腹腔鏡子宮內(nèi)人工授精技術(shù)在羊臨床中的應(yīng)用

腹腔鏡子宮內(nèi)人工授精技術(shù)在羊臨床中的應(yīng)用

與腹部手術(shù)相比，腹部手術(shù)具有手術(shù)視野廣、出血少、手術(shù)切口小、對(duì)身體的影響小、疼痛反應(yīng)輕、術(shù)后恢復(fù)快等特點(diǎn)。在國(guó)外，它已廣泛應(yīng)用于動(dòng)物的臨床診斷、動(dòng)物育種和胚胎移植，如牛腹腔檢測(cè)、牛腎激活、人工繁殖、牛褶皺左方方位下校正、子宮扭轉(zhuǎn)的早期診斷、，對(duì)馬腹痛的輔助診斷、隱形尿道的切除、脾腎韌帶和脾胃韌帶之間的間隙關(guān)閉術(shù)等。從狗手中取出隱形的睪，完全切斷妊娠和胚胎移植。目前腹腔鏡技術(shù)在羊的應(yīng)用范圍比較狹窄,主要集中在繁殖領(lǐng)域的幾個(gè)方面。1方式二:通過(guò)微創(chuàng)技術(shù)生產(chǎn)卵母細(xì)胞未成熟的卵母細(xì)胞是轉(zhuǎn)基因羊產(chǎn)生和早期繁殖的起點(diǎn)。腹腔鏡技術(shù)能非?？煽康卦诿總€(gè)期間回收到可預(yù)見(jiàn)數(shù)量的卵母細(xì)胞,它比用傳統(tǒng)開(kāi)腹手術(shù)進(jìn)行活體內(nèi)受精卵和活體內(nèi)發(fā)育成熟的卵母細(xì)胞回收有更小的損傷性,因此,它可從相同的供體多次回收。而且,腹腔鏡技術(shù)不同于在屠宰場(chǎng)收集卵巢內(nèi)的卵母細(xì)胞,它可以從已知健康的動(dòng)物活體內(nèi)獲得卵母細(xì)胞。由于青春期前的動(dòng)物能獲得大卵泡反應(yīng),應(yīng)用腹腔鏡技術(shù)采卵已經(jīng)表明對(duì)某些經(jīng)濟(jì)動(dòng)物的早期繁殖,特別在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究方面有很大的發(fā)展?jié)摿ΑＳ腥擞酶骨荤R技術(shù)從7個(gè)羊供體收集到62個(gè)卵母細(xì)胞,這些卵母細(xì)胞中有16個(gè)發(fā)育到16~32細(xì)胞階段,在體外進(jìn)行受精后,通過(guò)腹腔鏡技術(shù)將這些體外受精中的13個(gè)胚胎植入6只Rambouillet受體,這些受體每個(gè)都產(chǎn)出1只健康的羊羔。BaldassatreH等應(yīng)用腹腔鏡技術(shù)收集未成熟的卵母細(xì)胞,這些卵母細(xì)胞接受受精卵DNA顯微注射,這種技術(shù)的妊娠和核轉(zhuǎn)移基因組與用體內(nèi)卵母細(xì)胞或受精卵相比時(shí)有相似的比率,說(shuō)明通過(guò)腹腔鏡技術(shù)收集的卵母細(xì)胞可以成功地應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因工程中。2不同途徑輸注精子綿羊精液冷凍保存及輸精技術(shù)的研究已經(jīng)有30多年的歷史了,由于受多種原因限制,受胎率一直在40%~50%之間。采用腹腔鏡子宮角冷凍精液輸精技術(shù),能使冷凍—解凍的精子直接進(jìn)入子宮角,顯著提高了情期受胎率。MosesD等在ArgentinePatagonia地區(qū)1824頭3~7歲母羊和SantaCruzProvince地區(qū)480頭19~20月齡的母羊中進(jìn)行腹腔鏡人工授精。結(jié)果表明,腹腔鏡子宮內(nèi)人工授精能成功地應(yīng)用在澳大利亞美利奴羊和低生育力地區(qū)(如SantaCruzProvince)19~20月齡的母羊。MosesD等認(rèn)為同期發(fā)情后不必對(duì)發(fā)情進(jìn)行觀察即可進(jìn)行腹腔鏡人工授精。石國(guó)慶等應(yīng)用腹腔鏡技術(shù)進(jìn)行子宮角深部冷凍精液輸精,情期受胎率為72.73%,比常規(guī)冷凍精液輸精的情期受胎率(55.45%)高出17.28個(gè)百分點(diǎn)。田可川等利用保存20年的美利奴羊凍精腹腔鏡技術(shù)進(jìn)行子宮內(nèi)輸精試驗(yàn),雖然由于當(dāng)時(shí)凍精技術(shù)或保存期間的變化等原因,使其當(dāng)時(shí)的解凍活力僅為0.1~0.2,但是通過(guò)腹腔鏡輸精,其受胎率可以達(dá)到40.58%。羊的人工授精一般有兩種途徑,第一種是經(jīng)陰道進(jìn)入子宮頸進(jìn)行人工授精,這種方法是無(wú)創(chuàng)傷性的,對(duì)動(dòng)物機(jī)體影響小;第二種是經(jīng)子宮角直接注入精液,是一種有創(chuàng)手術(shù)。這兩種途徑獲得的結(jié)果是有差異的。FairS等用冷凍—解凍精子經(jīng)子宮頸和腹腔鏡技術(shù)進(jìn)行人工授精后,檢查純種Belclare和Suffolk母羊的受精率。結(jié)果表明,經(jīng)腹腔鏡子宮內(nèi)人工授精的受精卵母細(xì)胞顯著比經(jīng)子宮頸受精羊的高(54%∶19%)。徐明等隨機(jī)抽取210只羊進(jìn)行腹腔鏡子宮內(nèi)輸冷凍精液,50只羊進(jìn)行自然發(fā)情和子宮頸深部輸冷凍精液,150只進(jìn)行自然發(fā)情和子宮頸部輸新鮮精液。結(jié)果表明,子宮內(nèi)輸冷凍精液情期產(chǎn)羔的母羊率同子宮頸輸新鮮精液情期產(chǎn)羔的母羊率差異不顯著,但顯著高于子宮頸深部輸冷凍精液情期產(chǎn)羔的母羊率。AnelL等對(duì)Churra母羊經(jīng)陰道和腹腔鏡技術(shù)2種方法進(jìn)行子宮內(nèi)人工授精影響因素試驗(yàn),結(jié)果表明腹腔鏡技術(shù)進(jìn)行子宮內(nèi)人工授精比經(jīng)陰道人工授精有顯著高的生育力(44.89%∶31.25%)。3適當(dāng)提前時(shí)間通過(guò)腹腔鏡能直接觀察到卵巢反應(yīng)及兩側(cè)子宮發(fā)育的情況,可以很直觀地判斷出母羊是否妊娠,所以在診斷時(shí)間上可適當(dāng)提前。有學(xué)者應(yīng)用腹腔鏡進(jìn)行妊娠診斷,通過(guò)子宮和卵巢特征在妊娠第17天就可進(jìn)行精確的診斷。羊妊娠30天左右,子宮角不對(duì)稱,孕角變得較粗,彎曲減少,空角仍呈彎曲狀且較細(xì),可見(jiàn)子宮漿膜下的血管;45d后,可見(jiàn)子宮壁變薄,血管變粗并呈樹(shù)枝狀。腹腔內(nèi)窺鏡妊娠診斷的最高準(zhǔn)確率可達(dá)94.4%。4開(kāi)腹和微創(chuàng)技術(shù)由于羊無(wú)法通過(guò)直腸檢查確定動(dòng)物卵泡發(fā)育、排卵及黃體的形成和發(fā)育情況,多數(shù)科研人員都是在手術(shù)操作的時(shí)候才能確定超排供體羊是否能進(jìn)行胚胎移植,這就造成了一些無(wú)效手術(shù)。王光亞等對(duì)30只羊的34次超排處理進(jìn)行了腹腔鏡檢查,結(jié)果15次超排反應(yīng)不良,未做回收手術(shù)。腹腔鏡檢查確定形成正常黃體的羊,回收成功率為63.2%,每次手術(shù)平均獲卵數(shù)為3.6枚。馬保華等用手術(shù)法評(píng)價(jià)了192例超排山羊卵巢反應(yīng)的腹腔鏡技術(shù)檢查結(jié)果。結(jié)果表明:用腹腔鏡技術(shù)檢查并計(jì)數(shù)超排羊的黃體數(shù)時(shí),其準(zhǔn)確性隨黃體數(shù)和未排卵大卵泡數(shù)的增多而降低;計(jì)數(shù)大卵泡時(shí),其準(zhǔn)確性隨大卵泡數(shù)的增多而降低;超排羊卵巢體積較大時(shí),黃體及大卵泡計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性降低;被檢羊膘情較好且檢查前饑餓不足時(shí),對(duì)黃體及大卵泡計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性有不利影響。在應(yīng)用羊的胚胎移植技術(shù)時(shí),利用常規(guī)開(kāi)腹手術(shù)法取胚胎并進(jìn)行移植,必須取出子宮、輸卵管,因此手術(shù)時(shí)間長(zhǎng),暴露時(shí)間久,易發(fā)生感染而造成粘連,影響供體、受體羊的重復(fù)使用和繁殖性能。而利用腹腔鏡技術(shù)則對(duì)受體羊的卵巢、黃體觸及很小,對(duì)宮管結(jié)合部的固定、牽引輕微,不易發(fā)生粘連,對(duì)胚胎發(fā)育、著床一般不會(huì)產(chǎn)生不良影響,從而提高了胚胎移植成功率,提高了母羊的重復(fù)利用率,并且手術(shù)時(shí)間與開(kāi)腹手術(shù)相比大為縮短。MosesD等通過(guò)開(kāi)腹和腹腔鏡技術(shù),在12只受體羊卵巢有顯著黃體發(fā)育的同側(cè)子宮角內(nèi)的1/2處進(jìn)行胚胎移植,結(jié)果采用腹腔鏡技術(shù)進(jìn)行胚胎移植的6只羊中,有3個(gè)是活胎;通過(guò)開(kāi)腹進(jìn)行胚胎移植的6只羊中只有1個(gè)是活胎。結(jié)果表明,利用腹腔鏡技術(shù)進(jìn)行胚胎移植是快速和安全的,可以應(yīng)用于羊的胚胎移植。McMillanWH等應(yīng)用腹腔鏡技術(shù)對(duì)352個(gè)綿羊進(jìn)行胚胎移植,結(jié)果綿羊在2次鮮胚移植中,獲得高妊娠率和胚胎存活率,表明腹腔鏡移植是溫和的侵入性技術(shù),它能使羊獲得快速和可靠的胚胎移植結(jié)果,應(yīng)用此技術(shù)可獲得高妊娠率和胚胎存活率。陳傳友報(bào)道,常規(guī)手術(shù)一次沖卵將造成近20%的供體發(fā)生不同程度的粘連,其中有將近1/4的供體對(duì)以后的繁殖產(chǎn)生不利影響。而用腹腔鏡手術(shù)法,可使供體粘連的發(fā)生率降至5%左右;而且,手術(shù)時(shí)間由常規(guī)的20~30min縮短為5min左右。丁紅等在綿羊胚胎移植中對(duì)受體常用的常規(guī)手術(shù)法、小挑法、腹腔鏡法進(jìn)行了分析比較,3種方法的移植結(jié)果無(wú)顯著差異。其中采用常規(guī)手術(shù)法移植胚胎的妊娠率、胚胎存活率在3種方法中水平居中,產(chǎn)羔率最高,但在重復(fù)手術(shù)中觀察到術(shù)后粘連較多;小挑法大大降低術(shù)后粘連,但對(duì)操作技術(shù)要求較高,技術(shù)熟練者移植妊娠率為66.7%,反之低于30%;腹腔鏡法最大的優(yōu)點(diǎn)是受體應(yīng)激小,術(shù)后未發(fā)生粘連,獲得很好的移植效果。5供體羊、受體羊的臨床觀察運(yùn)用腹腔鏡技術(shù)可以在人工授精和胚胎移植過(guò)程中觀察供體羊、受體羊的健康狀況;診斷卵巢疾病,如黃體早期退化、卵巢囊腫;診斷子宮疾病,如子宮結(jié)核、子宮粘連、子宮積液等。6加保持健康訓(xùn)練的重要外科手術(shù)目前腹腔鏡技術(shù)在羊中的應(yīng)用僅僅局限于羊的繁殖領(lǐng)域,這主要是人們和獸醫(yī)從業(yè)人員對(duì)腹腔鏡這種新鮮事物