藤黃化學(xué)成分的研究

藤黃化學(xué)成分的研究

黃棕櫚是黃棕櫚科的一種變種樹脂。從切割后流出的樹枝。它來自東南亞，也可以來自中國的一些地區(qū)，如云南、廣東和廣東。在中醫(yī)臨床實(shí)踐中,藤黃主要用于治療癰疽腫毒、潰瘍、濕瘡、腫瘤、頑癬等病癥.現(xiàn)代藥理研究表明,藤黃對多種腫瘤細(xì)胞有抑制作用,且藤黃及藤黃酸用于治療腫瘤具有療效顯著,活性成分性質(zhì)穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn),為廣大科學(xué)工作者所重視.在我國,藤黃酸及注射用總藤黃酸均已作為治療腫瘤的新藥獲得SFDA的批準(zhǔn)進(jìn)入臨床研究.因此,對中藥藤黃化學(xué)成分深入詳盡的研究,不僅具有一定的學(xué)術(shù)價(jià)值,而且對于新藥的質(zhì)量控制及其安全性評價(jià)均有重要的參考價(jià)值.本文利用柱層析及制備型HPLC等方法對藤黃的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的研究,從中分離得到15個(gè)化合物,其結(jié)構(gòu)用現(xiàn)代波譜法分別鑒定為:2α-羥基-3β-乙酰氧基白樺酯酸(1),10α-羥基表藤黃酸(2),藤黃酸(3),異藤黃酸(4),gambogin(5),gambogoicacidB(6),desoxymorellin(7),isomorellin(8),gambogenicacid(9),isogambogenin(10),gambogellicacid(11)desoxygambogenin(12),morellicacid(13),isomorellicacid(14),30-hydroxygambogicacid(15),其中化合物1和2為新化合物.化合物1~15結(jié)構(gòu)見圖1.1化合物12,33,33.化合物1,13CNMR和DEPT譜顯示該化合物有32個(gè)碳信號:7個(gè)甲基,10個(gè)亞甲基,7個(gè)次甲基及8個(gè)季碳.紅外圖譜給出兩個(gè)羰基信號(1726和1703cm-1).1HNMR圖譜顯示化合物1含五個(gè)角甲基δH0.73(s,3H),0.74(s,3H),0.82(s,3H),0.84(s,3H),0.93(s,3H),一個(gè)乙?；腍2.00(s,3H),兩個(gè)次甲氧基δH3.58~3.57(m,1H),4.34(d,J=10.0Hz,1H)和10個(gè)亞甲基;δH4.66(d,J=2.0Hz,1H),4.54(d,J=2.0Hz,1H)和1.63(s,3H)的質(zhì)子信號顯示化合物1含一個(gè)2-烯丙基.13CNMR中的兩個(gè)sp2雜化的碳信號δ150.98和δ110.33(DEPT譜顯示δ110.33為仲碳信號,δ150.98為季碳信號)也支持分子中存在2-烯丙基.該化合物的1HNMR譜,尤其是2-烯丙基的存在提示化合物1可能是△20,29羽扇豆烯型三萜酸衍生物或者△22,29何帕烯型三萜酸衍生物.通過對這兩類化合物的13CNMR圖譜進(jìn)一步比較,我們認(rèn)為化合物1可能是△20,29羽扇豆烯型三萜酸衍生物.我們發(fā)現(xiàn)除了額外的乙酰基信號,化合物1的1HNMR,13CNMR與從枳椇子中分得的2α,3β-二羥基白樺酯酸非常相似.根據(jù)化合物1的1H-1HCOSY,TOCSYHSQC和HMBC數(shù)據(jù)將其分子中各碳?xì)湫盘柕臍w屬和C-H遠(yuǎn)程偶合情況進(jìn)行了歸納(表1).在ROESY譜中H-5不與δH0.82(s,3H,H-25)相關(guān)說明A,B環(huán)為反式連接,25位甲基為β構(gòu)型.H-9與H-5相關(guān),不與δH0.84(s,3H,H-26)相關(guān),說明B,C環(huán)為反式連接,26位甲基為β構(gòu)型.2.24~2.17(m,1H,H-13)與δH0.84(s,3H,H-26)相關(guān),而與δH0.93(s,3H,H-27)無相關(guān),說明C,D環(huán)也為反式相連,27位甲基為α構(gòu)型1.50(t,J=11.4Hz,1H,H-18)與δH0.93(s,3H,H-27)相關(guān),而與2.93~2.91(m,1H,H-19)無相關(guān),說明19位H為β構(gòu)型.H-19的化學(xué)位移位于較低場2.93~2.91(m1H),推測是由于28-CO2H的影響,因此推斷28-CO2H為β構(gòu)型,則D,E環(huán)也為反式相連.即A,B環(huán),B,C環(huán),C,D環(huán),D,E環(huán)皆為反式連接,由此可以確定化合物1的基本骨架為△20,29羽扇豆烯型三萜酸.δH3.58~3.57(m,1H,H-2)在ROESY譜中與δH0.82(s,3H,H-25)相關(guān),且與δH0.74(s,3H,H-24)相關(guān),說明2位羥基為α構(gòu)型.δH4.34(d,J=10.0Hz,1H,H-3)在ROESY譜中與δH0.73(s,3H,H-23)相關(guān),且與H-5相關(guān),說明3位乙酰氧基為β構(gòu)型(圖2).質(zhì)譜中的主要碎片離子m/z437,248,219和189也支持化合物1的結(jié)構(gòu)歸屬(圖3).化合物1被確定為2α-羥基-3β-乙酰氧基白樺酯酸[2α-hydroxy-3β-acetoxy-lup-20(29)-en-28-oicacid],經(jīng)文獻(xiàn)檢索為新化合物.化合物2,黃色粉末,m.p.91~93℃,ESI-MS給出準(zhǔn)分子離子峰m/z647.5[M+H]+;HR-ESI-MS顯示分子離子峰m/z669.3034[M+Na]+(計(jì)算值669.3040),分子式C38H46O9.化合物2與化合物epigambogoicacidB的1HNMR,13CNMR非常相近.1HNMR圖譜顯示,與epigambogoicacidB相比,化合物2的H-104.43(d,J=4.0Hz,1H)移至低場δH4.80(d,J=3.6Hz,1H),乙氧基信號[3.61~3.53(m,1H),3.48~3.41(m,1H),1.12(t,J=7.0Hz,3H)]消失.13CNMR圖譜顯示C-10(δC72.24)移至高場δC65.84,C-9(δC48.63)移至低場δC50.32,乙氧基信號(63.86,15.24)消失.提示化合物2可能是epigambogicacid的9,10位雙鍵被氧化的產(chǎn)物.根據(jù)1H-1HCOSY,TOCSY,HSQC和HMBC數(shù)據(jù)(圖4),確定了該結(jié)構(gòu)各碳?xì)湫盘柕臍w屬.ROESY中H-9與H-10相關(guān),H-10與H-21β相關(guān),H-21β與H-22相關(guān),說明化合物2的9位氫為β構(gòu)型,10位氫為β構(gòu)型,則10位OH為α構(gòu)型.化合物2被確定為10α-羥基表藤黃酸[10α-hydroxyepigambogicacid],經(jīng)文獻(xiàn)檢索為新化合物.2實(shí)驗(yàn)部分2.1紅外光譜測定熔點(diǎn)由B-540Buchi顯微熔點(diǎn)儀測定(溫度未校正);核磁共振由VarianINOVA400核磁共振儀測定,內(nèi)標(biāo)為TMS;ESI-MS由Varian1200L,Agilent11001946D液質(zhì)聯(lián)用儀測定;HR-EI-MS用MAT-95高分辨磁式質(zhì)譜儀測定;紅外光譜由ShimadzuFTIR-8400S紅外分光光度計(jì)(KBr)測定;紫外光譜由ShimadzuUV-Vis2201紫外分光光度計(jì)測定;所用試劑均為分析純或色譜純.試驗(yàn)材料藤黃于2006年3月購自大興安嶺林格貝有機(jī)食品有限公司,經(jīng)上海中醫(yī)藥大學(xué)李西林教授鑒定為藤黃(GarciniahanburyiHookf.),標(biāo)本(20060302)保存于上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院.2.2化合物結(jié)構(gòu)分析藤黃干燥樹脂828g,粉碎后用無水乙醇冷浸提取(4.5L×3)過濾,合并濾液并減壓回收溶劑,得稠浸膏(475g).以硅膠柱(200~300目)梯度洗脫(溶劑系統(tǒng):石油醚-丙酮、丙酮、甲醇)分離,根據(jù)餾分薄層層析情況粗分成八個(gè)部分(F01-F08).其中F02(33.7g)經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析和制備HPLC得到化合物2(10mg),3(60mg),4(20mg),5(20mg),6(20mg),7(15mg);F04(25g)經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析和制備HPLC分離得到化合物1(70mg),8(15mg),9(10mg),10(10mg),12(40mg);F07(23.61g)經(jīng)分離得到化合物11(8mg),13(80mg),14(12mg),15(10mg).2.3chci3chci3化合物1:白色針狀結(jié)晶,m.p.199~201℃,[α]D20-4.5(c2.0,THF);1HNMR和13CNMR見表1.IRv:3508,2972,2941,2870,1726,1703,1637,1452,13771369,1259,1186,1061,1047,1032,885cm-1;EI-MSm/z(%):514([M]+,16),468(30),454(28),436(59),408(46)248(64),205(63),189(100);HR-EI-MS顯示準(zhǔn)分子離子峰m/z514.3644[M]+(C32H50O5,計(jì)算值為514.7401).經(jīng)過分析1H-1HCOSY,TOCSY,HSQC,HMBC,ROESY譜,確定化合物1為2α-羥基-3β-乙酰氧基白樺酯酸.化合物2:黃色粉末,m.p.91~93℃,[α]D20-60.2(c1.0,CHCI3),λmax:290,358nm;1HNMR(CDCl3,400MHz)δ:11.87(s,1H,6-OH),6.64(d,J=10.0Hz,1H,H-4),6.61~6.64(m,1H,H-27),5.42(d,J=10.0Hz,1H,H-3),5.10~5.07(m,1H,H-37),5.04~4.97(m,1H,H-32),4.80(d,J=3.6Hz,1H,H-10),3.28~3.12(m,5H,H-31,H-26,H-9),2.66(d,J=4.4Hz,1H,H-11),2.43(d,J=8.4Hz,1H,H-22),2.08~2.01(m,2H,H-36),1.94(s3H,H-30),1.89~1.91(m,1H,H-21),1.80~1.76(m,1H,H-20),1.72(s,3H,H-34),1.65(s,3H,H-40),1.62(s,3H,H-35),1.60~1.64(m,1H,H-21),1.56(s,3H,H-39),1.38~1.41(m,1H,H-21),1.36(s,3H,H-19),1.34(s,3HH-25),1.12(s,3H,H-24);13CNMR(CDCl3,100MHz)δ:209.79(C-12),194.27(C-8),172.92(C-29),161.64(C-18),156.66(C-6),155.97(C-16),140.33(C-27)132.12(C-38),131.36(C-33),127.06(C-28),125.2(C-3),124.02(C-37),122.82(C-32),116.13(C-4),109.0(C-17),103.01(C-5),101.99(C-7),88.60(C-14),86.7(C-23),82.53(C-13),81.30(C-2),65.84(C-10),50.3(C-9),46.85(C-11),43.08(C-22),42.05C-20),29.9(C-25),28.20(C-26),27.42(C-19,C-24),25.98(C-40)25