調(diào)神益腎針法對生殖大鼠雌激素分泌器官形態(tài)功能的影響

調(diào)神益腎針法對生殖大鼠雌激素分泌器官形態(tài)功能的影響

調(diào)神益腎法是由天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院的科學(xué)家史學(xué)敏為治療女性更年期綜合征而制定的針灸處方。主要穴位為風(fēng)府、百會、氣海和腎陰虛。用于治療女性更年期綜合征。筆者先期研究表明,本法能調(diào)節(jié)下丘腦—垂體—卵巢軸功能,使雌性更年期大鼠血清原下降的雌二醇(E2)水平上升、上升的卵泡刺激素(FSH)和黃體生成素(LH)水平下降,3者重歸穩(wěn)態(tài)。鑒于卵巢、腎上腺是體內(nèi)雌激素(包括E2、雌酮、雌三醇)及其前體物質(zhì)合成、分泌的主要器官,本研究應(yīng)用形態(tài)學(xué)技術(shù),觀察雌性更年期大鼠卵巢、腎上腺衰老性變化及調(diào)神益腎針法的干預(yù)效應(yīng),以進一步明確提高雌性更年期大鼠血清E2水平的機制。1實驗動物及分組選用4月齡雌性Wistar大鼠15只,平均體重180g左右;16月齡雌性Wistar大鼠30只,平均體重290g左右,均由天津市勞動職業(yè)病衛(wèi)生研究所動物室提供。喂養(yǎng)在12h光照、12h黑暗的條件下,自由攝食、飲水,室溫控制在22～28℃。Reichert-Jung2040旋轉(zhuǎn)式切片機,德國產(chǎn);OlympusBH-2顯微鏡,日本產(chǎn);HPIAS-100高清晰度彩色病理圖文分析系統(tǒng),武漢同濟醫(yī)科大學(xué)千屏影像公司提供。室驗室常規(guī)試劑,分析純。目前用于更年期綜合征研究的大鼠模型有3種:切除卵巢的去勢術(shù)、X線損傷術(shù)、自然老化術(shù)。由于前二者均是通過人為切除或損傷卵巢,制造一個雌激素突然降低的環(huán)境模擬更年期綜合征的發(fā)生,與臨床實際情況不盡相符,因此,筆者選擇與人類更年期綜合征病理變化更為近似的后者。購進的動物適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,30只16月齡雌性Wistar大鼠隨機分為模型組15只,針刺組15只,15只4月齡雌性Wistar大鼠作為青年組。針刺組根據(jù)華興邦等制定的大鼠穴位圖譜選取風(fēng)府、百會、氣海、腎俞穴。風(fēng)府緩慢向下直刺0.3cm,百會向后平刺0.5cm,氣海直刺0.5cm,均行中等幅度的提插捻轉(zhuǎn)手法,平補平瀉;腎俞向脊柱方向斜刺0.5cm,行小幅度高頻捻轉(zhuǎn)補法。均留針20min,中間行針2次,加強刺激。每日1次,連續(xù)6天,中間休息1天,4周為1療程。青年組、模型組動物每天只進行抓取刺激,不予針刺。為避免日夜節(jié)律對觀察指標(biāo)的影響,標(biāo)本采集均在上午9:00～11:00進行。待針刺組動物接受針刺刺激滿1療程時,3組動物同時斷頭處死,摘取卵巢、腎上腺,置10%福爾馬林液中固定。再經(jīng)脫水、包埋、切片、HE染色。圖像采用光鏡觀察、攝片,并經(jīng)計算機圖像分析。數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Xˉˉˉ±S)(Xˉ±S)表示,借助SPSS統(tǒng)計軟件作方差分析。2各組大鼠肝腎組織結(jié)構(gòu)比較青年組15只大鼠30個卵巢,在低鏡下,可見到大量原始卵泡及大小、數(shù)量不等的初級卵泡、竇狀卵泡,間質(zhì)腺豐富(見照片1);鏡下計數(shù),每個卵巢切片原始卵泡數(shù)為4.22±0.97,初級卵泡數(shù)為4.89±1.27,竇狀卵泡數(shù)為4.67±1.00(見表1)。模型組15只大鼠30個卵巢,在低倍鏡下,可見原始卵泡、初級卵泡和竇狀卵泡均較少,間質(zhì)腺稀疏(見照片2);鏡下計數(shù),每個卵巢切片原始卵泡數(shù)為2.56±1.07,初級卵泡數(shù)為2.73±1.12,竇狀卵泡數(shù)為2.84±1.21,與青年組比較均顯著減少(P<0.01)(見表1)。針刺組15只大鼠30個卵巢。在低倍鏡下,可見有數(shù)量不等的原始卵泡、初級卵泡和竇狀卵泡,間質(zhì)腺較多(見照片3);鏡下計數(shù),原始卵泡數(shù)為2.80±1.03;初級卵泡數(shù)為3.10±1.25;竇狀卵泡數(shù)為3.13±1.81;與青年組相比仍均顯著減少(P<0.01),與模型組相比均無顯著性統(tǒng)計差異(見表1)青年組15只大鼠30個腎上腺,在高倍鏡下,可見束狀帶細(xì)胞(因大鼠腎上腺皮質(zhì)的束狀帶較厚,細(xì)胞較大,所以本次實驗以束狀帶細(xì)胞為代表)排列成單行或雙行的細(xì)胞索,相互平行,與被膜垂直,細(xì)胞體較大,呈立方形或矮柱狀,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含有較多、較大的空泡(系HE染色標(biāo)本上,合成雌激素的前體物質(zhì)膽固醇等被脂溶劑溶解而形成)(見圖4);經(jīng)高清晰度病理圖像分析系統(tǒng)測量(×40),腎上腺皮質(zhì)總厚度為1137.12±83.97μm,束狀帶厚度為729.89±107.31μm(見表2)模型組15只大鼠30個腎上腺,在高倍鏡下,可見束狀帶細(xì)胞失去相互平行排列的結(jié)構(gòu)特征,交叉呈網(wǎng),不再與被膜垂直,細(xì)胞體較小,呈扁平或多角形,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)空泡較少、較小(見照片5);腎上腺皮質(zhì)總厚度為800.82±119.06μm,束狀帶厚度為471.99±57.68μm,均較青年組明顯變薄(P<0.01),呈萎縮性改變(見表2)。針刺組15只大鼠30個腎上腺,在高倍鏡下,可見束狀帶細(xì)胞排列成單行或雙行的細(xì)胞索,相互間近似平行,基本與被膜垂直,細(xì)胞體較大,呈立方形或球形,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)空泡較多(見照片6);腎上腺皮質(zhì)總厚度為1106.67±110.56μm,束狀帶厚681.57±69.04μm,均較模型組明顯增厚,接近青年組(見表2)。3調(diào)神益腎針法對男性平臺大鼠肝腎皮質(zhì)形態(tài)功能的影響卵巢、腎上腺是雌激素及其前體物質(zhì)合成、分泌的主要器官。卵巢中竇狀卵泡的內(nèi)泡膜細(xì)胞在LH的作用下,將具有27碳原子結(jié)構(gòu)的膽固醇衍化為雄烯二酮,后者穿過卵泡基底膜,進入卵泡內(nèi)的顆粒細(xì)胞,顆粒細(xì)胞在FSH刺激下,芳香化酶細(xì)胞色素P450活化,雄烯二酮受芳香化酶催化,轉(zhuǎn)變?yōu)榇仆癊2,這些激素經(jīng)卵泡周圍的微靜脈進入體循環(huán),小部分潴留于卵泡液中、。此外,卵巢中間質(zhì)腺細(xì)胞也能分泌一定量的類固醇激素如孕激素、雌激素和雄激素。腎上腺由皮質(zhì)和髓質(zhì)組成,前者自外向內(nèi)分為3個帶:球狀帶、束狀帶和網(wǎng)狀帶。近年來研究表明,腎上腺皮質(zhì)中的類固醇激素合成酶呈區(qū)域性分布,如醛固酮生成過程中最終步驟的18-羥基類固醇脫氫酶只存在于球狀帶,而合成皮質(zhì)醇、雄激素和雌激素所必需的17-羥化酶僅見于腎上腺皮質(zhì)的束狀帶和網(wǎng)狀帶,因此又對腎上腺皮質(zhì)作了機能性分區(qū),即球狀帶為外側(cè)區(qū),聯(lián)合的束狀帶—網(wǎng)狀帶為內(nèi)側(cè)區(qū)。在功能上,腎上腺皮質(zhì)內(nèi)側(cè)區(qū)只直接合成、分泌少量的雌激素,主要是合成、分泌雄激素,但后者可在脂肪、肝臟、腦、骨髓、肌肉等外周組織轉(zhuǎn)化為雌激素,對卵巢功能起一定補償作用。本研究發(fā)現(xiàn):(1)模型組大鼠卵巢中原始卵泡數(shù)、初級卵泡數(shù)、竇狀卵泡數(shù)均較青年組顯著減少,間質(zhì)腺稀疏;針刺組大鼠卵巢中原始卵泡及初級、竇狀卵泡數(shù)較模型組略有增加,但無統(tǒng)計學(xué)差異,仍明顯低于青年組,而間質(zhì)腺較模型組豐富。提示調(diào)神益腎針法可部分改善卵巢形態(tài)功能,但最終不能逆轉(zhuǎn)卵巢的自然衰老過程。(2)模型組大鼠腎上腺皮質(zhì)總厚度、束狀帶厚度均呈萎縮性改變,且束狀帶細(xì)胞交叉呈網(wǎng),失去平行排列及與被膜垂直的結(jié)構(gòu)特點,細(xì)胞體小而扁平,胞質(zhì)內(nèi)合成雌激素的前體物質(zhì)膽固醇含量減少(HE染色的切片上表現(xiàn)為胞質(zhì)中空泡少而小);針刺組大鼠的腎上腺皮質(zhì)總厚度、束狀帶厚度增加,與模型組相比有顯著差異,束狀帶細(xì)胞索近似平行排列,細(xì)胞體積增大,胞質(zhì)中膽固醇含量增多(HE染色的切片上表現(xiàn)為胞質(zhì)中空泡大而多)。表明調(diào)神益腎針法能促使雌性更年期大鼠腎上腺皮質(zhì)中合成、分泌雌激素及其前體物質(zhì)的有關(guān)形態(tài)結(jié)構(gòu)往良性方面轉(zhuǎn)化。由上述可見,調(diào)神益腎針法提