N-糖苷鍵型和O-糖苷鍵型糖基化修飾,但大多數(shù)亞型都沒有糖基化。現(xiàn)在已鑒定出的IFN-α非等位基因最少有15個(gè);IFN-β由單基因編碼,含166個(gè)氨基酸殘基。IFN-β分子中含有3個(gè)半胱氨酸殘基,其中能形成二硫鍵的是Cys31-Cys141,它與IFN-α的Cys29-Cys138構(gòu)造同源。第17位的半胱氨酸巰基游離。IFN-γ也是由單基因編碼的,其天然活性形式是N-糖基化的同源二聚體。IFN-C有不同于Ⅰ型干擾素的細(xì)胞表面結(jié)合受體[17]。IFN-γ不含半胱氨酸,在第25位和第97位的Asn處有兩個(gè)N糖基化位點(diǎn)。另外,尚有來(lái)源于白細(xì)胞的IFN-X,IFN-X含172~174個(gè)基酸殘基。不同類型IFN分子含有不同程度的氨基酸同源性(IFN-α與IFN-β分子同源性為28%,與IFN-X分子同源性高達(dá)60%)。IFN-α與IFN-β的構(gòu)造基因均定位于人的第9號(hào)染色體上,并且都不含有內(nèi)含子,IFN-γ基因定位于第12號(hào)染色體上,共含有3個(gè)內(nèi)含子。動(dòng)物IFN-γ基因4個(gè)外顯子編碼數(shù)目相近的氨基酸,第一種外顯子包含5.UTR編碼19個(gè)氨基酸的信號(hào)肽序列和22個(gè)氨基酸的成熟蛋白質(zhì);外顯子2、3、4分別編碼23、60、40個(gè)氨基酸,外顯子4包含終止子與3.UTR,外顯子2與4編碼的氨基酸序列含有高度保守性,分別為56.5%與42.5%。3個(gè)內(nèi)含子精確插入兩個(gè)密碼子之間的開放閱讀框。內(nèi)含子都含有保守性序列,涉及5,GT與3,AG。盡管氨基酸序列存在差別,但I(xiàn)型干擾素含有相似的三維構(gòu)造,都由緊密排列的α螺旋構(gòu)造域構(gòu)成,并體現(xiàn)出相似的生理生化特性,如對(duì)pH值的穩(wěn)定性和對(duì)同類細(xì)胞表面受體的識(shí)別相似[18]。4.干擾素的基因工程隨著基因工程技術(shù)的發(fā)展,20世紀(jì)70年代,科學(xué)家開始探索干擾素的基因工程生產(chǎn)辦法。國(guó)際上最先克隆的干擾素為IFN-β,由日本的Taniguchi等于1979年完畢的。研究表明,通過工程化大腸桿菌、酵母及真核細(xì)胞(如CHO等系統(tǒng))體現(xiàn)的重組干擾素含有與天然干擾素高度相似的生物學(xué)活性,且純度更高、性能更均一。美國(guó)食品藥品管理局(FDA)1986年首先同意IFN-αIIa和IFN-αIIb干擾素投放市場(chǎng),基因工程IFN-β、IFN-γ也相繼于1990、1993年獲準(zhǔn)投放市場(chǎng)。我國(guó)基因工程干擾素的研制工作是由侯云德專家首先開始的,他于1982年建立了無(wú)性繁殖系統(tǒng),并于1985年成功體現(xiàn)出干擾素。隨即我國(guó)科學(xué)家于1989年又成功研制出中國(guó)人基因克隆和體現(xiàn)的基因工程藥品-基因工程IFN-αlb型干擾素,并于1992年獲得國(guó)家一類新藥證書。此后,人的多個(gè)干擾素不停得到克隆與體現(xiàn),并在臨床醫(yī)學(xué)上得到廣泛應(yīng)用。近年來(lái),隨著新型載體的不停開發(fā),獸用基因工程干擾素得到進(jìn)一步研究,如陳濤等[19]用巨引物PCR法介導(dǎo)的定點(diǎn)突變將其克隆的豬IFN-A第86位Cys(TGC)突變?yōu)門yr(TAC),將其成熟蛋白N端第一種密碼子TGT同義突變?yōu)榇竽c桿菌偏愛的密碼子TGC,構(gòu)建了大腸桿菌融合基因體現(xiàn)載體pGEX-IFN,體現(xiàn)了豬IFN-α;謝海燕等[20-21]也克隆了豬IFN-α基因,構(gòu)建了原核體現(xiàn)載體,成功地體現(xiàn)了豬IFN-α;葛麗等[22]克隆了豬IFN-A,構(gòu)建了真核體現(xiàn)載體,并成功地體現(xiàn)了豬IFN-α;曹瑞兵等[23]克隆并改造了豬IFN-α1基因,實(shí)現(xiàn)了在原核系統(tǒng)中的高效體現(xiàn);黃志清等[24]則實(shí)現(xiàn)了豬IFN-γ基因在真核體現(xiàn)載體中的體現(xiàn)。這些研究為重組干擾素用作新型廣譜抗病毒生物制劑和免疫增強(qiáng)劑的開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。圖4.1注射用重組人干擾素α2aFig4.1Recombinanthumaninterferonα2a5.干擾素的臨床應(yīng)用由于干擾素含有較強(qiáng)的抗病毒、抗腫瘤和參加免疫調(diào)節(jié)作用,因此干擾素在人類臨床醫(yī)學(xué)中得到了廣泛應(yīng)用。臨床證明,IFN類藥品中,IFN-α2a和IFN-α2b的再次給藥可提高療效,正在進(jìn)行治療慢性非活動(dòng)性肝炎、亞急性硬化癥腦炎、人T細(xì)胞白血病病毒骨髓癥等適應(yīng)癥的研究。IFN-γ可激活Th1細(xì)胞以增進(jìn)細(xì)胞免疫功效,針對(duì)免疫原性弱的癌細(xì)胞可激活細(xì)胞免疫應(yīng)答。針對(duì)癌癥、艾滋病、丙型肝炎抗感染治療藥的開發(fā)[25],IFN-γ的研究有可能使其成為治療慢性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性肉芽腫的藥品,也有可能成為對(duì)現(xiàn)有抗癌藥無(wú)效的腫瘤的治療藥品。并且IFN是唯一一種被FDA同意治療慢性丙型肝炎的藥品。病毒唑聯(lián)合IFN-A治療丙型肝炎,對(duì)于40%慢性丙型肝炎患者含有不同程度的療效。新開發(fā)的一種藥品聚乙二醇干擾素,由于其獨(dú)特的藥動(dòng)學(xué)特點(diǎn),在機(jī)體內(nèi)耐受性要優(yōu)于普通干擾素[26],臨床實(shí)驗(yàn)中顯示出比普通干擾素更加好的療效。因此,聚乙二醇干擾素聯(lián)合利巴韋林治療慢性丙型肝炎被證明是現(xiàn)在的最佳療法[27-28]。運(yùn)用IFN-γ對(duì)細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)所發(fā)揮的重要作用,即通過克制IL-24而減少IgE的產(chǎn)生,IFN-γ也可能成為全新的抗過敏藥[29]。由于干擾素能夠減少SARS病毒在肺部的含量,干擾SARS病毒的增殖,也可用于SARS的治療。而在人的Caco2細(xì)胞(人的結(jié)腸癌細(xì)胞)和Vero細(xì)胞中,Ⅱ型IFN-γ和Ⅰ型干擾素((IFN-α,IFN-β)對(duì)SARS-CoV含有較好的抗病毒活性[30]。用病毒唑與IFN-β聯(lián)合給藥能夠克制病毒的增殖,其中病毒唑的使用量減少至單獨(dú)使用量的1/10;IFN-β濃度減少了50倍~2000倍,免疫克制治療實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示較高的協(xié)同抗病毒作用。結(jié)合治療的辦法不僅減少了單個(gè)劑量的用量,并且在早期的SARS治療階段中效果明顯,可有效地克制病毒復(fù)制,制止了免疫病理?yè)p傷。另外,干擾素還應(yīng)用于生殖道衣原體感染、淺表膀胱癌、鋒利濕疣、皮膚病、血液系統(tǒng)疾病、艾滋病有關(guān)綜合征等的治療。世界上已有許多國(guó)家同意生產(chǎn)使用重組干擾素制劑,用于治療多個(gè)疾病。通過臨床應(yīng)用治療表明,用干擾素治療,普通無(wú)嚴(yán)重副反映,少數(shù)病例可有發(fā)熱、疲勞不適、食欲不佳、白細(xì)胞減少以及血壓波動(dòng)等癥狀,但停藥后會(huì)很快消失。6.干擾素的研究進(jìn)展及市場(chǎng)前景為了將干擾素用于臨床實(shí)際,通過了幾十年不間斷的努力,先后經(jīng)歷了干擾素誘導(dǎo)物研究、干擾素作用介質(zhì)的研究和干擾素血液制品的研究三個(gè)階段,仍舊沒有解決干擾素的臨床需要問題。直到20世紀(jì)70年代開始探索用基因工程的辦法生產(chǎn)干擾素,改造干擾素及其體現(xiàn)系統(tǒng),獲得了很大進(jìn)步。1980年Derynck等克隆了人干擾素基因,1981年Goeddel報(bào)道干擾素-γ基因克隆成功,1982年Deuager等根據(jù)人干擾素氨基酸序列,首先人工合成了干擾素基因,并克隆成功。我國(guó)于1982年從新城疫病毒(NDV)誘生的臍帶血白細(xì)胞中提取干擾素mRNA,經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成cDNA,也建立了人干擾素基因無(wú)性繁殖系,并產(chǎn)生了重組干擾素[31]。十?dāng)?shù)年的臨床應(yīng)用研究成果表明,干擾素活性的發(fā)揮受微細(xì)基因組的調(diào)控,與機(jī)體內(nèi)許多RNA及蛋白質(zhì)的合成有關(guān)。1986年,美國(guó)食品藥品管理局(FDA)首先同意α2a和α2b干擾素投放市場(chǎng),基因工程β、γ干擾素也相繼于1990年、1993年獲準(zhǔn)投放市場(chǎng)。已有57個(gè)國(guó)家同意干擾素上市,治療約30多個(gè)疾病。國(guó)內(nèi)研制開發(fā)的人αⅠa、αⅡb基因工程干擾素已經(jīng)投放市場(chǎng),其中人工αⅠb型基因工程干擾素屬我國(guó)首創(chuàng)。基因工程載體技術(shù)的研究和應(yīng)用也增進(jìn)了干擾素的研究與開發(fā)。人干擾素-β基因在煙草中體現(xiàn)成功、新型載體不停構(gòu)建成功、新的亞型干擾素基因陸續(xù)被克隆、測(cè)序和體現(xiàn)。例如,構(gòu)建了新型雙順反子體現(xiàn)載體PEC34和人干擾素-γ植物雙元體現(xiàn)載體;克隆和測(cè)序了豬干擾素-β基因和肉雞干擾素-α基因,并將后者在大腸埃希菌中進(jìn)行了體現(xiàn)；克隆和鑒定了雞干擾素-γ基因,為進(jìn)一步研究該基因的功效及其在控制家禽傳染病方面的應(yīng)用奠定了一定基礎(chǔ)。隨著人們對(duì)干擾素研究的不停進(jìn)一步,特別是當(dāng)代分子生物學(xué)飛速發(fā)展,人們對(duì)干擾素的分子構(gòu)造、理化特性、生物學(xué)特性、產(chǎn)生和作用機(jī)理的不停闡明,使得人們?cè)诟蓴_素領(lǐng)域獲得了空前的進(jìn)步。在將來(lái)的臨床研究中,干擾素獨(dú)特、多樣的生物學(xué)效應(yīng)是開發(fā)這種細(xì)胞因子治療優(yōu)勢(shì)的基本點(diǎn),將干擾素與癌癥疫苗或病毒疫苗結(jié)合使用,通過選擇適宜的劑量和給藥辦法,可能是在機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生最佳的和持久的抗癌應(yīng)答及抗病毒應(yīng)答的重要途徑。干擾素適應(yīng)癥廣泛，已獲同意的適應(yīng)癥臨床應(yīng)用療效確切，現(xiàn)在尚無(wú)哪種新藥能夠取代干擾素。根據(jù)新藥開發(fā)研制周期的特點(diǎn)，最少將來(lái)3~5年內(nèi)國(guó)內(nèi)干擾素的市場(chǎng)不會(huì)受到大的沖擊，甚至?xí)煌Ｔ黾?。全?guó)干擾素市場(chǎng)銷售額靠近10億元人民幣。1997年以前國(guó)內(nèi)重組干擾素市場(chǎng)重要由進(jìn)口產(chǎn)品獨(dú)霸天下，97年后來(lái)國(guó)產(chǎn)重組干擾素先后問世，當(dāng)時(shí)干擾素年銷量但是億元，短短5年時(shí)間，銷量翻了幾翻，并且價(jià)格也不停下調(diào)到比較符合中國(guó)老百姓現(xiàn)在的承受水平，在市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)中占有明顯的價(jià)格優(yōu)勢(shì)，使進(jìn)口產(chǎn)品市場(chǎng)不停減少，國(guó)產(chǎn)干擾素成為市場(chǎng)的主導(dǎo)。盡管我國(guó)面臨加入WTO后給干擾素帶來(lái)的挑戰(zhàn)與沖擊，但干擾素以其質(zhì)量高，療效穩(wěn)定，價(jià)格低，兩種注射劑型的優(yōu)勢(shì)，一定能打出獨(dú)特的國(guó)內(nèi)干擾素品牌效應(yīng)，贏得市場(chǎng)，贏得民心。

現(xiàn)在國(guó)內(nèi)生產(chǎn)總值以每年7%的速度發(fā)展，而醫(yī)藥工業(yè)每年以10-15%的速度增加。生物制藥業(yè)年產(chǎn)值最多僅相稱于醫(yī)藥工業(yè)產(chǎn)值的2%，但增加速度很快。隨著人口的增加和生活水平的提高，對(duì)醫(yī)藥的需求不停增加，衛(wèi)生部1997年的統(tǒng)計(jì)數(shù)字表明，每年平均每一住院患者住院醫(yī)療費(fèi)增加31%，其中藥費(fèi)占50%。將來(lái)3-5年應(yīng)重視農(nóng)村市場(chǎng)的開發(fā)，這是不容無(wú)視的戰(zhàn)略重點(diǎn)，農(nóng)村人口多，地區(qū)廣，市場(chǎng)容量大，投入產(chǎn)出比值大，渴望能成為新的增加點(diǎn)。參考文獻(xiàn)：[1]銀曉,關(guān)平原.干擾素的研究進(jìn)展[J].畜牧與飼料科學(xué),(2):66-68.[2]曲建惠,張玲霞.干擾素的分子生物學(xué)機(jī)制研究進(jìn)展[J].國(guó)際流行病學(xué)傳染病學(xué)雜志,,33(1):38-44.[3]KotenkoSV,GallagherG,BaurinVV,etal.IFN-Ksmediateantiviralprotectionthroughadistinctclassòcytokinereceptorcomplex[J].NatureInmunol,,4:69-77c.[4]SheppardP,KindsvogelW,XuW,etal.IL-28,IL-29andtheirclassIIcytokinereceptorIL-28R[J].NatureImmunol,,4:63-68.[5]劉新垣.干擾素研究及其重大突破性研究進(jìn)展[J].中國(guó)處方藥,,7:33-35.[6]張君,于三科.干擾素-C介導(dǎo)的抗弓形蟲作用及其作用機(jī)理[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,,21(1):25-27.[7]劉淑芳.干擾素抗病毒的臨床研究進(jìn)展[J].濱州職業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào),,3(1):67-70.[8]高建忠,祝衛(wèi)東,黃玉幫.干擾素的研究進(jìn)展[J].動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué),,21(2):58-60.[9]孫圣蘭,江青艷,傅偉龍.干擾素的研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,,06:39-41.[10]ChinsangaramJ,PicconeME,GrubmanMJ.AbilityofFoot-and-MouthDiseaseVirustoFormPlaquesinCellCultureisAssociatedwithSuppressionofAlpha/BetaInterferon[J].JViro,l1999,73(11):9891-9898.[11]LeBonA,ToughDF.LinksbetweenInnateandAdaptiveImmunityviaTypeIInterferon[J].CurrOpinImmuno,l,14(4):432-436.[12]張彩,田志剛.γ干擾素的負(fù)向免疫調(diào)節(jié)作用[J].當(dāng)代免疫學(xué),,02:89-92.[13]潘燁,鄭起.干擾素在腫瘤治療中應(yīng)用的研究進(jìn)展[J].國(guó)外醫(yī)學(xué):外科學(xué)分冊(cè),,32(1):10-13.[14]汪明,宋江楠,白泉.干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白1協(xié)同干擾素克制癌細(xì)胞增值[J].農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào),,40(8):377.[15]王軍志.國(guó)外重組細(xì)胞因子藥品研究新動(dòng)向[J].中國(guó)腫瘤生物治療雜志,1997,4(2):146[16]陳炬,衛(wèi)引茂,蘇曉東.1990.干擾素抗腫瘤克制的應(yīng)用.中國(guó)科學(xué)(B輯),19(3):253[17]孫志宏,陳正禮,范光麗.干擾素研究進(jìn)展[J].延安大學(xué)學(xué)報(bào),,19(3):76-79.[18]亓立峰,許梓榮.干擾素的分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J].中國(guó)獸藥雜志,,37(6):22-25.[19]陳濤.豬A型干擾素基因的克隆及其在大腸桿菌中的體現(xiàn)[D].南京:南京師范大學(xué),[20]謝海燕,郭霄峰.豬A-干擾素的原核體現(xiàn)[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),,25(4):86-88.[21]吳丹.豬α干擾素基因的克隆、體現(xiàn)及其抗豬瘟病毒活性的研究[D].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,.[22]葛麗,李震,于瑞嵩,等.豬α型干擾素基因在畢赤酵母中的分泌體現(xiàn)[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào),,25(3):89-292.[23]曹瑞兵,徐學(xué)清,周斌,等.豬A1干擾素的基因改造與高效原核體現(xiàn)[J].生物工程學(xué)報(bào),,20(2):291-294.[24]黃志清,胡宏宇,陳小玲,等.豬干擾素-C基因在畢赤酵母中的分泌體現(xiàn)[J].生物工程學(xué)報(bào),,21(5):731-736.[25]TabetaK,GeorgelP,JanssenE,etal.Tol-llikereceptors9and3asessentialcomponentsofi