貝克曼全自動生化分析儀電解質(zhì)配套試劑盒的研制

貝克曼全自動生化分析儀電解質(zhì)配套試劑盒的研制

美國貝克曼-庫爾特的生物化學(xué)分析儀是一種非全日制自動分析儀。它具有高精度、精密度和穩(wěn)定性。已在中國各級醫(yī)院使用。該分析儀電解質(zhì)(NA+、K+、CL-)采用間接離子選擇電極測定原理,目前進(jìn)口配套試劑成本較高,影響了實(shí)驗(yàn)室的應(yīng)用?，F(xiàn)國內(nèi)已有對CX系列分析儀生化項(xiàng)目配套試劑的研制報(bào)道,但尚無對電解質(zhì)測定配套試劑研制成功的報(bào)道,為此,本研究對CX系列電解質(zhì)測定的配套試劑(包括緩沖液、參比液、清洗液等)進(jìn)行了研制,也已取得成功,現(xiàn)將該試劑盒的研制和驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行介紹。1材料和方法1.1加入適量穩(wěn)定劑或防腐體系貝克曼-庫爾特△CX3、CX5全自動生化分析儀;精密分析天平;原裝貝克曼CX系列電解質(zhì)測定配套試劑;自配試劑:①緩沖液:精確稱取各分析物溶于去離子水,加入適量穩(wěn)定劑或防腐劑。物質(zhì)濃度:三羥甲基氨基甲烷(Tris)0.5mol/L,順丁烯二酸25g/L,異丙醇5ml/L,曲拉通1ml/L。②參比液:精確稱取各分析物溶于去離子水,加入適量穩(wěn)定劑或防腐劑。物質(zhì)濃度:CH3COOCa2mmol/L,NaCl96mmol/L,NaNO334mmol/L,NaHCO310mmol/L,KCl4mmol/L。③清洗液:異丙醇25%(V/V),苯氧乙醇12%(V/V),曲拉通20ml/l。1.2英國朗道公司生化質(zhì)控血清(批號:296UN);門診和住院患者血清標(biāo)本100份混合分裝,另選線性范圍內(nèi)濃度分布均勻的臨床血清標(biāo)本40份,-20℃保存。1.3方法1.3.1標(biāo)準(zhǔn)溶液及試劑穩(wěn)定性試驗(yàn)①定標(biāo)曲線:自配試劑采用貝克曼原裝定標(biāo)液定標(biāo),定標(biāo)曲線ADC值(類比數(shù)字信號)應(yīng)符合儀器設(shè)定范圍;②準(zhǔn)確度試驗(yàn):試劑盒在適用機(jī)型上測定定值質(zhì)控品(英國朗道公司)20次,計(jì)算平均偏差;③精密度試驗(yàn):采用混合血清標(biāo)本批內(nèi)測定20次;批間20d,每次采用一個(gè)分裝血清標(biāo)本,重復(fù)測定2次,計(jì)算批內(nèi)和批間精密度;④線性范圍測定:配置一定濃度的電解質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液,稀釋成一系列濃度梯度進(jìn)行測定,要求Na+:100～200mmol/L;K+:1～15mmol/L;Cl-:50～200mmol/L;⑤穩(wěn)定性試驗(yàn):配套試劑不穩(wěn)定主要見于參比液pH值和離子成分變化,因此將試劑室溫下存放一年,每兩個(gè)月測定pH值和主要離子成分Na+、K+、Cl-、Ca2+。⑥相關(guān)比較試驗(yàn):用自配試劑與貝克曼原裝試劑同時(shí)測定40份臨床血清標(biāo)本,計(jì)算回歸方程和相關(guān)系數(shù)。1.3.2統(tǒng)計(jì)方法正態(tài)分布計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(xˉ±s)(xˉ±s)表示,組間比較采用配對t檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1混合血清批檢測結(jié)果按實(shí)驗(yàn)設(shè)定,自配試劑采用貝克曼原裝定標(biāo)液的三條定標(biāo)曲線ADC值完全達(dá)到儀器要求,滿足儀器的要求設(shè)定。自配試劑盒測定朗道質(zhì)控血清20次,Na+、K+、Cl-測定結(jié)果分別為144.06±0.962mmol/L、4.02±0.021mmol/L、101.09±1.027mmol/L,平均相對偏差分別為0.83%、1.03%、1.34%,能滿足臨床實(shí)驗(yàn)室需要。自配試劑盒測定混合血清批內(nèi)20次、批間20d變異系數(shù)均小于2%,精密度較好,滿足臨床實(shí)驗(yàn)室要求。結(jié)果見表1。采用自配試劑對一系列濃度梯度的稀釋標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行測定,結(jié)果表明Na+在80～200mmol/L、K+在1～15mmol/L、Cl-在50～200mmol/L有較好的線性關(guān)系,與原裝試劑基本一致。將自配試劑室溫放置一年,每兩個(gè)月分別測定參比液pH值和主要離子成分,結(jié)果表明在室溫條件下參比液基本無變化,穩(wěn)定性較好。用自配試劑與貝克曼原裝試劑同時(shí)測定40份臨床血清標(biāo)本,結(jié)果表明自配試劑與貝克曼原裝試劑高度相關(guān),Na+、K+、Cl-相關(guān)系數(shù)r均大于0.99;配對t檢驗(yàn)顯示兩種試劑檢測結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),滿足臨床實(shí)驗(yàn)室要求。結(jié)果見表2。3實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析公司推薦的新型全自動生化分析儀,具有選擇性單美國貝克曼(BECKMAN-COULTER)推出的CX系列產(chǎn)品(包括CX3、△CX3、CX4、CX5、CX7、CX9),屬于多項(xiàng)目任選式全自動分析儀,由于其檢測速度快、標(biāo)本用量少、性能穩(wěn)定,被多家醫(yī)院所運(yùn)用。該系列電解質(zhì)的測定,采用離子選擇電極法,由于其準(zhǔn)確度和精密度極高,電極壽命很長,儀器故障率較低,在電解質(zhì)測定方面享有很高的知名度,在中國目前已銷售近千臺,屬于比較主流的全自動生化分析儀。但進(jìn)口試劑較昂貴,同時(shí)也存在供貨不太及時(shí)的缺陷(貝克曼在中國目前還沒有試劑生產(chǎn)基地),對實(shí)驗(yàn)室的廣泛應(yīng)用產(chǎn)生了一定影響。國內(nèi)已有總蛋白、肌酐、尿素、肝功酶類、血脂貝克曼生化試劑研制成功的報(bào)道,但其配套電解質(zhì)測定試劑盒尚沒有報(bào)道。為此,本研究開展了對CX系列分析儀電解質(zhì)測定配套試劑的研制。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看,準(zhǔn)確度、精密度、線性范圍、試劑的穩(wěn)定性均達(dá)到實(shí)驗(yàn)預(yù)期目標(biāo),與進(jìn)口試劑的相關(guān)性較好(r>0.99)。兩種試劑檢測結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),與原裝試劑基本一致。與原裝試劑相比,我們研制的緩沖液在可以提供適當(dāng)離子強(qiáng)度的前提下,Tris僅為0.5mol/L(原裝試劑需要1.5mol/L),主要原材料成本可以減少2/3用量。另外,本研究選擇順丁烯二酸作為緩沖液pH調(diào)節(jié)原料,沒有采用原裝試劑選用的H3PO4,因?yàn)樵趯?shí)際應(yīng)用中我們發(fā)現(xiàn),Cl-定標(biāo)過程中,尤其是Cl-電極使用很長時(shí)間,經(jīng)過多次打磨后,含有H3PO4的原裝試劑在定標(biāo)過程中有超范圍報(bào)警,導(dǎo)致定標(biāo)失敗。而我們研制的緩沖液選用順丁烯二酸避免了此種情況的發(fā)生,且自配試劑在Na+、K+、Cl-定標(biāo)過程中與原裝試劑基本一致。在參比液試劑方面,我們在研制過程中將其pH值選擇為9左右,比原裝試劑略小,因?yàn)閲鴥?nèi)很多貝克曼CX系列生化儀用戶發(fā)現(xiàn),原裝參比液試劑存在開蓋后不穩(wěn)定的情況,特別是Ca2+,原裝參比液開蓋一周后,由于存在與空氣接觸,其參比液中Ca2+大大降低,導(dǎo)致定標(biāo)時(shí)出現(xiàn)標(biāo)1超范圍報(bào)警,定標(biāo)失敗。本研究研制的參比液已經(jīng)克服了這一缺陷,可以穩(wěn)定保存一年,同時(shí)在實(shí)際使用過程中也沒