海白菜提取物的抑菌活性研究

海白菜提取物的抑菌活性研究

不朽的海白菜的學(xué)名是外部克氏，也被稱為康乃馨和海貍，屬于綠藻門?！侗静菔斑z》中記載謂:“石莼生南海,附石而生,似紫菜,色青”,主“味甘無(wú)毒,入水,利小便”。南春容等研究表明,孔石莼的水提取物可抑制赤潮藻—赤潮異彎藻、中肋骨條藻和塔瑪亞歷山大藻,此外,孔石莼的甲醇提取物具有較強(qiáng)的抑制B淋巴細(xì)胞增殖作用,且呈明顯的劑量依賴。裙帶菜(UndarizapinnatifidacharvSuringer)屬海帶目,翅藻科,裙帶菜屬,是一種溫帶性多年生大型褐藻,在我國(guó)主要分布于遼寧、山東、江蘇、浙江等地。裙帶菜不但可以食用,在日本還可用于乳腺癌的治療,此外,裙帶菜還有降血脂、降血壓和抗突變的作用,裙帶菜中的褐藻硫酸多糖具有明顯的抗凝血和抗病毒作用。海白菜及裙帶菜均為我國(guó)產(chǎn)量較高、價(jià)格低廉的大型海藻,從中提取多糖作為保健食品和藥品的研究已很多,本工作擬對(duì)孔石莼和裙帶菜的抑菌物質(zhì)進(jìn)行提取,并研究不同處理?xiàng)l件對(duì)其抑菌物質(zhì)活性的影響,以期將兩種大型海藻的提取物應(yīng)用于食品中,以取代化學(xué)防腐劑,開發(fā)出一種價(jià)廉、無(wú)毒無(wú)害的天然防腐劑。1材料和方法1.1材料表面1.1.1菌種和微生物實(shí)驗(yàn)室金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大腸桿菌(Escherichiacoli)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、啤酒酵母(S.cerevisiae)黑曲霉(Aspergillusniger),由我院微生物實(shí)驗(yàn)室提供。1.1.2原材料海白菜、裙帶菜購(gòu)買于連云港振大超市,產(chǎn)地連云港。1.1.3培養(yǎng)基細(xì)菌培養(yǎng)基:牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。真菌培養(yǎng)基:PDA培養(yǎng)基。1.2方法1.2.1原材料預(yù)處理將購(gòu)買來(lái)的原料清洗后,于干燥箱中50℃烘干,剪碎后用高速粉碎機(jī)粉碎過(guò)40目篩,密封后于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?.2.2浸提液制備液稱取裙帶菜或海白菜粉末10g,加入200mL蒸餾水,調(diào)pH為5,混勻后于55℃水浴中浸提3h~4h,真空抽濾除去不溶性雜質(zhì),60℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮5倍后倒入無(wú)菌三角瓶中,密封后于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?.2.3用海藻有機(jī)溶劑提取物制備(1)雜質(zhì)的提取、蒸發(fā)稱取裙帶菜或海白菜粉末10g(3份)分別加入50%、60%、70%的甲醇水溶液,調(diào)pH為5,于60℃水浴下回流提取8h,真空抽濾除去不溶性雜質(zhì),40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮5倍后倒入無(wú)菌三角瓶中,密封于4℃冰箱中保存?zhèn)溆?。稱取裙帶菜或海白菜粉末10g(3份),分別加入50%、60%、70%的乙醇水溶液,調(diào)pH為5,于85℃水浴下回流提取8h,過(guò)濾及濃縮同上。1.2.4樣品的預(yù)處理于不同平板上涂布不同試驗(yàn)菌菌懸液,用消毒的Φ6mm的打孔器在平板的相應(yīng)位置上打孔。用移液槍吸取提取液注滿相應(yīng)的孔,以pH5的無(wú)菌生理鹽水作空白對(duì)照,每種提取物樣品做兩個(gè)平行。細(xì)菌置37℃恒溫箱中培養(yǎng)24h,真菌置28℃恒溫箱中培養(yǎng)48h。1.2.5關(guān)于抗菌物質(zhì)性質(zhì)的研究(1)ph影響預(yù)防抗菌效果將有抑菌效果的海白菜60%甲醇提取物分別調(diào)pH至4,5,6,7,8,9,10,按1.2.4中的方法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)。(2)醇提取物抑菌活性的測(cè)定將有抑菌效果的裙帶菜及海白菜60%甲醇提取物分別經(jīng)90℃,100℃,110℃,120℃處理30min,冷卻至室溫后按1.2.4中的方法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)。2結(jié)果與分析2.1兩種提取物的抑菌效果裙帶菜及海白菜水提取物的抑菌活性結(jié)果見表1,由表1可見,兩種提取物對(duì)枯草芽孢桿菌及金黃色葡萄球菌有抑制作用,由于兩種海藻水提取物抑菌圈較小,故未列出抑菌圈寬度。對(duì)大腸桿菌、黑曲霉及啤酒酵母無(wú)抑制作用。2.2衣帶菜提取物對(duì)枯草桿菌的抑制作用裙帶菜及海白菜甲醇提取物的抑菌活性結(jié)果見表2,表2的結(jié)果表明,裙帶菜不同濃度的甲醇提取物對(duì)枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌均有抑制作用。裙帶菜60%甲醇提取物對(duì)枯草桿菌抑菌圈寬度較大,為2.0mm左右,對(duì)金黃色葡萄球菌抑制效果較好的為50%甲醇提取物。海白菜不同濃度的甲醇提取物對(duì)兩種菌的抑制效果要優(yōu)于裙帶菜甲醇提取物,60%甲醇提取物對(duì)枯草桿菌的抑菌圈寬度為2.6mm左右,對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌圈寬度為2.9mm左右。兩種大型海藻不同濃度的甲醇提取液對(duì)大腸桿菌、黑曲霉及啤酒酵母均無(wú)抑菌作用。2.3乙醇提取物對(duì)枯草芽孢桿菌和細(xì)菌的抑制作用海白菜乙醇提取物的抑菌活性結(jié)果見表3所示,海白菜不同濃度的乙醇提取物對(duì)枯草芽孢桿菌及金黃色葡萄球菌均有抑制作用,其中70%乙醇提取物對(duì)枯草芽孢桿菌的抑制效果最好,為3.1mm左右,60%的乙醇提取物對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制效果較好,為2.5mm左右。試驗(yàn)結(jié)果表明海白菜不同濃度的乙醇提取物對(duì)大腸桿菌、黑曲霉和啤酒酵母均無(wú)抑菌作用,而裙帶菜的乙醇提取物對(duì)上述五種試驗(yàn)菌均無(wú)抑菌作用。2.4細(xì)菌抗菌活性對(duì)海白菜60%甲醇提取物進(jìn)行酸堿處理,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4,由表4可知,提取液的pH為7時(shí)對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制效果較好,達(dá)到3.5mm左右,pH低于7或高于7時(shí),抗菌活性均稍有降低。對(duì)枯草芽孢桿菌的抑制效果與金黃色葡萄球菌類似,但最大抑菌效果的pH為6,達(dá)到2.8mm左右,可見海白菜60%甲醇提取物在pH6~7即中性附近其抑菌活性高。2.5加熱處理對(duì)抗菌活性的影響2.5.1加熱和處理60%甲醇提取的蔬菜，以達(dá)到抗菌效果2.5.2桿菌抑菌圈寬度海白菜60%甲醇提取物經(jīng)90℃,110℃,120℃分別處理30min后,對(duì)兩種菌的抑制效果均有較小的下降,但是經(jīng)100℃處理后抑菌效果有所加強(qiáng),對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌圈寬度為3.0mm~3.5mm左右,對(duì)枯草芽孢桿菌的抑菌圈寬度達(dá)到了3.8mm~4.5mm左右。由表4,表5及表6的結(jié)果可見,海白菜60%甲醇提取物的抑菌活性對(duì)pH不敏感,海白菜及裙帶菜60%甲醇提取物經(jīng)加熱處理后抑菌活性變化較大,特別是100℃處理后抑菌活性增強(qiáng)較大,可見將海白菜及裙帶菜60%甲醇提取物用于食品防腐完全可以在滅菌的情況下滿足其抑菌的效果,由于兩種提取物的僅僅抑制革蘭氏陽(yáng)性菌,如果與其他天然抑菌物質(zhì)配合使用,作為食品防腐劑其效果更佳。(2)最佳抑菌圈的測(cè)定由表5的結(jié)果可見,裙帶菜60%甲醇提取物經(jīng)90℃,100℃,110℃,120℃分