棘托竹杖揮發(fā)油化學(xué)成分的研究

棘托竹杖揮發(fā)油化學(xué)成分的研究

子牙線分布在中國湖南和貴州，推廣到中國南方各省。棘托竹蓀是一種名貴的食用菌,香氣濃郁,脆嫩爽口,又具有降低血液中脂肪、膽固醇和延緩食品腐敗的功能。有關(guān)竹蓀生物活性成分的研究多見于長裙竹蓀(D.indusiataFisch.)子實(shí)體或菌絲體的多糖類的抗腫瘤研究(Ukaietal.,1983;杜昱光等,1998),長裙竹蓀、短裙竹蓀(D.duplicataFisch)多糖的分離、純化及化學(xué)結(jié)構(gòu)的研究(Haraetal.,1986;林玉滿,1997)和短裙竹蓀多糖清除O2-..及對人紅細(xì)胞膜自由基氧化的影響(楊海龍和李偉,2000)。車宗伶等對長裙竹蓀的弱極性和非極性有機(jī)物進(jìn)行了提取,分離和鑒定(車宗伶等,1996;車宗伶等,1998)。譚敬軍等(2000)研究了長裙竹蓀的乙酸乙酯、丙酮、乙醇浸提濃縮液對細(xì)菌、酵母菌、霉菌的抑制作用。而對棘托竹蓀的生物活性物質(zhì)的研究尚未見報(bào)道。本文對棘托竹蓀的揮發(fā)油的化學(xué)成分及其抑菌作用進(jìn)行了研究,旨在為進(jìn)一步開發(fā)利用棘托竹蓀打下基礎(chǔ)。1材料和方法1.1材料表面1.1.1托吡竹根1.1.2酵母菌和霉菌的篩選細(xì)菌:大腸桿菌(Escherichiacoli),金色葡萄球菌(Staphylococcusaureus);酵母菌:啤酒酵母(Saccharomycescerevisiae),白色假絲酵母(Candidaalbicans);霉菌:黑曲霉(Aspergillusniger),桔黃青霉(Penicilliumchrysogenum),黑根霉(Rhizopusnigricans)。以上受試菌由福建師范大學(xué)生物工程學(xué)院微生物教研室提供。1.1.3基本培訓(xùn)1.2方法1.2.1提取棕櫚油1.2.2比旋光度1.2.3氣相色譜條件的確定揮發(fā)油用美國安捷倫公司的HP6890氣相色譜儀和HP5972質(zhì)譜儀進(jìn)行分析,通過WINDOWNT系統(tǒng)磁盤中的計(jì)算機(jī)譜庫對各組分的質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行檢索,確定各成分,其含量用氣相色譜峰面積歸一化法求得。氣相色譜條件:用FFAP柱(30m×0.32mm×0.25μm),進(jìn)樣口溫度為250℃,檢測器溫度為280℃.柱溫采用程序升溫方式:70℃3min100℃6min150℃6min220℃15min,分流比30:1,柱流量2.0ml/min,柱頭壓5.5psi.進(jìn)樣量1.0μl。質(zhì)譜條件:用70eV的EI源,溶劑延遲時間為6min,分子量范圍為50~450amu。1.2.4菌種培養(yǎng)和抑菌培養(yǎng)(1)將受試菌斜面培養(yǎng)基活化一代進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。霉菌類和啤酒酵母采用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),霉菌孢子數(shù)達(dá)到105個/ml,啤酒酵母達(dá)106個/ml,細(xì)菌類和白色假絲酵母采用勾取一環(huán)于液體培養(yǎng)基中,分別在37℃和30℃條件下培養(yǎng)6小時和8小時,使菌數(shù)達(dá)到106個/ml(祖若夫等,1993)。(3)分別吸取菌懸液各0.1ml涂布于Φ9cm培養(yǎng)皿的固體培養(yǎng)基上,抑菌實(shí)驗(yàn)采用揮發(fā)性物質(zhì)熏蒸法(周邦靖,1987)。霉菌26℃培養(yǎng)72h,酵母菌30℃培養(yǎng)36h,細(xì)菌37℃培養(yǎng)24h后觀察并拍照。每個組合三個重復(fù)。2結(jié)果2.1提取的提取棘托竹蓀揮發(fā)油含量為0.45ml/100g。油的顏色為淡黃色,有特殊香氣,懸浮于水面,[α]20D=+0.44o~+4.2o。2.2膠質(zhì)揮發(fā)油化學(xué)成分的測定從棘托竹蓀揮發(fā)油中分離出36種組分,鑒定出29種,占揮發(fā)油總量的97.76%。揮發(fā)油氣相色譜圖見圖1,化學(xué)成份的鑒定結(jié)果見表1。從表1可以看出棘托竹蓀揮發(fā)油已鑒定出來的化學(xué)成分主要為有機(jī)酸、萜類、酮類、醛類物質(zhì),其百分含量分別為37.28%,30.08%,25.15%,10.98%。在有機(jī)酸中,主要為不飽和脂肪酸,占脂肪酸總量的77.52%;萜類中倍半萜類占97.54%;酮類中的13-甲基-環(huán)氧十四烷-2-酮占總揮發(fā)油的23.53%,在36種成分中居第一位。2.3不同菌種的抑菌效果揮發(fā)油對幾種菌類的抑制作用見表2。從表2可明顯的看出棘托竹蓀揮發(fā)油中含有抑菌成分,對三類受試菌的生長均有抑制作用,但是對不同的菌拮抗作用差異明顯,霉菌抑制效果的順序?yàn)?桔黃青霉﹥黑根霉﹥黑曲霉;酵母菌為:啤酒酵母﹥白色假絲酵母;金色葡萄球菌與大腸桿菌效果相近。稀釋25倍的揮發(fā)油可完全抑制桔黃青霉和啤酒酵母。3沙棘托竹蚤揮發(fā)油的抑菌試驗(yàn)從棘托竹蓀揮發(fā)油的化學(xué)成分分析鑒定得出的29種化合物是首次從棘托竹蓀子實(shí)體中分離鑒定出來的。與車宗伶等(1996、1998)所報(bào)道的長裙竹蓀乙酸乙酯提取物比較,相同的成分有α-芹子烯(α-Selinene)、棕櫚酸(Hexadecanoicacid)和油酸(Oleicacid,順反式)、亞油酸(9,12-Octadecadienoicacid)4種。其他的成分都是首次從竹蓀屬的子實(shí)體中發(fā)現(xiàn)的。從棘托竹蓀揮發(fā)油化學(xué)成分分析鑒定結(jié)果知道其主要成分為有機(jī)酸、倍半萜類、酮類、醛類,據(jù)文獻(xiàn)(林啟壽,1977;周邦靖,1987;張豁中和溫玉麟,1995)報(bào)道:有機(jī)酸、倍半萜類、酮類、醛類物質(zhì)都具有抑制微生物生長的作用。從棘托竹蓀揮發(fā)油的抑菌實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步得到證實(shí)。但具體是哪些成分具有更強(qiáng)的抑菌效果有待于深入研究。棘托竹蓀揮發(fā)油的抑菌試驗(yàn)結(jié)果與譚敬軍等(2000)用長裙竹蓀乙酸乙酯、丙酮、乙醇提取液的抑菌試驗(yàn)結(jié)果差異大,他們的結(jié)果是對細(xì)菌的抑制效果好,而對酵母菌和霉菌基本無抑制作用。其原因可能是:(1)竹蓀種的不同;(2)提取的方法不同;(3)抑菌試驗(yàn)的方法不同?？蛇M(jìn)一步進(jìn)行比較研究。棘托竹蓀揮發(fā)油還含有月桂烯、石竹烯等高級香精成分,可作為化裝品、香水、香皂的重要原料。我們在深層發(fā)酵棘托竹蓀菌絲體的發(fā)酵液中,可聞到較濃的花香味(另文發(fā)表),可通過發(fā)酵途徑獲得香味成分。棘托竹蓀揮發(fā)油的有機(jī)酸成分中主要為不飽和脂肪酸,其中亞油酸占揮發(fā)油總量的17.56%。在人體內(nèi)不飽和脂肪酸特別是亞油酸可促進(jìn)飽和脂肪酸及由其所衍生的脂類,膽甾醇等在血液中的運(yùn)行,以減少沉積在血管壁上的可能性,達(dá)到防止動脈硬化的目的(林啟壽,1977)。綜上所述,通過棘托竹蓀揮發(fā)油化學(xué)成分分析及抑菌試驗(yàn)的結(jié)果,我們認(rèn)為可將其子實(shí)體或揮發(fā)油開發(fā)成天然防腐劑,添加入食品中,即可防腐,又可防止動脈硬化,并具有香味,成為風(fēng)味獨(dú)特的保健食品。此外,揮發(fā)性香味成分可開發(fā)成高級香料。購于福建古田牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基;麥芽汁培養(yǎng)基;沙氏培養(yǎng)基;PDA培養(yǎng)基;查氏培