熒光紫外分光光度計

張文靜wenjing271@126.com牟平海岸帶環(huán)境綜合測試站2017年06月16日分光光度計（熒光/紫外可見）培訓(xùn)光譜分析法熒光/紫外分光光度計熒光分光光度計HITACHIF-2700紫外可見分光光度計TU-1810一熒光分光光度計二紫外可見分光光度計報告提綱原理——朗伯比爾定律當(dāng)一束平行單色光垂直入射通過均勻、透明的吸光物質(zhì)的稀溶液時，溶液對光的吸收程度與溶液的濃度及液層厚度的乘積成正比。A——吸光度；τ——百分透射比；K——比例常數(shù)；B——液層厚度；C——溶液濃度。紫外可見分光光度計工作模式：單機模式，單片機軟件平臺

光譜寬度：2nm（固定狹縫）

波長范圍：190-1100nm波長重復(fù)率：≤0.2nm

波長示值誤差：±0.3nm（開機自動校準(zhǔn)）光度方式：透過率、吸光度、能量

光度范圍：-0.3Abs～3Abs透射比示值誤差：±0.3%透射比重復(fù)率：≤0.15%基線平直度：±0.001漂移：≤0.2%/h儀器構(gòu)造單色器樣品吸收池信號顯示系統(tǒng)檢測器控制系統(tǒng)光源由光源發(fā)出的光，經(jīng)單色器獲得一定波長的單色光，照射到樣品溶液，被吸收后，經(jīng)檢測器將光強度變化轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘栕兓⒔?jīng)信號顯示系統(tǒng)調(diào)制放大后，顯示測量結(jié)果。功能——光度測量測量當(dāng)前波長處的吸光度或透過率并可進(jìn)行系數(shù)計算；利用光度測量功能測量當(dāng)前波長處的吸光度或透過率；若選定自動八聯(lián)池狀態(tài)，可自動完成校準(zhǔn)及7個樣品的測量。功能——光譜測量可對樣品的吸光度、透過率和燈能量進(jìn)行光譜測量。設(shè)置參數(shù)，如波長范圍、顯示范圍、采樣間隔及掃描速度等；可掃描出樣品的光譜曲線，并在LCD顯示器上實時顯示。功能——定量測量可進(jìn)行單波長的定量測定，定量方法有系數(shù)法和標(biāo)準(zhǔn)曲線法；可作8個標(biāo)準(zhǔn)樣品的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線并給出線性相關(guān)系數(shù)；可輸入線性系數(shù)可直接進(jìn)行樣品濃度測量。功能——DNA/蛋白質(zhì)測量方法1： 蛋白質(zhì)濃度＝1552×A280－757.3×A260(ug/ml) DNA濃度＝62.9×A260－36.0×A280(ug/ml）方法2：

蛋白質(zhì)濃度＝

183.0×A230－75.8×A260(ug/ml) DNA濃度＝49.1×A260－3.48×A230(ug/ml)自定義法：功能——系統(tǒng)應(yīng)用在此功能模塊下，可進(jìn)儀器的工作參數(shù)進(jìn)行設(shè)置，如換燈波長、狹縫的大小、鎢燈和氘燈的開關(guān)、模式設(shè)置、時間設(shè)置和系統(tǒng)復(fù)位等。應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)境保護(hù)化學(xué)工業(yè)冶金地質(zhì)生物化學(xué)機械制造臨床檢驗食品衛(wèi)生藥品檢驗農(nóng)業(yè)化學(xué)國防科學(xué)一熒光分光光度計二紫外可見分光光度計報告提綱熒光分光光度計HITACHIF-2700原理—分子發(fā)光機理S0S1S2InternalConversionFluorescenceAbsorptionSingletStateM+hνM*M+熱M+熒光基態(tài)激發(fā)態(tài)F=

KI0CL=K’CL

:熒光效率，K：儀器常數(shù),C：濃度，I0：吸收光強，L：池的光徑長度儀器構(gòu)造紫外檢測器特點靈敏度高比紫外高2-3個數(shù)量級選擇性強熒光光譜包括激發(fā)光譜和發(fā)射光譜。因此確定恰當(dāng)?shù)募ぐl(fā)光譜和發(fā)射波長，能達(dá)到很高的選擇性試劑量少方法簡單可連接微機工作站，能獲得更多信息熒光分析可提供激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、熒光強度、總熒光量、峰位、普帶寬度、量子產(chǎn)率和熒光壽命等參數(shù)受外界影響大溫度、pH值、溶劑和其他因素都可能顯著影響分析結(jié)果。溫度對其影響最大熒光分光光度計的功能1、波長掃描

波長掃描功能主要包括熒光強度和發(fā)光強度兩種數(shù)據(jù)模式。通過熒光強度數(shù)據(jù)模式可以得到樣品的激發(fā)光譜和熒光光譜，是一種比較常用的方法。

300320340360380400420440460nm050100150200250300350INT

Excitationscanemission402nmEmissionscanexcitation358nmAnthracene熒光分光光度計的功能

2、時間掃描時間掃描是在規(guī)定的時間間隔內(nèi)采集被測樣品的熒光強度隨時間變化曲線?？梢杂脕肀O(jiān)測被測樣品的物理化學(xué)變化，動力學(xué)法可被執(zhí)行。

3、光度值法

使用波長法進(jìn)行定量，高達(dá)20個標(biāo)準(zhǔn)樣品能被測量，通過標(biāo)準(zhǔn)濃度的每個點來繪制多邊形標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備可使用一次、二次、三次方的曲線或折線，同時可獲得其相關(guān)系數(shù)R及R2。

4、三維掃描

可以得到三維圖、等高線圖，快速進(jìn)行未知樣品熒光峰位的測定。

5、強大的圖譜處理功能

兩個譜圖可進(jìn)行加、減、乘、除運算，也可以計算譜圖面積；具有光譜校正和快門控制等。應(yīng)用領(lǐng)域

生物化學(xué)測定酶動力學(xué)測定及底物測定藥物學(xué)方面IntracellularBioch