分子病理診斷的現(xiàn)狀與思考

分子病理診斷的現(xiàn)狀與思考摘要：基于總體視角，我國分子病理診斷發(fā)展進(jìn)程相比于國外大體上同步，我國國內(nèi)最早的分子病理針對為上個世紀(jì)八十年代的DNA原位雜交，之后隨著更多與腫瘤有關(guān)的基因被發(fā)現(xiàn)，也誕生了更多的檢測和抑制癌基因的分子病理技術(shù)。鑒于此，文章詳細(xì)闡述了分子病理診斷的現(xiàn)狀及思考，希望能夠?yàn)樾袠I(yè)發(fā)展提供幫助。關(guān)鍵詞：分子病理；診斷；現(xiàn)狀；思考前言：分子病理診斷，具體為經(jīng)過應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)，基于基因水平視角，判斷及檢測細(xì)胞與組織分子遺傳學(xué)的變化，它是一種病理診斷技術(shù)，在病理診斷、靶向治療、療效預(yù)測和預(yù)后預(yù)測等方面都有很大的幫助，其也為轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)范疇一類?；诒举|(zhì)而言，廣義上可把分子病理診斷定義成以組織與細(xì)胞分子水平為基礎(chǔ)的疾病診斷，狹義上講，它為一細(xì)胞或組織基因水平為基礎(chǔ)的一種病理診斷，其可叫做分子病理診斷。1我國分子病理診斷的發(fā)展現(xiàn)狀概述總體而言，現(xiàn)今，可以說我國分子病理診斷發(fā)展進(jìn)程和國外大體同步。我國最早的分子病理診斷就是上世紀(jì)80年代的DNA原位雜交，在社會不斷發(fā)展進(jìn)步下，發(fā)現(xiàn)了更多的與腫瘤有關(guān)的基因，則不斷誕生了更多的檢測和抑制癌基因的分子病理學(xué)技術(shù)。本世紀(jì)初，腫瘤靶向藥物的使用導(dǎo)致了靶向診斷的誕生，乳腺癌HER2基因擴(kuò)增的FISH檢測和肺癌中EGFR基因突變的ARMS檢測都是我們較為熟悉的新技術(shù)。最近一些年，已經(jīng)有更多的醫(yī)院在應(yīng)用分子病理診斷，所以，可以說，最近一些年，我國分子病理診斷處于蓬勃發(fā)展時(shí)期，然而，雖然我國分子病理診斷同國際趨勢大體相同，當(dāng)通過對比，我們在認(rèn)識度及普及方面還有規(guī)范化程度上的距離還很大。精準(zhǔn)醫(yī)療環(huán)境下基層醫(yī)院病理科分子病理學(xué)發(fā)展面臨著巨大的挑戰(zhàn)，病理學(xué)界應(yīng)當(dāng)充分重視這一現(xiàn)實(shí)。由于歷史、工作環(huán)境等諸多原因，我國病理從業(yè)人員數(shù)量少，分布嚴(yán)重不均。主要存在的問題如下：①醫(yī)院病理科條件差，病例數(shù)量少，不具備開展分子病理檢測的條件。②病理科醫(yī)師和技術(shù)人員對分子病理學(xué)認(rèn)識不足，對其檢測的臨床意義、檢測方法及標(biāo)本規(guī)范化處理等方面缺乏必要的知識。③由于以上原因難以滿足規(guī)范化分子檢測的要求，從而嚴(yán)重影響分子病理檢測的結(jié)果，這已成為分子病理學(xué)發(fā)展的瓶頸問題。應(yīng)該看到，不管是從衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)學(xué)角度，還是從我國病理學(xué)現(xiàn)狀看，讓每一個基層醫(yī)院病理科均開展分子病理學(xué)檢測工作既不現(xiàn)實(shí)也無必要。應(yīng)當(dāng)努力尋求一種適合我國現(xiàn)狀的分子病理學(xué)科學(xué)發(fā)展模式，從病理界自身層面努力提高從業(yè)人員的分子病理學(xué)知識水平，加強(qiáng)分子病理學(xué)檢測能力建設(shè)。精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)已成為當(dāng)代醫(yī)學(xué)發(fā)展的一個熱點(diǎn)方向，因此應(yīng)當(dāng)在充分調(diào)研的基礎(chǔ)上，權(quán)衡利弊并提出不同層次醫(yī)院分子病理檢測要求和標(biāo)準(zhǔn)，努力爭取衛(wèi)生行政部門的政策支持和認(rèn)可。在加強(qiáng)三級醫(yī)院分子病理學(xué)建設(shè)的基礎(chǔ)上，強(qiáng)化對口支援工作，從而進(jìn)一步推進(jìn)我國分子病理學(xué)均衡發(fā)展，以滿足精準(zhǔn)醫(yī)療環(huán)境下臨床對分子病理學(xué)檢測的需求。2我國分子病理診斷技術(shù)2.1顯色原位雜交（chromogenicinsituhybri-dization,CISH）顯色原位雜交的基礎(chǔ)原理是核酸分子單鏈間的堿基互補(bǔ)，將標(biāo)記有地高辛或生物素的探針與待測的DNA或RNA互補(bǔ)配對后，從而將該位置標(biāo)記出來。又將待測基因的不同分為：DNA原位雜交（主要應(yīng)用于基因定位、特定基因檢測等）和RNA原位雜交（主要應(yīng)用于基于表達(dá)檢測）。顯色原位雜交的優(yōu)點(diǎn)是操作簡單、信號穩(wěn)定、存儲方便。是當(dāng)前應(yīng)用最廣泛的分子病理診斷技術(shù)之一。2.2熒光原位雜交（fluorescenceinsituhybridi-zation,FISH）其原理與顯色原位雜交相同，區(qū)別在于FISH中應(yīng)用了熒光標(biāo)記，可以用熒光顯微鏡觀測到信號的表達(dá)。隨著對熒光原位雜交研究的不斷深入與拓展，科研人員又研發(fā)出多彩熒光原位雜交，主要是對疾病在染色體水平（檢測染色體的易位、缺失、變異等）和DNA水平上的檢測（檢測基因的突變、易位、缺失等）。FISH在檢測中比CISH更安全、快捷、特異性好、定位準(zhǔn)確。2.3聚合酶鏈反映（PCR）PCR的原理是在TaqDNA聚合酶的催化作用下，通過特異的引物，對特定的一段區(qū)域采取高溫變性、低溫退火、適溫延伸三個過程擴(kuò)增，再用凝膠電泳或測序的方法分析產(chǎn)物。該技術(shù)檢測的是組織、細(xì)胞中病毒的DNA。2.4基因芯片（DNA芯片或DNA微陣列）基因芯片的原理是將樣品分子DNA/RNA擴(kuò)增、轉(zhuǎn)錄等技術(shù)后與DNA芯片的已知序列進(jìn)行雜交，在計(jì)算機(jī)的綜合分析下，獲得樣品中基因表達(dá)的信息。基因芯片是將已知的DNA/cDNA片段大量集成在固體載體上而得名?；蛐酒捎玫氖且阎结?，可以在一次實(shí)驗(yàn)中自動、快速完成數(shù)千條序列的檢測。3我國分子病理的臨床應(yīng)用隨著分子病理的快速發(fā)展，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了許多腫瘤基因和一些疾病基因，它已應(yīng)用于臨床疾病的診斷，尤其在遺傳病、傳染病和腫瘤的診斷和藥敏試驗(yàn)中發(fā)揮了顯著的優(yōu)勢。3.1遺傳性疾病診斷、分型通過檢測病患的基因和染色體，能夠更好的預(yù)測家族遺傳性疾病的發(fā)生，如今，臨床上常用方法是染色體核型分型、熒光原味雜交等，產(chǎn)前篩查中得以廣泛應(yīng)用。3.2感染性疾病病原體的檢測HPV的檢測通過原位雜交及PCR-斑點(diǎn)雜交實(shí)現(xiàn)；使用原位雜交檢測EB病毒；使用PCR對HSV及SARS病毒實(shí)施檢測等，這部分檢測已在臨床中得以廣泛應(yīng)用，且在診斷感染性疾病方面發(fā)揮著十分重要的作用。3.3腫瘤的病理診斷與臨床應(yīng)用在分子病理診斷的臨床應(yīng)用中，腫瘤診斷和藥敏檢測應(yīng)用最為廣泛，技術(shù)相對成熟，對腫瘤的早期篩查和早期診斷有著十分巨大的作用，在腫瘤診斷和個體化治療中發(fā)揮著相應(yīng)的輔助作用。腫瘤輔助診斷中，軟組織及骨腫瘤的診斷以及淋巴造血系統(tǒng)腫瘤的分子分型應(yīng)用了分子病理診斷計(jì)劃，使用熒光原味雜交法檢測有腫瘤特征的染色體及融合基因，最終能夠在保持基因水平的前提下，更好的對疾病的發(fā)生與發(fā)展進(jìn)行了解。4對分子病理診斷所存的思考1）行業(yè)協(xié)會需要進(jìn)一步努力將本職工作認(rèn)真做好，并做好相應(yīng)的宣傳及推動工作，盡可能組織分子病理診斷宣傳活動，宣傳分子病理診斷對臨床診療的意義，進(jìn)而有效提升人們對分子病理診斷的認(rèn)識度、關(guān)注度及重視度。不可只把分子病理診斷完全依附于大城市醫(yī)院和經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)的醫(yī)院，在具備開展分子病理檢查軟硬件條件和標(biāo)本來源的醫(yī)療機(jī)構(gòu)，也要進(jìn)一步強(qiáng)化開展力度，積極開展實(shí)施。2）分子病理檢查需要病理科進(jìn)行承擔(dān)，而非僅局限在經(jīng)濟(jì)方面的利益，并且需要更多的開展分子病理檢查項(xiàng)目，并派病理醫(yī)師主要負(fù)責(zé)，最終獲得正確的細(xì)胞或組織，讓檢驗(yàn)結(jié)果更具根據(jù)性，出現(xiàn)的爭議更具責(zé)任性。同時(shí)將生物技術(shù)公司的技術(shù)、資金、設(shè)備等優(yōu)勢發(fā)揮出來，與權(quán)威可靠的醫(yī)療機(jī)構(gòu)病理科合作，組建子病理實(shí)驗(yàn)室，進(jìn)一步推動分子病理診斷的有效開展。3）應(yīng)該在規(guī)范且干凈的環(huán)境下開展分子病理檢查，所以，需要設(shè)置各準(zhǔn)備區(qū)、處理區(qū)、制備區(qū)還有擴(kuò)增區(qū)及擴(kuò)增產(chǎn)物的分析區(qū)。并應(yīng)用切實(shí)可行的管理方式，進(jìn)一步將分子病理檢查準(zhǔn)入制度加以完善，嚴(yán)格規(guī)范技術(shù)與市場準(zhǔn)入條件，嚴(yán)格審查醫(yī)療單位開展病理診斷的條件和制度，大力支持和鼓勵合格單位，對不合格單位進(jìn)行懲治，并且對設(shè)備技術(shù)及診斷人員提高標(biāo)準(zhǔn)與要求，從而進(jìn)一步完善系統(tǒng)建設(shè)。結(jié)束語：總的來說，中國的分子病理診斷水平已經(jīng)可以與國外和國際的分子病理診斷水平相媲美，這是毫無疑問的，但從局部的角度來看，依然有很多的局限性及弊端存在，在面對這部分局限及弊端時(shí)，它也給自己帶來了一些思考，唯有構(gòu)建完善的分子