產(chǎn)幾丁質(zhì)酶枯草芽孢桿菌g3菌劑對番茄的田間防效

產(chǎn)幾丁質(zhì)酶枯草芽孢桿菌g3菌劑對番茄的田間防效

根據(jù)上述報道，產(chǎn)聚酶沿線酶善草芽菌（b.surtilis）能夠抑制多種植物致病性病原體，并具有成為生物活性劑的潛力。1990年以來,用枯草芽孢桿菌制備生防制劑防治多種植物病害成了研究熱點。國內(nèi)有大量研究報道;國外已有商品生產(chǎn)。例如,美國Agraquest公司用枯草芽孢桿菌QST713菌株開發(fā)出活菌殺菌劑SerenadeTM,并于2000年通過美國環(huán)保局(EPA)的登記,用于防治多種作物的白粉病、霜霉病、疫病、灰霉病等病害。本文報道G3菌劑防治菜豆炭疽病、茄子菌核病和番茄葉霉病的盆栽試驗結果以及G3菌劑對黃瓜和茄子苗期的促生作用。1材料和方法1.1干草芽菌實驗菌劑的制備1.1.1病毒枯草芽孢桿菌(B.subtilis)G3為本課題組所分離并保存。1.1.2濕料滅菌方法市售新鮮麥麩以等重量肉湯培養(yǎng)液(w/w)混勻,分裝于500mL三角瓶中,每瓶濕料200g,121℃滅菌30min。用50mL無菌水將培養(yǎng)好的克氏瓶斜面菌種洗出制成芽孢懸浮液,每瓶接種5mL,拍瓶后于30℃培養(yǎng)3d(中途拍瓶二次),培養(yǎng)結束,挖瓶置室內(nèi)風干,塑料袋內(nèi)保存并測定每克活芽孢數(shù)。1.2真菌菌株的培養(yǎng)1.2.1病毒油菜菌核病菌(Sclerotiniasclertiorum,簡寫Scl.s),由本課題組分離并保存。1.2.2菌種培養(yǎng)和培養(yǎng)麥麩用等重量的PD培養(yǎng)液混勻,分裝于500mL三角瓶中,每瓶濕料200g,滅菌后接入斜面菌種一塊,25℃培養(yǎng)10d,菌絲長滿培養(yǎng)基后冰箱4℃保存?zhèn)溆谩?.3蔬菜和豆類碳疽病防治試驗1.3.1疾病場地準備蠶豆花季,在炭疽病明顯的病株根部共取病土12kg(含水量約20%)。1.3.2加快芽孢桿菌gf的放養(yǎng)、育苗取底部留孔的塑料箱(長、寬、高:40cm×30cm×20cm)2只,每箱加病土5kg(10cm厚),攤平,播種菜豆種籽40粒,同時均勻撒入20gG3菌劑(活芽孢數(shù)136億/g,下同),最后覆土1kg(2cm厚),拍平。一層地膜封口后置溫室20～25℃發(fā)芽。5d后種子大部分破土,揭膜,塑料箱移至室外10～20℃出苗,15d后植株8～10cm高時起苗檢查發(fā)病情況,分0級(無病斑)、1級(有病斑,病斑長度小于1cm)和2級(病斑長度大于1cm)三個等級。以不加G3菌劑的箱作對照。1.4在堿性土壤中，g3菌劑對茄子幼苗的影響1.4.1scl.s固體菌種的制備3月底在塑料大棚發(fā)菌核病的菜豆根部取病土5kg,加堆肥1kg和1瓶剛培養(yǎng)好的Scl.s固體菌種(長有大量的菌核)混合均勻,裝入密閉塑料箱中,置溫室25℃自然發(fā)酵10d。1.4.2自然發(fā)酵方法100gG3菌劑加100mL水濕潤后混入5kg肥沃菜園土中(含水量20%左右),用手充分拌勻置密閉塑料箱中于溫室25℃自然發(fā)酵10d。1.4.3覆土、泥質(zhì)、種子覆蓋物的覆蓋塑料箱(同“1.3.2”)內(nèi)加菜園土5kg,攤平(10cm厚底土)。1kgG3帶菌土(含20gG3菌劑)與1kg菌核病土混勻,覆蓋于底土上。100粒茄種子撒播于土面上,用手稍加翻動土層,使種子處于土層1～2cm處,拍平,塑料箱覆蓋一層地膜保濕,于室溫15～20℃培養(yǎng)出苗?？瞻讓φ障溆?kg菜園土替代G3帶菌土,其余同G3菌處理箱。1.4.4死苗數(shù)試驗播種后逐日觀察和記錄箱內(nèi)的變化(Scl.s菌絲萌發(fā)、繁殖和消亡,茄種子的萌發(fā)、出苗以及死亡),統(tǒng)計死苗數(shù),第32天時起苗,測量株高和株干重。株高和株干重數(shù)據(jù)經(jīng)方差分析、t測驗,確定差異顯著性。1.5在堿性土壤中，g3菌劑對黃瓜幼苗的促進作用1.5.1細菌根的制備同“1.4.1”。1.5.2s3菌土制備同“1.4.2”。1.5.3營養(yǎng)缽黃瓜培養(yǎng)菌核病土和G3菌土分別以4∶0、3∶1、2∶2、1∶3和0∶4比例混合(5個處理),每處理重復4次,每重復為1營養(yǎng)缽,裝入上述混合土200g。自然土200g為對照。營養(yǎng)缽置瓷盤中,盤中加水以毛細管效應使缽中土壤吸飽水分,自然晾干1d,每缽插播剛破口的黃瓜種子5粒,溫室內(nèi)20～25℃培養(yǎng)。第13天時起苗檢查出苗率、株高和株干重。1.6番茄霉病的防治1.6.11%細菌溶液的制備5g固體菌劑加500mL水浸泡10min,雙層紗布過濾,濾渣在濾液中擠捏數(shù)次后棄去,濾液滴加兩滴沾著劑OP,攪勻。1.6.2葉霉病的發(fā)生室內(nèi)缽栽的番茄苗6棵,苗高15～20cm,自然發(fā)生嚴重的葉霉病。用小噴霧器全株噴藥3棵,另3棵噴清水作對照,噴藥后置室外遮光處培養(yǎng),第3天和第7天先后二次檢查噴藥效果。1.6.3方法和療效計算每株4張復葉的全部小葉數(shù)為調(diào)查對象,按文獻進行病葉分級和防治效果計算。2結果與分析2.1g菌劑對菜豆出苗的影響播后15d起苗檢查,發(fā)現(xiàn)G3菌劑抑制菜豆炭疽病有一定的效果,無病斑的0級苗17株,占58.6%,明顯高于CK36.8%(14株),防效主要表現(xiàn)為1級病苗數(shù)比CK大大下降(表1)。但從成苗率看,G3處理比對照下降22.5%,說明菌劑對菜豆出苗有一定的影響。從平均株高看,G3處理的29株為7.91cm,CK的38株為7.37cm略有提高。因此,G3菌劑防治菜豆炭疽病有一定效果但對出苗有一些不良影響。在燒杯內(nèi)加入1%、5%和10%G3菌液(以脫脂棉吸附)所做的菜豆發(fā)芽試驗表明,三個濃度的菌液對菜豆發(fā)芽無影響,但5%和10%菌液對菜豆破口后胚根和胚莖的伸長有明顯的抑制作用。2.2葡萄種子萌發(fā)、死亡播種后第3天,Scl.s接種菌絲塊菌絲開始萌發(fā),由于箱內(nèi)溫濕度適宜,Scl.s菌絲在土面擴散,形成多個菌絲團,第7天菌絲團開始消退。第12天部分種子開始出苗,塑料箱移至室外(15～25℃),每天揭膜一次換氣。第18天茄苗兩片子葉3cm高時,出現(xiàn)死苗高峰(Scl.s菌在茄苗莖基部定殖,引發(fā)倒苗死亡)。之后,G3菌處理箱基本無死苗而CK箱死苗不斷,第32天起苗中止觀察,死苗和活苗以及兩箱中最高的15株苗的株高和株干重的結果見表2。2.3g帶菌土黃瓜菌核病土中黃瓜苗不象茄子苗那樣易引發(fā)菌核病,但土中的某種未知因子會能強烈地抑制黃瓜種子破土和生長。100%的菌核病土完全抑制種子破土,G3菌劑加入可明顯解除病土中的抑制因子,改善出苗率、增加株高和株干重(表3)。G3帶菌土比例越高,出苗率、株高和株重就越好。表3還表明,100%G3帶菌土黃瓜的出苗率與普通土相同,但株高和株重略勝一籌。在隨后的補充試驗中,在200g普通土中分別加入G3菌劑0,1,2,3,4g,結果出苗率基本接近(90%～100%),平均株高在9.5cm左右,但平均株干重則分別為0.045,0.049,0.059,0.062,0.065g,菌劑越多,干重越重。以上事實說明,在普通土壤中,加入G3菌劑對黃瓜苗期亦有增加干重的促生作用。2.4有霉斑葉片對3dG3菌劑對葉霉有良好的防治效果(表4)。噴藥前,3株處理株共有120片小葉,有霉斑葉片35片,藥后3d,有霉斑葉片為11片,7d有霉斑葉片僅存7片,3株對照小葉片亦120片,藥前病葉31片,但3d后增加到43片,7d后為65片。根據(jù)文獻的計算公式,G3菌劑3d和7d的防效分別為78.8%和89.7%。3g菌株對植物病害的防治3.1枯草芽孢桿菌用于防治植病的作用已受到國外廠商的充分重視,作為生物殺菌劑在美國已有3家廠商進行了登記。在我國臺灣省,光華化工股份有限公司于2000年以商品名“臺灣寶”完成了登記,這是臺灣第一個有自主知識產(chǎn)權的農(nóng)藥。以上產(chǎn)品登記的殺菌范圍以氣傳病害為主的白粉病、霜霉病、灰霉病、早疫病和晚疫病,涉及的作物有瓜類、葉菜、辣椒、葡萄、核桃和馬鈴薯等陸生作物。初步的盆栽試驗表明,G3菌株對氣傳病害番茄葉霉有良好