天山花楸平喘膠囊鎮(zhèn)咳祛痰抗炎平喘及免疫調(diào)節(jié)作用研究

天山花楸平喘膠囊鎮(zhèn)咳祛痰抗炎平喘及免疫調(diào)節(jié)作用研究

又名刺槐，是薔薇科花科花科花科花科花科花科的干燥枝條。它是新疆特有的流行藥物，具有水果、細(xì)膩的樹(shù)枝和莖的皮。其果實(shí)味苦甘、性平,嫩枝葉及莖皮味苦、無(wú)毒,具有清熱利肺、補(bǔ)脾生津之功效。天山花楸對(duì)哮喘、咳嗽有一定的療效,用于治療慢性支氣管炎、肺結(jié)核、水腫等癥,按照中藥5類新藥要求,制備了天山花楸平喘膠囊。本研究對(duì)天山花楸平喘膠囊的止咳、祛痰、抗炎、平喘及免疫作用進(jìn)行了考察。1材料表面1.1膠囊、培養(yǎng)基和試劑天山花楸,于2011年10月中旬購(gòu)自新疆呼圖壁林場(chǎng),秋季葉尚綠時(shí)采收,即時(shí)干燥,經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)教研室帕麗達(dá)教授鑒定為天山花楸(SorbustianschanicaRuper.)干燥嫩枝葉;課題組按中藥5類新藥要求由新疆國(guó)藥制藥廠制得天山花楸平喘膠囊,批號(hào)20121029。地塞米松磷酸鈉注射液(湖北天藥藥業(yè)股份有限公司,批號(hào)42020019),氯化銨(北京中新制藥廠,批號(hào)120901),苯酚紅(天津市福晨化學(xué)試劑廠,批號(hào)20110410),碳酸氫鈉(分析純,天津市富精化工有限公司,批號(hào)20070803),磷酸組織胺(上海三愛(ài)思試劑有限公司,批號(hào)20060903),氯化乙酰膽堿(上海三思試劑有限公司,批號(hào)030527),生理鹽水(西安京西雙鶴有限公司,批號(hào)100830481)。急支糖漿[廣州星群(藥業(yè))股份有限公司,批號(hào)EH10028],印度墨汁(England使用前用生理鹽水稀釋5倍,超聲波處理后離心以棄去沉淀物)。綿羊紅細(xì)胞(SRBC,批號(hào)20121123)。蛋清(市場(chǎng)上購(gòu)買新鮮雞蛋,去殼及去蛋黃)而得。1.2儀器、實(shí)驗(yàn)和儀器402型-氣體壓縮機(jī)(上海合力醫(yī)療器械廠),TD5A-WS-離心機(jī)(長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司),s22PC-可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海棱光技術(shù)有限公司)AL204-分析天平、JB/T5347-1991-電子天平[梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司]。1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及許可證昆明種小鼠18~22g,雌雄兼用,SD大鼠160~200g,雌雄兼用,均由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(新)2011-0004,動(dòng)物使用許可證號(hào)SYXK(新)2011-0004。2方法2.1大鼠氨基引流咳嗽實(shí)驗(yàn)2.2氯化銨標(biāo)準(zhǔn)使用液采用氣管段酚紅排泄法。小鼠50只,體重18~22g,按體重與性別均勻分成5組:空白組(等容積0.9%氯化鈉溶液),天山花楸平喘膠囊高、中、低劑量組(劑量同2.1),陽(yáng)性對(duì)照組氯化銨,1g·kg-1),均ig。1次/d,連續(xù)7d。末次藥后1h,5g·L-1酚紅溶液ip0.5mL/只,30min后斷頸處死動(dòng)物,剝離氣管周圍組織,剪下自甲狀軟骨至氣管分支處一段氣管,放入盛有2mL生理鹽水的試管中,用4%碳酸氫鈉2mL沖洗剪下的氣管3次,再加入1mol·L-1的氫氧化鈉1滴,使成堿性,加4%碳酸氫鈉至5mL,離心取上清液,用分光光度計(jì)于546nm處測(cè)吸光度(A)。2.3單次給藥對(duì)大鼠感冒的影響采用組胺引喘法。大鼠50只,體重180~220g,按體重與性別均勻分成5組,空白組(等容積0.9%氯化鈉溶液),天山花楸膠囊高,中,低劑量組(劑量同2.1),陽(yáng)性對(duì)照組(氨茶堿1g·kg-1),均ig,1次/d,連續(xù)7d,末次藥后1h,每次雌雄各1只大鼠放入氣霧箱用超聲霧化器持續(xù)噴入8g·L-1乙酰甲膽堿和0.1%磷酸組織胺(等體積),觀察大鼠的哮喘反應(yīng),記錄大鼠的哮喘潛伏期(即從噴霧開(kāi)始到哮喘發(fā)作,呼吸困難,直至抽搐跌倒的時(shí)間),超過(guò)180s以180s計(jì)。2.4地塞米松致炎前右后足正常厚度ld50采用蛋清足腫脹法。小鼠50只,雌雄各半,體重18~22g,隨機(jī)分為5組,空白組(等容積0.9%氯化鈉溶液),天山花楸平喘膠囊高、中、低3個(gè)劑量(同2.1)組、陽(yáng)性對(duì)照組(地塞米松,1.4×10-3g·kg-1,相當(dāng)人7倍用量),所有藥物均用蒸餾水混懸,按20mL·kg-1,ig,1次/d,連續(xù)7d。末次給藥前,以螺旋測(cè)微儀測(cè)量右后足跖厚度,作為致炎前右后足正常厚度。末次給藥后1h,小鼠右后足跖sc注射蛋清0.1mL/只致炎,測(cè)量注入致炎后1,2,3h后右足跖厚度,并減去致炎前小鼠右后足正常厚度為各鼠在不同時(shí)點(diǎn)的足腫脹度。2.5免疫試驗(yàn)2.5.1小鼠肝臟血污的檢測(cè)小鼠60只,體重18~22g,雌雄各半,隨機(jī)分成5組,每組12只?？瞻讓?duì)照組(等容量蒸餾水),陽(yáng)性對(duì)照組(地塞米松,1.4×10-3g·kg-1,相當(dāng)人7倍用量),天山花楸平喘膠囊高、中、低劑量(同2.1)組。1次/d,連續(xù)7d,末次給藥后尾靜脈注射墨汁1mL·kg-1;墨汁一經(jīng)注入,立即計(jì)時(shí)。于注射后2min(t1)和10min(t2)分別用吸管經(jīng)眼內(nèi)毗靜脈取血0.02mL。(吸管在吸取血液前吸吹一下20U·mL-1的肝素溶液以防血液凝固)將血液加入盛有0.1%Na2CO3溶液2mL試管中,搖勻,用721分光光度計(jì)在600nm波長(zhǎng)處測(cè)A。取血后脫頸椎法處死動(dòng)物,取出小鼠肝臟與脾臟,用濾紙吸干臟器表面血污,稱重。計(jì)算廓清指數(shù)(K)和吞噬指數(shù)(α)。2.5.2花楸平滑膠囊昆明種小鼠60只,體重18~22g,隨機(jī)分成5組,每組12只?？瞻讓?duì)照組(等容量蒸餾水),陽(yáng)性對(duì)照組(地塞米松,1.4×10-3g·kg-1,相當(dāng)人7倍用量),天山花楸平喘膠囊高、中、低劑量(同2.1)組。先ig給藥,1次/d,連續(xù)7d,第7天對(duì)小鼠進(jìn)行免疫:將綿羊紅細(xì)胞(SRBC)用生理鹽水洗滌3次后,配成20%SRBC溶液,每鼠0.2mL,ip。然后繼續(xù)ig給藥至免疫第5天,小鼠眼眶后靜脈叢取血,離心得血清,取20μL血清用生理鹽水稀釋500倍,取1mL,再加入20%SRBC溶液、補(bǔ)體(1∶10稀釋的混合豚鼠血清)和生理鹽水各0.5mL,于溫箱內(nèi)溫育0.5h后,3000r·min-1離心10min,取上清液于540nm處測(cè)定(A)。2.6統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用ue0af±s表示,組間比較采用方差分析,以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3結(jié)果3.1急支糖漿和天麻花楸平滑膠囊對(duì)小鼠感冒的影響與空白對(duì)照組相比,天山花楸平喘膠囊3個(gè)劑量組和急支糖漿能顯著延長(zhǎng)小鼠咳嗽潛伏期,明顯減少咳嗽次數(shù)(P<0.05),高劑量組的作用強(qiáng)于急支糖漿組(P<0.05),說(shuō)明天山花楸平喘膠囊對(duì)氨水引起的小鼠咳嗽有一定的止咳作用。見(jiàn)表1。3.2對(duì)小鼠氣管酚紅排泄量的影響酚紅的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.1732X-0.0084,r=0.9995。與空白對(duì)照組比,天山花楸平喘膠囊(4,2,1g·kg-1)氯化鈉組均能顯著增加小鼠氣管酚紅的排泄量,改善率分別為8.4%,17.6%,4.2%和38%(P<0.01),表明天山花楸平喘膠囊能增強(qiáng)小鼠的氣管酚紅排泄量,說(shuō)明有祛痰作用。見(jiàn)表2。3.3大鼠引哮喘藥的致突變性測(cè)定與空白對(duì)照組相比,天山花楸平喘膠囊3個(gè)劑量組能顯著延長(zhǎng)大鼠的引喘潛伏期(P<0.01),有一定的平喘作用。其作用強(qiáng)度不如氨茶堿(P<0.01)。見(jiàn)表3。3.4大鼠腳腫脹實(shí)驗(yàn)3.5廓清指數(shù)和咀嚼指數(shù)與對(duì)照組比較,天山花楸平喘膠囊各劑量組可明顯提高小鼠廓清指數(shù)和吞噬指數(shù)(P<0.05)。天山花楸平喘膠囊在此劑量下能提高小鼠的非特異性免疫功能,見(jiàn)表5。3.6對(duì)小鼠血清溶血素的影響與正常對(duì)照組相比,4,2,1g·kg-1天山花楸平喘膠囊組能顯著升高小鼠的血清溶血素(P<0.01),低劑量組和地塞米松組與正常對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異。提示天山花楸平喘膠囊能提高小鼠的體液免疫功能。見(jiàn)表6。4治痰、上向腦膠山東山子從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出,天山花楸平喘膠囊可延長(zhǎng)由濃氨水誘導(dǎo)的小鼠咳嗽的潛伏期,明顯增加小鼠排痰量,明顯延長(zhǎng)磷酸組胺所致豚鼠哮喘的潛伏期,此外,天山花楸平喘膠囊還具有明顯抑制小鼠足跖腫脹度,使小鼠的碳廓清指數(shù)、吞噬指數(shù)明顯升高以及升高小鼠血清溶血素的生成的作用,證明天山花楸平喘膠囊有很好的鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘、抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用。從中醫(yī)辨證來(lái)講,痰、咳、喘三者關(guān)系密切,互為因果,在治療時(shí)化痰藥與止咳平喘藥常配伍應(yīng)用。一般咳嗽有痰者為多,痰多又容易引起咳嗽,而祛痰藥多能止咳?？人耘c喘關(guān)系密切,且止咳可以平喘,平喘有利于排痰止咳。天山花楸平喘膠囊以新疆特有的民族藥材天山花楸為原料藥,經(jīng)提取純化制備而成,通過(guò)以上實(shí)驗(yàn),證明其具有鎮(zhèn)咳、祛痰、抗炎、平喘以及免疫調(diào)節(jié)作用,有望開(kāi)發(fā)成為一種新的平喘藥物。采用濃氨水噴霧法。取小鼠50只,雌雄各半,體重18~22g,按性別、體重均勻分成5組,每組10只?？瞻捉M(等容積0.9%氯化鈉溶液,陽(yáng)性對(duì)照組(急支糖漿,2.6mL·kg-1,相當(dāng)于臨床日用量的2倍);天山花楸平喘膠囊內(nèi)容物高、中、低劑量組(4,2,1g