不同菌種和不同水平乳酸菌對(duì)肉仔雞生長性能、免疫機(jī)能和腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

不同菌種和不同水平乳酸菌對(duì)肉仔雞生長性能、免疫機(jī)能和腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

近年來，越來越多的人對(duì)飼料添加劑在畜牧業(yè)中的作用有了認(rèn)可。作為一種較廣泛、最具代表性的微生態(tài)制劑，蘑菇在提高動(dòng)物飼料利用率、增強(qiáng)免疫功能和改善腸道環(huán)境方面發(fā)揮著重要作用。由于剛出殼的雛雞消化道內(nèi)通常是無菌的,出殼后通過與環(huán)境的接觸開始建立起一個(gè)簡(jiǎn)單的微生物區(qū)系,由此向成熟區(qū)系的轉(zhuǎn)變需要幾周的時(shí)間,此時(shí)正常菌群未完全定植于上皮細(xì)胞上,很容易受到外界病原菌的侵害,動(dòng)物體隨時(shí)可能被感染發(fā)病,而且隨著飼養(yǎng)密度的增加,畜禽發(fā)病率頻繁,因此很多生產(chǎn)者采取在飼糧中添加抗生素的措施來預(yù)防疾病的發(fā)生,但抗生素的長期使用引起了嚴(yán)重的耐藥性和殘留問題,而益生菌就是在這種前提下開發(fā)出來的一類抗生素替代品,它不僅可以調(diào)整腸道微生態(tài)平衡、避免抗生素產(chǎn)生的問題,而且早期添加有利于微生態(tài)系統(tǒng)的及早建立,是提高畜禽抵御功能、增強(qiáng)自身免疫力和抗病能力的重要途徑。研究表明,來源于宿主本身的菌種制劑會(huì)較外源宿主菌種制劑對(duì)機(jī)體健康更有益。本試驗(yàn)旨在通過在飼糧中添加不同菌種、不同水平的同源乳酸菌制劑,研究其對(duì)肉仔雞生長性能、免疫功能和腸道結(jié)構(gòu)的影響,并確定該菌種的適宜添加量,揭示同源乳酸菌與家禽腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)及機(jī)體免疫力之間的關(guān)系,為乳酸菌制劑在肉仔雞生產(chǎn)中的推廣應(yīng)用提供理論依據(jù)。1材料和方法1.1同源乳酸菌制劑的制備乳酸菌制劑試驗(yàn)菌株為東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院動(dòng)物代謝調(diào)控研究室提供的分離篩選自雛雞盲腸內(nèi)容物中的草乳桿菌和格氏乳桿菌,通過對(duì)其進(jìn)行液體發(fā)酵、固體承載制備同源乳酸菌制劑,經(jīng)實(shí)測(cè),優(yōu)化后的草乳桿菌制劑和格氏乳桿菌制劑有效活菌數(shù)分別為5.5×108和5.8×108CFU/g,0.2%、1.0%添加水平在全價(jià)料中的有效乳酸菌數(shù)量分別為1×106、5×106CFU/g。1.2femn試驗(yàn)動(dòng)物選取1日齡健康愛拔益加(AA)肉公雛288只,基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。1)每千克微量元素預(yù)混料含Providedperkgofmicroelementpremix:Cu4000mg,I175mg,Fe50000mg,Mn50000mg,Se200mg,Zn37500mg。2)每千克維生素預(yù)混料含Providedperkgofvitaminpremix:VA48000000IU,VD312000000IU,VE100mg,VK15mg,VB110000mg,VB234000mg,VB615000mg,VB1280mg,生物素biotin500mg,葉酸folicacid4500mg,煙酸nicotinicacid150000mg,泛酸pantothenicacid50000mg,乙氧喹啉ethoxyquin200mg。1.3基礎(chǔ)飼糧和制劑的制備選取1日齡健康A(chǔ)A肉公雛288只,平均體重為(36.89±0.49)g,按單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì),隨機(jī)分成6組,每組4個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)12只。Ⅰ組為對(duì)照組,飼喂基礎(chǔ)飼糧;Ⅱ組為抗生素組,飼喂基礎(chǔ)飼糧+0.01%黃霉素;Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組為乳酸菌制劑組,分別飼喂基礎(chǔ)飼糧+0.2%草乳桿菌制劑、基礎(chǔ)飼糧+1.0%草乳桿菌制劑、基礎(chǔ)飼糧+0.2%格氏乳桿菌制劑、基礎(chǔ)飼糧+1.0%格氏乳桿菌制劑,試驗(yàn)期為28d,按常規(guī)飼養(yǎng)程序?qū)θ庾须u進(jìn)行飼養(yǎng)管理,試驗(yàn)雞分層飼養(yǎng),自由采食,自由飲水。雞舍內(nèi)電熱管供熱,保證舍內(nèi)適宜的溫度和濕度。7日齡時(shí)對(duì)試驗(yàn)雞進(jìn)行新城疫滴鼻點(diǎn)眼免疫首免,14日齡時(shí)對(duì)試驗(yàn)雞進(jìn)行法氏囊滴鼻點(diǎn)眼免疫。1.4指標(biāo)和方法的測(cè)量1.4.1平均日儲(chǔ)糧量和剩料量分別于試驗(yàn)開始第1、15、29天早晨空腹稱重,以每個(gè)重復(fù)為單位,計(jì)算各組平均日增重(ADG),并準(zhǔn)確記錄采食量和剩料量,計(jì)算各組平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)。1.4.2間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)分別于試驗(yàn)開始的第15、29天,從每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選取1只接近平均體重的健康肉仔雞頸靜脈采血2mL,37℃水浴1h后,離心機(jī)3000r/min離心15min,制備血清,采用進(jìn)口(CellTrend公司)分裝雞IgA/IgG間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒測(cè)定其含量,測(cè)定儀器為酶標(biāo)儀。1.4.3試驗(yàn)1,肉仔雞分別在試驗(yàn)開始的第15、29天早晨,從每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選取1只接近平均體重的健康肉仔雞。試驗(yàn)前1天晚上停止采食,自由飲水。次日清晨,雞頸靜脈采血2mL,迅速裝入含有肝素鈉的抗凝管中并帶回實(shí)驗(yàn)室,采用噻唑藍(lán)(MTT)法測(cè)定,酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀檢測(cè)590nm下的吸光度值。1.4.4腸道固定的方法分別于試驗(yàn)開始的第15、29天早晨,從每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選取1只接近平均體重的健康肉仔雞進(jìn)行屠宰,結(jié)扎各段腸道,取部分十二指腸置于4%的甲醛中固定。常規(guī)石蠟包埋,切片,蘇木精-伊紅(HE)染色,光鏡下觀察各組腸道黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu),并用Motic照相處理軟件測(cè)量腸壁厚度、絨毛高度和隱窩深度。1.5數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析所有數(shù)據(jù)采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析,用LSD進(jìn)行多重比較,結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。2結(jié)果2.1乳酸菌制劑和抗生素對(duì)肉仔雞生長性能的影響由表2可知,1~14d和15~28d,1.0%草乳桿菌組和1.0%格氏乳桿菌組肉仔雞平均日增重顯著高于對(duì)照組(P<0.05),0.2%草乳桿菌組和0.2%格氏乳桿菌組肉仔雞平均日增重稍高于對(duì)照組,但差異不顯著(P>0.05),相同乳酸菌的不同添加水平組間平均日增重差異不顯著(P>0.05);除15~28d抗生素組肉仔雞平均日增重顯著高于對(duì)照組(P<0.05)外,1~14d及15~28d抗生素組肉仔雞平均日增重與其他各組間無顯著差異(P>0.05)。試驗(yàn)全期(1~28d),不同添加水平的乳酸菌制劑組肉仔雞平均日增重均顯著高于對(duì)照組(P<0.05),1.0%添加組顯著高于同一菌種的0.2%添加組(P<0.05),但同一添加水平的不同菌種間差異不顯著(P>0.05);抗生素組肉仔雞平均日增重顯著高于對(duì)照組和0.2%格氏乳桿菌組(P<0.05),與其他各組間差異不顯著(P>0.05)。1~14d,各組間料重比無顯著差異(P>0.05),15~28d,1.0%草乳桿菌組和1.0%格氏乳桿菌組肉仔雞料重比均顯著低于對(duì)照組(P<0.05),但2組之間差異不顯著(P>0.05),與抗生素組和0.2%添加組也無顯著差異(P>0.05);0.2%添加組、抗生素組與對(duì)照組之間料重比差異均不顯著(P>0.05)。試驗(yàn)全期,添加乳酸菌各組肉仔雞料重比均顯著低于對(duì)照組(P<0.05),1.0%添加組顯著低于同一菌種的0.2%添加組(P<0.05),同一添加水平的不同菌種各組間差異均不顯著(P>0.05);抗生素組肉仔雞料重比顯著低于對(duì)照組(P<0.05),但與其他各組之間差異不顯著(P>0.05)?？傮w而言,乳酸菌制劑和抗生素均能改善肉仔雞的生長性能,其改善效果1.0%添加水平優(yōu)于同一菌種的0.2%添加水平和抗生素,同一添加水平草乳桿菌制劑優(yōu)于格氏乳桿菌制劑。同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同字母表示差異顯著(P<0.05)。表5同。Inthesamerow,valueswithdifferentlettersuperscriptsmeansignificantdifference(P<0.05).ThesameasTable5.2.2乳酸菌制劑對(duì)肉仔雞血清中igg、iga含量的影響從表3看出,第2周時(shí),與對(duì)照組相比,1.0%草乳桿菌組和1.0%格氏乳桿菌組肉仔雞血清中IgG含量顯著提高(P<0.05),2組間差異不顯著(P>0.05);1.0%草乳桿菌組肉仔雞血清中IgG含量顯著高于0.2%草乳桿菌組(P<0.05),0.2%草乳桿菌組和0.2%格氏乳桿菌組肉仔雞血清中IgG含量與對(duì)照組及抗生素組相比均無顯著差異(P>0.05),但抗生素組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。1.0%草乳桿菌組肉仔雞血清中IgA含量顯著高于對(duì)照組、抗生素組、0.2%草乳桿菌和0.2%格氏乳桿菌組(P<0.05),1.0%格氏乳桿菌顯著高于對(duì)照組、抗生素組和0.2%格氏乳桿菌組(P<0.05),除2個(gè)高劑量乳酸菌組外,其余各組間均無顯著差異(P>0.05)。第4周時(shí),與對(duì)照組相比,1.0%草乳桿菌組和1.0%格氏乳桿菌組肉仔雞血清中IgG的含量顯著提高(P<0.05);除對(duì)照組外,其余各組間均無顯著差異(P>0.05)。肉仔雞血清中IgA含量各組間均無顯著差異(P>0.05)。綜上可知,飼糧中添加適量乳酸菌制劑能提高肉仔雞血清中IgG和IgA的含量,增強(qiáng)機(jī)體體液免疫功能。同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同字母表示差異顯著(P<0.05)。表4同。Inthesamecolumn,valueswithdifferentlettersuperscriptsmeansignificantdifference(P<0.05).ThesameasTable4.2.3各組間比較由表4可見,第2周時(shí),1.0%草乳桿菌組、1.0%格氏乳桿菌組和抗生素組肉仔雞外周血T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)顯著高于對(duì)照組(P<0.05);除對(duì)照組外,其余各組間無顯著差異(P>0.05)。第4周時(shí),與對(duì)照組相比,1.0%草乳桿菌組和1.0%格氏乳桿菌組肉仔雞外周血T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)顯著提高(P<0.05),與其余各組相比無顯著差異(P>0.05)。綜上可知,飼糧中添加適量乳酸菌能促進(jìn)肉仔雞外周血T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng),從而增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫功能。2.4各組肉仔雞小鼠小鼠隱窩深度和小鼠腸壁厚度的單因素方差分析由表5可見,第2周時(shí),1.0%草乳桿菌組肉仔雞小腸絨毛高度顯著高于對(duì)照組(P<0.05),其余各組較對(duì)照組均有不同程度的提高,但無顯著差異(P>0.05)。第4周時(shí),0.2%、1.0%草乳桿菌組和1.0%格氏乳桿菌組肉仔雞小腸絨毛高度均顯著高于對(duì)照組(P<0.05),除對(duì)照組外,其余各組間無顯著差異(P>0.05)。與對(duì)照組相比,第2周時(shí),1.0%草乳桿菌組和1.0%格氏乳桿菌組肉仔雞小腸隱窩深度顯著變淺(P<0.05),0.2%添加組均低于對(duì)照組,但無顯著差異(P>0.05),除對(duì)照組外,其余各組間無顯著差異(P>0.05)。第4周時(shí),僅0.2%、1.0%草乳桿菌組肉仔雞小腸隱窩深度與1.0%格氏乳桿菌組差異顯著(P<0.05),其余各組間無顯著差異(P>0.05)。在絨毛高度/隱窩深度方面,第2周時(shí),1.0%草乳桿菌組和1.0%格氏乳桿菌組均顯著高于對(duì)照組和抗生素組(P<0.05);第4周時(shí),0.2%、1.0%草乳桿菌組和1.0%格氏乳桿菌組均顯著高于對(duì)照組(P<0.05),且0.2%、1.0%草乳桿菌組均顯著高于0.2%格氏乳桿菌組及抗生素組(P<0.05)。在小腸腸壁厚度方面,第2周時(shí),1.0%草乳桿菌組顯著高于對(duì)照組(P<0.05),其余各組間無顯著差異(P>0.05);第4周時(shí),各乳酸菌組均不同程度高于對(duì)照組,但無顯著差異(P>0.05)。綜上可知,飼糧中添加適量乳酸菌制劑能促進(jìn)肉仔雞小腸的生長發(fā)育,使小腸絨毛增長,隱窩變淺,增加了小腸的吸收面積,從而促進(jìn)了機(jī)體對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收。3討論3.1益生菌能夠調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡,改善肉仔雞一般情況畜禽的平均日增重和料重比是反映益生菌制劑有效性和經(jīng)濟(jì)性的重要指標(biāo)。益生菌的促生長作用已經(jīng)被很多試驗(yàn)(Gunal等、Kalavathy等)證實(shí)。本試驗(yàn)結(jié)果表明,乳酸菌和抗生素均能改善動(dòng)物的生長性能,而且1.0%添加水平的改善效果優(yōu)于同一菌種的0.2%添加水平,原因可能是足夠多的乳酸菌能夠占據(jù)更多的黏附位點(diǎn),通過調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡發(fā)揮促生長作用;或是乳酸菌能產(chǎn)生特殊酶系,能分解食物中的糖類、蛋白質(zhì)和脂肪,通過提高食物消化率來促進(jìn)肉仔雞生長;也可能與乳酸菌產(chǎn)酸和合成維生素等營養(yǎng)物質(zhì)促進(jìn)腸黏膜組織的發(fā)育有關(guān),因此益生菌的多重調(diào)節(jié)作用可使機(jī)體能最大限度地吸收營養(yǎng)物質(zhì),從而極大地改善生長性能。但也有研究表明,在飼糧中添加益生菌對(duì)肉仔雞生產(chǎn)性能無明顯影響。產(chǎn)生這種結(jié)果的原因是多方面的,這可能與所用菌種、菌制劑添加劑量、添加方式、飼養(yǎng)條件等不同有關(guān)。不同菌種的生物活性、作用方式不同,即使是同一菌種的不同菌株之間也具有不同的生物活性,比如不同的黏附位點(diǎn)及發(fā)酵機(jī)制,而且益生菌通常是在動(dòng)物敏感期具有較好的作用效果,所以在不同的試驗(yàn)地點(diǎn)、不同的時(shí)間(季節(jié))、不同的環(huán)境條件下,動(dòng)物的生理狀態(tài)都會(huì)不同,因此可能會(huì)產(chǎn)生不盡一致的結(jié)果。3.2乳酸菌和益生菌對(duì)肉仔雞血清中igg和iga含量的影響抗體是B細(xì)胞在抗原分子刺激后經(jīng)過分化增殖產(chǎn)生的一類免疫球蛋白,其含量的高低直接反映機(jī)體免疫力的強(qiáng)弱。Huang等研究發(fā)現(xiàn),添加滅活的嗜酸性乳酸桿菌可顯著提高肉仔雞30日齡時(shí)血清中的IgA和IgG含量。陳馨研究發(fā)現(xiàn),在肉仔雞飼糧中添加乳酸菌(格氏乳桿菌)能顯著提高血清中IgG和IgA含量,且乳酸菌組肉仔雞血清中IgG和IgA含量不同程度高于抗生素組和商品對(duì)照組。王晶在飲水中添加同源乳酸菌液飼喂肉仔雞后發(fā)現(xiàn),試驗(yàn)組肉仔雞血清中IgG和IgA含量均顯著高于對(duì)照組。袁玲亦有此類似報(bào)道。Haghighi等報(bào)道,飼喂益生菌能夠提高血清和腸道內(nèi)的抗體水平。然而,Midilli等報(bào)道,益生菌沒有對(duì)機(jī)體內(nèi)的IgG含量產(chǎn)生影響,這可能與所用菌種、飼養(yǎng)條件及添加水平不同有關(guān)。本試驗(yàn)結(jié)果表明,飼糧中添加適量乳酸菌制劑能提高肉仔雞血清IgG和IgA含量,使機(jī)體的體液免疫功能增強(qiáng),草乳桿菌的作用效果優(yōu)于同一添加水平的格氏乳桿菌。3.3益生素對(duì)外周血血液中t細(xì)胞數(shù)量的影響淋巴細(xì)胞是動(dòng)物機(jī)體內(nèi)重要的免疫活性細(xì)胞,其中T淋巴細(xì)胞是細(xì)胞免疫的主導(dǎo)細(xì)胞,因此外周血液中T細(xì)胞的數(shù)量是評(píng)價(jià)機(jī)體細(xì)胞免疫機(jī)能狀態(tài)的重要指標(biāo)。呂英研究發(fā)現(xiàn),雛雞應(yīng)用益生素后1、4、7、10、18d時(shí),其外周血T細(xì)胞數(shù)量均不同程度地高于對(duì)照組雛雞,于4~10d差異顯著,表明益生素可提高外周血液中T淋巴細(xì)胞的數(shù)量,激發(fā)機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答,提高全身細(xì)胞免疫應(yīng)答水平。李琰研究發(fā)現(xiàn),給1日齡雛雞應(yīng)用益生菌后,其免疫器官(胸腺、脾臟和法氏囊)T淋巴細(xì)胞數(shù)量均較對(duì)照組雛雞有不同程度的增多,于7~14d差異顯著,胸腺和脾臟T淋巴細(xì)胞增殖功能明顯高于對(duì)照組雛雞,于4~7d差異顯著。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,益生菌能促進(jìn)肉仔雞外周血T細(xì)胞的增殖反應(yīng),且本試驗(yàn)中草乳桿菌對(duì)肉仔雞外周血T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的提高優(yōu)于同一添加水平的格氏乳桿菌,不同的菌種生物學(xué)特性不同,故進(jìn)入機(jī)體后的存活時(shí)間和定植劑量也不相同,與腸上皮細(xì)胞的黏附受體也可能不同,因此會(huì)產(chǎn)生不同的結(jié)果。3.4增施乳酸菌制劑對(duì)肉仔雞腸道組織形態(tài)的影響飼料中的營養(yǎng)物質(zhì)經(jīng)過物理性消化和化學(xué)性消化后的