乳腺增生病相相似動物模型的建立

乳腺增生病相相似動物模型的建立

乳房增生是一種發(fā)育于年齡組的中年性女性疾病。目前,該病的發(fā)病率有逐年增加的趨勢。應用乳腺增生病動物模型是該病實驗研究的重要手段。我們在參考國內(nèi)外復制乳腺增生病動物模型的基礎上,采用手術(shù)、己烯雌酚、黃體酮等誘發(fā)家兔發(fā)生乳腺增生,其乳腺的病理改變與人類乳腺增生極為相似,適合于做乳腺增生病的實驗研究。1材料和方法1.1材料表面1.1.1實驗動物雌性日本大耳白兔,未孕,體重(1.99+0.12)kg,普通級,由湖南中醫(yī)學院實驗動物中心提供。合格證:20-003號。1.1.2飼養(yǎng)室、蘇水液、水液5.單籠飼養(yǎng),自動飲水,飼喂全價顆粒飼料。室溫20~28℃,相對濕度為50%~70%,排風扇換氣,飼養(yǎng)室每周用3%來蘇水溶液噴霧消毒1次。1.1.3各類抗病藥己烯雌酚注射液:天津金耀氨基酸有限公司生產(chǎn)[津衛(wèi)藥準字(1981)001598號]。黃體酮注射液:浙江仙居制藥有限公司生產(chǎn)[浙衛(wèi)藥準字(1996)168201號]。0.9%氯化鈉注射液:四川科倫大藥廠生產(chǎn)[川衛(wèi)藥準字(1996)012141號]。雌二醇(E2)、孕酮(P),促黃體生成激素(LH),促卵泡生成激素(FSH)4種放射免疫試劑盒均由天津德普生物技術(shù)和醫(yī)學產(chǎn)品有限公司提供,批號分別為:KE2DI0114、KPGDI0086、KLHDI0116、KFSDI0116號。1.2不同家兔肌內(nèi)注射黃體酮的試驗1.2.1動物處理:將50只雌兔隨機分為A、B、C、D、E5組。用游標卡尺測量各組兔第二對乳頭的直徑及高度,并觀察其外觀。A組兔25%烏拉坦3ml/kg麻醉,手術(shù)摘除雙側(cè)卵巢。青霉素20萬U/ml,2ml沖洗腹腔,縫合,肌內(nèi)注射青霉素40萬U/d連續(xù)3d。A、B兩組兔肌內(nèi)注射己烯雌酚0.2mg/(kg·d),連續(xù)30d;C組兔肌內(nèi)注射黃體酮1mg/(kg·d),連續(xù)30d;D組兔肌內(nèi)注射己烯雌酚0.2mg/(kg·d),連續(xù)25d,之后肌內(nèi)注射黃體酮1mg/(kg·d),連續(xù)5d;E組兔肌內(nèi)注射生理鹽水0.4ml/(kg·d),連續(xù)30d。1.2.2標本采取:停藥6d后處死動物,測量兔第二對乳頭的直徑及高度,并觀察其外觀。心臟采血,40℃恒溫水浴2h,3000r/min離心15min,分離血清,-76℃保存,剝離兔的第二對乳腺,甲醛固定。1.2.3指標檢測:乳腺組織石蠟包埋,冰凍切片,作組織形態(tài)學觀察和評價。血清雌二醇(E2),孕酮(P),促黃體生成激素(LH)和促卵泡生成激素(FSH)分別使用相應的試劑盒,采用雙抗體放射免疫法進行檢測。1.2.4統(tǒng)計學方法:運用SBSS9.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理。所有數(shù)據(jù)均以xˉ±sxˉ±s表示。2結(jié)果2.1實驗兔的毒性試驗除正常對照組兔以外,其他實驗組兔,從第7天開始,表現(xiàn)不同程度的興奮狀,尤其D組(己烯雌酚+黃體酮組)有部分兔對人有攻擊性(在實驗操作固定時,主動咬人)。2.2直徑、高度變化對照組兔乳頭外觀僅呈小米粒樣,緊貼皮膚,柔軟,直徑及高度無明顯變化。其他各實驗組兔與對照組比較,乳頭豎起,較堅實,充血,增高增大,均有明顯增生,見表1。2.3大鼠二醇e、c、p,促麻黃生成激素fsh、促麻黃生成激素lh水平由表2可見,A組(手術(shù)+己烯雌酚組)的雌二醇(E2)水平高于E組(對照組),而黃體酮(P)水平低于E組(對照組);B組(己烯雌酚組)、D組(己烯雌酚+黃體酮組)的雌二醇(E2)、卵泡生成激素(FSH)水平高于E組(對照組),而黃體酮(P)、促黃體生成激素(LH)水平低于E組(對照組);C組(黃體酮組)的雌二醇(E2)、卵泡生成激素(FSH)、促黃體生成激素(LH)水平與E組(對照組)相比差異無顯著性,而黃體酮(P)水平高于E組(對照組)。2.4家兔的乳腺癌組織學檢測光鏡鏡檢結(jié)果見表3。E組(對照組)乳腺切片中無一例發(fā)生乳腺增生。實驗組兔的乳腺切片中均有典型的乳腺增生,表現(xiàn)為乳腺小葉腺泡個數(shù)增加;細胞增生,層數(shù)增多;乳腺管擴張。其中C組(黃體酮組)、D組(己烯雌酚+黃體酮組)乳腺小葉腺體增生尤為明顯(圖1-4)。3外源激素對兔乳腺癌組織增殖的影響乳腺增生病系內(nèi)分泌障礙性增生病,一是女性體內(nèi)激素代謝障礙,尤其是雌、孕激素比例失調(diào),使乳腺實質(zhì)增生過度和復舊不全;二是部分乳腺實質(zhì)成分中,女性激素受體的質(zhì)和量異常,使乳房各部分的增生程度參差不齊。其中,雌激素刺激乳腺導管和結(jié)締組織增生,促進乳腺發(fā)育;孕酮在雌激素作用的基礎上,促進乳腺腺泡發(fā)育。通過實驗,我們發(fā)現(xiàn)以上4種方法在使用外源激素影響兔體內(nèi)激素水平的情況下,都能使兔的乳腺組織增生,結(jié)果實驗組兔100%出現(xiàn)了乳腺增生病癥,而對照組兔的乳腺均未發(fā)現(xiàn)有乳腺增生,說明模型的制作方法是成功的。4種方法中,以黃體酮誘導和己烯雌酚+黃體酮誘導兔的乳腺組織增生最為顯著,光鏡下可見管泡增生、擴張形成囊腔,腺管上皮增生,纖維組織增生,這與乳腺增生病的鏡下3種病理改變基本相符。孕激素于排卵后分泌量開始增加,在排卵后7~8d黃體成熟時分泌量達最高峰,以后逐漸下降,到月經(jīng)來潮時回復到排卵前水平。機體