峰山海泥浸液體外殺菌蠕形螨的實驗研究

峰山海泥浸液體外殺菌蠕形螨的實驗研究

蠕蟲是一種高度感染率的寄生蟲。有兩種寄生蟲可以寄生蟲在人體，尤其是血脂蟲虱（dap）和毛發(fā)蟲虱（df）。蠕形螨可阻塞毛囊并可機械性和化學性雙重刺激損害人體皮脂和毛囊腺,引起人體蠕形螨病。感染者局部可有輕微瘙癢感或燒灼刺痛,主要表現(xiàn)為鼻尖和鼻翼兩側皮膚彌漫性潮紅、充血、紅色丘疹、膿皰、結痂和脫屑,可引起痤瘡、酒糟鼻、毛囊炎、臉緣炎和眼瞼炎等一系列皮膚疾患,嚴重地影響患者的容貌。常用于治療蠕形螨病的藥物主要有甲硝唑、伊維菌素、硫磺乳、復合維生素B和中藥制劑等,但效果均不理想。趙亞娥等對二甲基亞砜(DMSO)體外殺螨效果進行研究,結果表明40%為DMSO最低有效濃度,其殺螨能力強于10%和5%的硫磺乳,但DMSO具有極強的吸濕性,不易保存,且高濃度的DMSO對生物細胞有一定的毒性。民間早有用礦物泥治療腳癬和真菌感染等皮膚病的應用實例,且效果較好。研究表明,熱泥可使所敷部位溫度增高,增強血液循環(huán)和淋巴循環(huán),使局部皮膚組織代謝能力加強,汗腺分泌增加,末梢血管擴張,促進泥中元素、有機物和藥物吸收等作用,泥對組織可產生壓迫、松弛和疏通氣血作用,并可去除皮膚表面的病理脫皮、生理陳皮,有利于新皮的生成。有些泥中含有磁場元素,其磁作用可改變某些生物特性,調節(jié)生物磁場,秀山海泥富含豐富的抗氧化活性營養(yǎng)成分。但有關礦物泥殺螨作用的研究,迄今鮮有報道。本文對秀山海泥浸液體外殺螨進行了實驗觀察,并與臨床常用的中藥類殺螨制劑10%硫磺乳進行對比,以期為秀山海泥的應用提供理論依據。材料和方法1取藝術昆蟲來源1.1主要試劑和儀器秀山海泥采自浙江省岱山縣秀山灘涂。10%硫磺乳(批號為20100237)購自湖南省常德武陵制藥廠。數(shù)碼顯微鏡(MoticDMB5型)為廈門麥克奧迪實業(yè)集團有限公司產品;pH計(DELTA320型)為瑞士梅特勒-托利多公司產品。1.2螨蟲來源隨機抽取浙江海洋學院在校學生為取螨對象,刮片式取螨器由有機玻璃制成,為6cm×3cm×0.5cm,表面打磨光滑,取螨端厚度稍薄但不銳利。將取螨器與額頭處皮膚成70°左右,由左向右刮取8cm,用潔凈的牙簽從取螨器上將分泌物刮到載玻片上,加1～2滴甘油,鏡下分離兩種人體蠕形螨并計數(shù),每份標本含運動活潑的蠕形螨30條以上,有15條以上而不足30條者以兩次合計結果為1次合格標本進行統(tǒng)計。2體外殺病效果測定2.1海泥浸液的制備從秀山灘涂的起始位置,按高、中和低潮位各取1點,合并3點的泥樣樣品。將海泥加蒸餾水攪拌,過篩(800目),離心后收集濕泥,干燥粉碎過篩(800目),得海泥干粉(含水量<5%)。取200g海泥干粉,加400ml蒸餾水,攪拌均勻,靜置過夜,取上清150ml,經65℃旋轉蒸發(fā)儀濃縮至15ml,制得濃度為5kg/L的秀山海泥濃縮浸液。用蒸餾水將海泥濃縮浸液稀釋為2.5、2.0、1.5、1和0.5kg/L等5個濃度,備用。于20℃,70%濕度下測定秀山海泥稀釋液及原液的pH值,每個樣品平行測定3次。2.2體外殺滅實驗實驗組分別加上述5個濃度的秀山海泥稀釋液200μl于涂有兩種蠕形螨的載玻片上,均勻鋪開,保證與蟲體充分接觸;陽性對照組加10%硫磺乳乳濁液200μl,空白對照組加200μl生理鹽水;各組實驗需同時進行。分別于5min、10min、20min、40min、1h、2h、4h、8h、12h和24h觀察記錄蟲體死亡情況,并計算秀山海泥浸液體外殺螨率,鏡下觀察蠕形螨的活動度和形態(tài)。2.3蟲體死亡與活動度的判斷(-):蟲體螯肢或足爪持續(xù)1min不動者,初定為死亡;間隔30min后繼續(xù)觀察,仍不動者為死亡;(+):活動遲緩,1～2只足爪/螯肢活動,且1min活動1～2次;(++):活動明顯,3～5只足爪/螯肢活動,且1min活動3～5次;(+++):活動活躍,6只以上足爪/螯肢活動,且1min活動6次以上?；顒蛹觿〕掷m(xù)時間從加藥開始計時,至蟲體恢復加藥前狀態(tài)為止。由于蠕形螨活動加劇持續(xù)時間的差異較大,為避免極大值和極小值的影響,本研究選取可避免極端數(shù)據的中位數(shù)來客觀的反映蠕形螨的活動加劇持續(xù)時間。2.4統(tǒng)計學分析采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據分析,組間分析采用配對樣本t檢驗,半致死濃度(LC50)值由Probit模塊進行計算。結果1海泥浸液滲出物測定1.1皮脂蠕形螨鏡下觀察,加入秀山海泥浸液前,皮脂蠕形螨體壁光滑,活動度多為+～++。加入浸液后可見蟲體皺縮變形、扭動。足體與末體相交處套疊、蟲體變短、皮紋清楚。加入濃度為2.5kg/L海泥浸液時,蟲體四對足爪運動加快,活動度呈+/++～+++的蟲體達79.4%(27/34),活動加劇持續(xù)時間為15min,之后部分蟲體體壁出現(xiàn)滲出物,尤以足體處滲出明顯,隨著秀山海泥浸液作用時間的延長,滲出物逐漸增多,蟲體活動度變化減弱,最終死亡,說明2.5kg/L的海泥浸液能在短時間內迅速引起蟲體的強烈變化并致其死亡;當海泥浸液濃度遞減至1.0kg/L時,活動度為+/++～+++占68.9%(26/38),但活動加劇持續(xù)時間則延長至100min,之后蟲體活動開始漸漸減弱,最終死亡;當海泥浸液濃度低至0.5kg/L時,活動度呈+/++～+++的蟲體僅為32.5%(13/40),活動度并沒有明顯的上升,說明0.5kg/L的海泥浸液對皮脂蠕形螨的活動度和形態(tài)并沒有明顯影響(表1、圖1)。2體外殺病效果2.1皮脂蠕形螨經測定不同濃度海泥浸液的pH值符合人體皮膚的最佳pH值范圍(4.5～6.6)。海泥浸液濃度為2.5kg/L時,2h即可殺死全部螨蟲,與空白、陽性對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),隨著濃度的降低,皮脂蠕形螨死亡時間逐漸延長,當濃度降至2.0kg/L和1.5kg/L時,皮脂蠕形螨全部死亡的時間分別延長至4h和8h,仍優(yōu)于空白與陽性對照組(P<0.05)。濃度降至1.0kg/L時,8h殺螨率僅為47.4%,但仍高于空白對照組和陽性對照組(P<0.05)。當濃度低至0.5kg/L時,殺螨率明顯降低,與空白對照組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),低于陽性對照組(P<0.05)。由此可見,1.0kg/L的秀山海泥濃縮浸液是體外殺滅皮脂蠕形螨的最低有效濃度。LC50(1h)=1913mg/L。秀山海泥浸液對皮脂蠕形螨的體外殺滅作用濃度和時間呈正比(表3)。2.2毛囊蠕形螨秀山海泥浸液濃度為2.5kg/L時,2h即可殺死全部螨蟲,與空白、陽性對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),當濃度下降至2.0kg/L、1.5kg/L時,毛囊蠕形螨全部死亡時間均延長至8h,相同時間內殺滅效果優(yōu)于空白、陽性對照組(P<0.05),當濃度稀釋至1.0kg/L時,24h殺螨率下降至38.5%,但仍優(yōu)于空白對照組(P<0.05),與陽性對照組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。濃度稀釋至0.5kg/L時,24h殺螨率與空白對照組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),低于陽性對照組(P<0.05)。說明1.0kg/L的秀山海泥濃縮浸液是體外殺滅皮脂蠕形螨的最低有效濃度。LC50(1h)=2131mg/L,秀山海泥浸液對皮脂蠕形螨的體外殺滅作用濃度和時間呈正比(表4)。海泥浸液的殺初步結果人體蠕形螨呈世界性分布,對人體皮膚的危害不容忽視。尤其它所引發(fā)的皮膚病,可破壞面部容貌。國外學者報道人群感染率為27%～100%,國內人群感染率一般在20%以上,最高可達97.8%,目前臨床上抗蠕形螨治療尚缺乏安全、高效的理想藥物。傳統(tǒng)殺螨劑,如臨床常用的10%硫磺乳,雖除螨效果較好,但長期使用硫磺制劑對皮膚刺激性較大,會引起皮膚干燥脫屑等不良反應。國內學者也嘗試研制對人體皮膚刺激較小的中藥類除螨劑,如趙亞娥等報道了樟腦精油可作為天然高效的殺螨藥物,其殺螨機制推測主要作用于螨蟲的神經肌肉系統(tǒng),引起蟲體劇烈的痙攣收縮后松弛死亡。李朝品研究了百特藥液等對蠕形螨的殺滅作用,顯示此類中藥抑制劑對蠕形螨具有一定的抑殺效果。這些中藥抑制劑雖然具有一定的殺螨作用,但由于中藥材的篩選,有效成分的提取等方面存在一定的困難,未能有效推廣利用。秀山海泥浸液的殺螨率與海泥浸液濃度和蟲種有關,濃度為2.5kg/L時,皮脂蠕形螨和毛囊蠕形螨全部死亡時間均為2h。濃度降至2.0kg/L時,皮脂蠕形螨的全部死亡時間為4h,而毛囊蠕形螨則延長至8h。當濃度降至1.0kg/L時,8h內對皮脂蠕形螨與毛囊蠕形螨的殺滅率分別為47.4%和15.4%,更低的濃度則無明顯殺滅效果?？梢娦闵胶Ｄ嘟簩ζぶ湫悟臍缱饔寐詮娪诿胰湫悟?。海泥作為一種新興的美容保健產品,含有豐富的礦物質、膠體成分、海洋特有的微生物及維生素、氨基酸和抗菌素等,具有獨特的美容、保健和治療功效。在中國連池和以色列死海等地區(qū),用來美化肌膚,理療皮膚而開發(fā)制成的礦物質泥產品,受到人們的歡迎,但目前多用于護膚產品,用于殺螨的較少。秀山海泥浸液與傳統(tǒng)的西藥殺螨劑相比,其pH值在人體皮膚的最佳pH值范圍,不會破壞皮膚表面的弱酸環(huán)境,從而避免對皮膚造成損害,與中藥類除螨劑相比,又具有資源量大,工藝簡便的特性,為未來的臨床應用提供了基礎。目前有關殺螨作用機理方面的研究國內外報道很少,梁沛等報道了殺螨劑主要作用于螨類的神經系統(tǒng),刺激神經膜上的離子通道,抑制膽堿激性和單胺激性神經系統(tǒng)的酶;或作用于呼吸系統(tǒng),抑制三羧酸循環(huán)過程中的酶,或解偶聯(lián)氧化磷酸化,阻斷電子傳遞;或阻止幾丁質和蛋白質合成;或影響螨的生長及生殖。也可能抑制螨的正常代謝,干擾RNA的合成,因此下一步將對秀山海泥的具體殺螨機制進行研究。1.2毛囊蠕形螨加入秀山海泥浸液后,毛囊蠕形螨的四對足和尾部開始呈現(xiàn)頻率較快的伸縮運動,四對足不停的滑動,身體左右擺動,運動一定距離(3～6mm)后出現(xiàn)皺縮變形,足體中央消化管開始收縮,隨著秀山海泥浸液作用時間的延長,部分蟲體最后解體。在濃度為2.5kg/L的浸液中,蟲體變化較皮脂蠕形螨有所減弱,25min左右才活動加劇,隨著作用時間的延長,活動度為+/++～+++的蟲體占65.7%(23/35)。經過20min的活動加劇時間之后,蟲體活動漸漸減弱,變?yōu)槲⑷踝慊顒?