hplc法測(cè)定護(hù)肝片中五味子醇甲的含量

hplc法測(cè)定護(hù)肝片中五味子醇甲的含量

肝屏障由柴胡、艾酒、板藍(lán)根、五味子、豬膽粉、綠茶和六位中藥組成。護(hù)肝片具有疏肝理氣,健脾消食。具有降低轉(zhuǎn)氨酶作用。用于慢性肝炎及早期肝硬化。五味子,俗稱山花椒、秤砣子、藥五味子、面藤、五梅子等,唐等《新修本草》載“五味皮肉甘酸,核中辛苦,都有咸味”,故有五味子之名。《中國(guó)藥典》2005版采用高效液相色譜法測(cè)定五味子醇甲的含量來(lái)控制五味子的質(zhì)量,規(guī)定不得少于0.40%。中成藥中五味子醇甲的含量測(cè)定方法已有報(bào)道,但對(duì)護(hù)肝片中五味子醇甲的含量測(cè)定報(bào)道很少。現(xiàn)對(duì)制劑中五味子醇甲進(jìn)行測(cè)定,控制護(hù)肝片質(zhì)量。1護(hù)肝片及藥料高效液相色譜儀:安捷倫1100泵;安捷倫檢測(cè)器;安捷倫色譜工作站。護(hù)肝片批號(hào)(20051201,20051207,20051219)。五味子醇甲對(duì)照品(110857-200507)由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。甲醇為色譜純,其它試劑試藥均為分析純。2重量測(cè)定2.1s18柱檢測(cè)條件色譜柱為USAAgilentZORBAXSB-C18柱(規(guī)格4.6mm×250mm,5μm);甲醇—水(60∶40)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm;流速1.0ml·min-1;柱溫:30℃。2.2提取方法是正確的2.2.1超聲提取的選擇在供試品溶液制備中,分別選用了水、50%甲醇、甲醇進(jìn)行超聲提取,結(jié)果表明甲醇分離效果、峰形及含量為最好,所以選擇甲醇進(jìn)行超聲提取。2.2.2種提取時(shí)間對(duì)比取供試品適量,用甲醇溶解,超聲波振蕩分別提取20、25、30分鐘,制備供試品溶液,含量結(jié)果表明:三種提取時(shí)間結(jié)果無(wú)明顯差異,為保證提取完全并縮短處理時(shí)間,采用超聲提取20分鐘。子醇甲對(duì)照品溶液20μl重復(fù)進(jìn)樣5次,測(cè)定峰面積積分值,對(duì)照品峰面積積分值的RSD為0.88%。結(jié)果表明,本實(shí)驗(yàn)精密度良好。2.8方法的重現(xiàn)性測(cè)定分別稱取同批護(hù)肝片樣品6份,分別依照2.3項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品,按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定含量,并計(jì)算樣品的RSD值為1.16%,結(jié)果表明,此含量測(cè)定方法的重現(xiàn)性良好。2.9研磨法測(cè)定五味子醇甲峰面積積分值依照2.3項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品溶液,分別在0,4,8,24,30h精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀,進(jìn)樣測(cè)定,供試品五味子醇甲峰面積積分值的RSD為0.52%。結(jié)果表明五味子醇甲至少在30h內(nèi)穩(wěn)定。2.10加樣回收率試驗(yàn)采用加樣回收試驗(yàn),取已知含量的同一批供試品各6份,精密稱定,分別精密添加一定量的五味子醇甲對(duì)照品,按供試品制備所述方法制備供試品溶液,測(cè)定含量(同時(shí)測(cè)定樣品含量),計(jì)算回收率。6次測(cè)定的平均回收率為99.65%,RSD為0.91%。2.11樣品含量測(cè)定按本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定項(xiàng)下方法,測(cè)定了三批樣品,結(jié)果見(jiàn)表1,樣品中五味子醇甲的含量差異,每片不低于0.4mg。表1三批樣品含量測(cè)定結(jié)果3討論3.1藥物中藥物制備配方2.3供試品溶液的制備。取護(hù)肝片適量,研細(xì),精密稱取約2g,(60∶40),甲醇—水(40∶60)不同比例的流動(dòng)相,結(jié)果以甲醇—水置50ml量瓶中,加甲醇適量,超聲處理20min使溶解,放置至室溫,(60∶40)為流動(dòng)相,供試品各峰分離效果最好,故選用甲醇—水加甲醇稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò),即得。(60∶40)為流動(dòng)相。2.4對(duì)照品溶液的制備。精密稱取五味子醇甲對(duì)照品約15.25mg,置50ml容量瓶中,用5甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得(每1ml溶液中含五味子醇甲30.5mg)。2.5陰性干擾試驗(yàn)。在處方中去五味子藥材,按方中比例和制備工藝方法制成陰性制劑,用供試品溶液制備的方法,制成陰性對(duì)照溶液,用以上選定的測(cè)定條件進(jìn)行吸收曲線繪制,觀察在與五味子醇甲相同的保留時(shí)間處是否存在吸收峰,結(jié)果表明:在選定條件下測(cè)得的陰性液吸收曲線在與五味子醇甲相同保留時(shí)間處不存在吸收峰,因此說(shuō)明選定的條件測(cè)定五味子醇甲無(wú)干擾,具有較強(qiáng)的專屬性。2.6標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。制備濃度為30.5、91.5、153.5、213.5、384.3μg·ml-1的對(duì)照品溶液,分別精密吸取10μl注入HPLC,記錄色譜圖。以峰面積積分值A(chǔ)(μg)為橫坐標(biāo),進(jìn)樣量為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,回歸方程為Y=4870X-8019,r=0.9999(n=5)。試驗(yàn)表明,五味子醇甲對(duì)照品在30.5~274.5μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.7精密度試驗(yàn)。依照2.4項(xiàng)下制備對(duì)照品溶液,精密吸取五味3.2味子醇甲檢測(cè)波長(zhǎng)制備五味子醇