核移植技術(shù)與動(dòng)物克隆

12.4動(dòng)物克隆技術(shù)蛙:1962年，未成功

鯉魚(yú):1963年，中國(guó)科學(xué)家童第周早在1963年就通過(guò)將一只雄性鯉魚(yú)DNA插入來(lái)自雌性鯉魚(yú)的卵成功克隆了一只雌性鯉魚(yú)，比多利羊的克隆早了33年。但由于相關(guān)論文是發(fā)表在一本中文科學(xué)期刊，并沒(méi)有翻譯成英文，所以并不為國(guó)際上所知曉?！苍醋裕篜BS)

綿羊:1996年，多利〔Dolly〕

獼猴:2000年1月，Tetra，雌性

豬:2000年3月，5只蘇格蘭PPL小豬；8月，Xena，雌性

牛:2001年，Alpha和Beta，雄性

貓:2001年底，CopyCat〔CC〕，雌性

小鼠:2002年

兔:2003年3-4月分別在法國(guó)和朝鮮獨(dú)立地實(shí)現(xiàn)；

騾:2003年5月，愛(ài)達(dá)荷Gem，雄性；6月，猶他先鋒，雄性

鹿:2003年，Dewey

馬:2003年，Prometea，雌性

狗:2005年，韓國(guó)首爾大學(xué)實(shí)驗(yàn)隊(duì)，史納比

1早期動(dòng)物克隆方法是采用胚胎分割，即用顯微術(shù)將未著床的早期胚胎一分為二、一分為四或更屢次地分割，然后分別移植給受體，妊娠產(chǎn)生多個(gè)遺傳性狀相同的后代的克隆方法，由此發(fā)育成的動(dòng)物個(gè)體，屬最簡(jiǎn)單的人工動(dòng)物克隆方式。隨著對(duì)胚胎分割局限性認(rèn)識(shí)及克隆技術(shù)的開(kāi)展，人們開(kāi)始研究核移植技術(shù)并取得成功，產(chǎn)生克隆動(dòng)物的效率比分割技術(shù)大大提高，也就根本上替代了利用胚胎分割生產(chǎn)克隆動(dòng)物的研究和開(kāi)發(fā)。12.4.1動(dòng)物克隆技術(shù)的原理和方法212.4.1.1胚胎分割的原理大多數(shù)哺乳動(dòng)物，早期胚胎在不同程度上具有調(diào)節(jié)發(fā)育的能力，即去掉早期胚胎的一半，剩余局部可以調(diào)整其發(fā)育方向，仍可發(fā)育為一個(gè)完整的胚胎。反之，假設(shè)把兩個(gè)早期胚胎融合在一起，它們不是發(fā)育為兩個(gè)連在一起的胚胎，而是在細(xì)胞間重新調(diào)整，仍發(fā)育為一個(gè)胚胎，即大多數(shù)哺乳動(dòng)物的胚胎發(fā)育是調(diào)整發(fā)育。而且在早期胚胎的發(fā)育過(guò)程中，細(xì)胞分化的調(diào)整幅度很大，但隨著發(fā)育的向前邁進(jìn)，其調(diào)整能力逐漸減弱，細(xì)胞的組織發(fā)育方向變得愈來(lái)愈固定，直至調(diào)整能力完全喪失。3分割胚胎發(fā)育階段與透明帶的關(guān)系胚胎發(fā)育早期，透明帶及其完整是必要的。胚胎分割的次數(shù)：操作液：大多數(shù)研究都用含10%-20%血清PBS液。動(dòng)物種類(lèi)：動(dòng)物種類(lèi)不同，其胚胎的生物學(xué)特性就有所差異，不同動(dòng)物胚胎分割時(shí)的難易程度也不同。移植半胚數(shù)與移植部位：受體妊娠率隨著半胚移植數(shù)的增加而提高。12.4.1.2胚胎分割的本卷須知412.4.1.3細(xì)胞核移植的原理細(xì)胞核移植技術(shù)〔nucleartransfer〕是目前最常用的動(dòng)物克隆技術(shù)，是哺乳動(dòng)物體細(xì)胞克隆的核心技術(shù)。它是利用顯微操作儀將外源細(xì)胞的核移入去核卵母細(xì)胞中，經(jīng)人工活化和體外培養(yǎng)后，再移植入代孕母體內(nèi)，使其發(fā)育為含有與供體細(xì)胞相同的遺傳物質(zhì)的個(gè)體。5哺乳動(dòng)物胚細(xì)胞核移植的原理是早期胚胎細(xì)胞具有全能性,它包含個(gè)體的全套遺傳信息。已分化的體細(xì)胞在特定的條件下經(jīng)過(guò)去分化也具有全能性.已分化細(xì)胞具有全能性的前提條件是這種細(xì)胞在體外進(jìn)行誘導(dǎo)進(jìn)入休眠狀態(tài).612.4.1.4細(xì)胞核移植技術(shù)的類(lèi)型71.胚胎細(xì)胞核移植：將未著床的早期胚胎分散成單個(gè)的細(xì)胞球，在電流的作用下，使單個(gè)細(xì)胞與去除染色體的未受精的成熟的卵母細(xì)胞融合，發(fā)育成胚胎后，移入受體妊娠產(chǎn)仔。原那么上一枚早期胚胎有多少個(gè)細(xì)胞，通過(guò)這種方法，就可以克隆出多少個(gè)個(gè)體。還可以細(xì)胞反復(fù)克隆出更多的胚胎，產(chǎn)生更多的克隆動(dòng)物。8中國(guó)臺(tái)灣省畜產(chǎn)試驗(yàn)所吳明哲研究員利用此法于1991年3月克隆出5頭小豬。他用的就是細(xì)胞反復(fù)克隆法。如今經(jīng)三次產(chǎn)仔實(shí)驗(yàn)，已經(jīng)證明克隆個(gè)體也能繁殖后代。吳教授成功制成了九個(gè)胚胎，再將每一個(gè)胚胎復(fù)制成4個(gè)共36個(gè)，分別移入3頭母豬的卵巢中，懷孕5個(gè)月后產(chǎn)下8頭小豬，死去2公1母，存活1公4母。他們認(rèn)為：在性別的復(fù)制上，雄性難于雌性。1990年5月，西北農(nóng)大畜牧所張涌教授等人經(jīng)過(guò)兩年的時(shí)間，利用細(xì)胞核移植的方法，得到了世界上第一只克隆山羊。有人認(rèn)為山羊胚胎的基因在兩細(xì)胞時(shí)便被激活，由于時(shí)間太早，因而使得核移植比較困難。91995年10月，在西北農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧所竇忠英教授主持下，首批克隆了我國(guó)6只小豬。1996年3月，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧所朱裕鼎研究員主持克隆牛的實(shí)驗(yàn)成功。1996年12月14日和21日，中國(guó)首批克隆小鼠在湖南醫(yī)科大學(xué)誕生。根據(jù)這些實(shí)踐了解到：哺乳動(dòng)物的胚胎細(xì)胞在分裂成8細(xì)胞以前，所有的單卵裂球均為全能細(xì)胞，即每個(gè)卵裂球均能表達(dá)此個(gè)體的全部基因。根據(jù)這一理論，以鼠為模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：1〕從昆明白鼠輸卵管中取成熟卵母細(xì)胞，去其細(xì)胞核；2〕自L5黑鼠2-8個(gè)細(xì)胞的胚胎中取一單卵裂球，將注入去核卵母細(xì)胞；103)將移核后的新胚胎移入昆明白鼠輸卵中，孕育20天；4〕將此種胚胎移入母鼠子宮孕育；12月14日，3只遺傳特性為L(zhǎng)5黑毛小鼠出生。12月21日，又有3只小鼠出生，不過(guò)其可一只呈褐色。這說(shuō)明昆明白鼠卵母細(xì)胞質(zhì)對(duì)黑鼠細(xì)胞核有一定的影響，它為進(jìn)一步研究細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的相互關(guān)系建立了一個(gè)很好的模型，具有重要的生物學(xué)意義。2.胚胎干細(xì)胞核移植 將胚胎或胎兒的原始生殖細(xì)胞經(jīng)過(guò)抑制分化培養(yǎng)后，細(xì)胞數(shù)量增多，單細(xì)胞卻不分化。因此，每個(gè)細(xì)胞仍然具有細(xì)胞全能性而發(fā)育成個(gè)體的能力，這樣的細(xì)胞被稱為胚胎干細(xì)胞系。從理論上講，可以比胚胎核移植產(chǎn)生更多的動(dòng)物個(gè)體。目前僅有小鼠別離克隆出胚胎干細(xì)胞系并成功克隆出成體鼠。而牛、豬、羊、兔只別離胚胎干細(xì)胞系，卻無(wú)成功個(gè)體產(chǎn)生。 113.胎兒成纖維細(xì)胞核移植從妊娠早期胎兒別離出胎兒成纖維(fibroblast)細(xì)胞，采用細(xì)胞核移植方法克隆出胚胎，要移植受體后，妊娠產(chǎn)仔，克隆出動(dòng)物個(gè)體。1996年，英國(guó)報(bào)道選用此法克隆出3只山羊。4.體細(xì)胞核移植將動(dòng)物體細(xì)胞經(jīng)過(guò)抑制培養(yǎng)，使其處于休眠狀態(tài)，利用細(xì)胞核移植技術(shù)將其導(dǎo)入去核卵母細(xì)胞，克隆出胚胎，經(jīng)移植至受體妊娠產(chǎn)仔，克隆出成體動(dòng)物。1996年，英國(guó)的克隆羊〞多莉〞即用此法產(chǎn)生。具體克隆過(guò)程如下：1〕取處于后三分之一妊娠期的6歲母綿羊〔芬蘭多塞特白品種綿羊〕的乳腺細(xì)胞作核供體細(xì)胞，用〞饑餓法〞使其進(jìn)入休眠狀態(tài)而使全部基因具有活性。122〕注射促性腺激素GN促使母羊〔蘇格蘭黑面母綿羊〕排卵，28-33h取其未受精卵快速去核，放入10％FCS〔小牛血清〕、1％FCS和0.5％FCS連續(xù)5天，饑餓使其進(jìn)入G0期作為受體細(xì)胞。3〕乳腺細(xì)胞注射GN34-36h后與無(wú)核卵放入同一培養(yǎng)皿可，在微電流作用下乳腺細(xì)胞融入卵子，形成一個(gè)含有新遺傳物質(zhì)的卵母細(xì)胞。4〕將新的卵母細(xì)胞植入羊的結(jié)扎的輸卵管內(nèi)，6天后發(fā)育成桑椹期胚胎或囊胚〔8-16個(gè)細(xì)胞〕，再移入假孕母羊子宮內(nèi)。5〕產(chǎn)下多莉即為6歲母羊的復(fù)制品，也為白色。他們解快了兩個(gè)重大的技術(shù)問(wèn)題：一個(gè)是解快了使核供體細(xì)胞與核受體細(xì)胞〔去核卵母細(xì)胞〕同步的方法。二是解快了用體細(xì)胞做核供體與轉(zhuǎn)基因的問(wèn)題。135.異種動(dòng)物克隆異種動(dòng)物克隆在兩棲類(lèi)和魚(yú)類(lèi)上開(kāi)展得比較深入，在哺乳類(lèi)動(dòng)物異種克隆的報(bào)道較少。1999年，陳大元等對(duì)異種動(dòng)物體細(xì)胞克隆應(yīng)用在大熊貓，但由于難于找到適宜的胚胎移植的受體，所以未能獲得突破性的進(jìn)展。1412.4.1.5細(xì)胞核移植的技術(shù)路線1.核供體的獲得在核移植操作中，細(xì)胞核供體首先必須是完整的二倍體。該細(xì)胞必須持有該動(dòng)物完整的基因組。其次，供體細(xì)胞核必須能在受體細(xì)胞的作用下，產(chǎn)生細(xì)胞分化過(guò)程的逆轉(zhuǎn)。目前的研究證明，核移植技術(shù)中核供體可以來(lái)源于不同的細(xì)胞，如胚胎細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞、胎兒成纖維細(xì)胞及體細(xì)胞等。其中，以胚胎細(xì)胞克隆的應(yīng)用最為普遍，體細(xì)胞克隆的意義最大。15對(duì)于早期胚胎細(xì)胞，先用0.2%鏈蛋白酶或PH2.5的酸性臺(tái)氏液預(yù)處理，溶去胚胎透明帶，然后將除去透明帶的卵裂球放入Ca2+、Mg2+的培養(yǎng)液或含胰蛋白酶的培養(yǎng)液中短暫培養(yǎng)，使細(xì)胞間連接松散，再用吸管反復(fù)吹打即可得到單個(gè)卵裂球作為核供體，消化透明帶的時(shí)間是影響卵裂球質(zhì)量的重要因素。作用時(shí)間短，透明帶不能充分消化，卵裂球不易獲得，作用時(shí)間長(zhǎng)，那么影響到卵質(zhì)膜，容易破裂，在操作時(shí)容易失敗。因此，分裂球應(yīng)在解剖鏡下監(jiān)視透明帶的消化過(guò)程，當(dāng)透明帶薄，膨脹適度時(shí)就應(yīng)移出，再用適當(dāng)口徑的吸管吹打，使之別離。16對(duì)于體細(xì)胞，需建立穩(wěn)定的細(xì)胞系，并處理誘離生長(zhǎng)周期，進(jìn)入G0期。從動(dòng)物器官或組織別離出所需的組織團(tuán)塊，用動(dòng)物組織培養(yǎng)的方法別離成細(xì)胞懸液，然后在含血清的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，進(jìn)行正常的傳代，在傳代時(shí)，每隔幾代取一些細(xì)胞集落進(jìn)行染色體分析，檢查染色體是否為正常的整倍數(shù)，傳代到達(dá)一定次數(shù)，細(xì)胞形態(tài)穩(wěn)定，正常增殖，說(shuō)明已建立了穩(wěn)定的細(xì)胞系。取建系的細(xì)胞在含低濃度血清的培養(yǎng)液中培養(yǎng)1-5天。細(xì)胞在低營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)液中可以被誘離生長(zhǎng)周期，進(jìn)入G0期。172.受體細(xì)胞的獲得及其去核作為胚胎細(xì)胞核移植的受體細(xì)胞主要有3類(lèi)，即去核的成熟卵母細(xì)胞、受精卵及2細(xì)胞胚胎。大量實(shí)驗(yàn)證明，MⅡ期卵母細(xì)胞適用于所有的供體核，目前根本上采用去核的MⅡ期卵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞質(zhì)。因?yàn)楹艘浦餐ǔＪ怯秒娙诤系姆椒ㄍ瓿晒w細(xì)胞與受體細(xì)胞的融合，所以在去核的同時(shí)要去掉第一極體，以免將其融合到卵母細(xì)胞內(nèi)。而且在去核時(shí)應(yīng)吸去盡可能少的細(xì)胞質(zhì)和MⅡ期染色體。核受體細(xì)胞的去核可用化學(xué)處理和紫外光滅活染色體的方法，但以顯微手術(shù)法簡(jiǎn)便有效。卵母細(xì)胞的去核方法主要有以下幾種：181〕盲吸法用微細(xì)胞玻璃管在第一極體下盲吸，吸除第一極體及處于分裂中期的染色體和周?chē)木植考?xì)胞質(zhì)。2)功能性去核法這是一種非機(jī)械去核方法，通過(guò)用紫外線或激光照射使染色體失活而到達(dá)去核的目的。例如將卵母細(xì)胞經(jīng)Hoechst33342染色和短時(shí)紫外線照射，可使核失去功能。3〕化學(xué)誘導(dǎo)去核用脫羧秋水仙堿處理激活的小鼠減數(shù)分裂Ⅱ期卵母細(xì)胞，使其排放第二極體。由于脫羧秋水仙堿的作用，核染色質(zhì)沒(méi)有分開(kāi)而全部進(jìn)入第二極體，這樣就可以完成去核。這種方法可以在同一時(shí)間大量去核，同時(shí)還防止了人為操作的不穩(wěn)定性和重復(fù)性，這一方法應(yīng)用將會(huì)使哺乳動(dòng)物克隆技術(shù)大為簡(jiǎn)化。19受精過(guò)程模式圖（3）獲能精子與透明帶結(jié)合并發(fā)生頂體反應(yīng)，釋放水解酶溶解透明帶。透明帶卵丘細(xì)胞（2）獲能精子在接觸放射冠后發(fā)生頂體反應(yīng)，釋放水解酶溶解放射冠細(xì)胞間質(zhì)。（1）獲能精子接近卵冠丘復(fù)合體（5）卵母細(xì)胞發(fā)生皮質(zhì)反應(yīng)。皮質(zhì)顆粒胞吐，顆粒內(nèi)容物擴(kuò)散至細(xì)胞表面和透明帶，阻止多精受精。（4）精子進(jìn)入卵周腔與卵母細(xì)胞融合，精子細(xì)胞核和部分細(xì)胞器進(jìn)入卵母細(xì)胞。放射冠極體皮質(zhì)顆粒卵母細(xì)胞203.細(xì)胞核移植根據(jù)供體核移入部位的不同可分為帶下移植和胞質(zhì)內(nèi)注射1〕帶下移植：將核供體卵裂球放在操作液滴中，用一直徑接近卵裂球大小的移植針吸取一枚別離出的完整卵裂球，注入去核卵母細(xì)胞的卵周隙，并使供體細(xì)胞與卵質(zhì)膜接觸2〕胞質(zhì)體注射：用注射針〔內(nèi)徑5～8μm〕將細(xì)胞核直接注入卵質(zhì)內(nèi)，一般去核時(shí)留下的口進(jìn)入。操作的環(huán)境溫度在30-35℃左右，帶下和胞質(zhì)內(nèi)注射后需進(jìn)行激活處理。214.細(xì)胞融合與激活正常受精卵的發(fā)育啟動(dòng)和早期卵裂主要由卵母細(xì)胞胞質(zhì)中母源信息所控制，成熟的卵母細(xì)胞質(zhì)能使移人的細(xì)胞核在形態(tài)上和功能上發(fā)生改變。由于微吸管破壞了卵膜和一局部細(xì)胞質(zhì)，同時(shí)移入的細(xì)胞核未與供體細(xì)胞質(zhì)膜發(fā)生緊密聯(lián)系，假設(shè)直接移植，成功率很低，故需對(duì)重胚進(jìn)行融合。重組胚的發(fā)育需要迸一步激活，卵母細(xì)胞的激活涉及的因素很多，無(wú)論是受精卵引起的卵母細(xì)胞激活還是人工的激活，都引起卵母細(xì)胞發(fā)生一系列的反響，這些反響是胚胎發(fā)育所必需的，可以采用電激活和化學(xué)激活方法。激活的原理是通過(guò)電刺激、鈣離子載體等方法，使卵母細(xì)胞從減數(shù)分裂Ⅱ期中解放出來(lái)，并轉(zhuǎn)到“受精〞的狀態(tài)。225.重組胚的培養(yǎng)重構(gòu)胚需要在體外培養(yǎng)一段時(shí)間以觀察其發(fā)育能力，方可移植到受體，兔和豬重構(gòu)胚在體外培養(yǎng)24h以內(nèi)即可，而羊和牛重構(gòu)胚所需培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，一般發(fā)育到囊胚或桑椹胚時(shí)移植。6.胚胎移植重構(gòu)胚的移植與胚胎移植的方法根本一樣，將重構(gòu)胚移入輸卵管或子宮，以期產(chǎn)生克隆動(dòng)物。輸卵管移植一般適用于～8細(xì)胞期胚胎。子宮內(nèi)移植適用于桑椹胚到囊胚期階段的胚胎，另外在胚胎移植時(shí)，應(yīng)防止帶入多余的培養(yǎng)液或氣泡。7.體細(xì)胞核移植后代的鑒定23里程碑式的突破1996-1997年首只體細(xì)胞克隆動(dòng)物“多莉〞羊的成功證明了成熟的體細(xì)胞也具有全能性。24多莉培育者之一

——伊斯維姆.穆特2526世界首例兔體細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)在2007年2月12日在我國(guó)獲得成功中國(guó)農(nóng)科學(xué)院北京畜牧研究國(guó)家畜禽分子遺傳育種中心博士后李善剛，日前成功獲得來(lái)自胎兒成纖給細(xì)胞的克隆兔。分子生物學(xué)鑒定顯示這是世界上首例存活的來(lái)自胎兔成纖給細(xì)胞的克隆兔。

家兔的克隆是一個(gè)世界難題。自多莉羊誕生后，世界多個(gè)小組開(kāi)始克隆兔研究，但只有法國(guó)國(guó)立農(nóng)業(yè)研究院于2002年報(bào)道獲得來(lái)自性成熟母兔顆粒細(xì)胞的克隆兔。李善剛等2006年獲得來(lái)自成年公兔組織的克隆兔。使用胎兔成纖給細(xì)胞制作獲得存活的克隆兔，在世界上尚屬首次報(bào)道。27克隆先鋒成果驚為韓國(guó)上下尊為國(guó)寶。1993年黃禹錫培育出韓國(guó)第一頭“試管牛〞1999年培育出韓國(guó)第一頭克隆奶牛。2002年培育出克隆豬。2004年2月，率先從人類(lèi)克隆胚胎中提取出“成對(duì)細(xì)胞〞-干細(xì)胞。2005年5月，成功利用患者體細(xì)胞提取了干細(xì)胞。2005第一次，因?yàn)楣吩诼涯讣?xì)胞尚未成熟時(shí)就排卵，而且當(dāng)時(shí)還沒(méi)有建立起可在體外使狗的卵細(xì)胞成成熟的體外培養(yǎng)體系。28黃禹錫首次克隆出狗斯納皮29克隆狗Snuppy〔中〕和提供成熟細(xì)胞的阿富汗獵犬〔左〕與黃色的代孕狗拉布拉多獵狗〔右〕30bona韓國(guó)成功克隆出“斯納皮〞的女朋友31中國(guó)首例體細(xì)胞克隆豬誕生322007年10月14日，美國(guó)俄勒岡州國(guó)家靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物研究中心的科學(xué)家米塔利波夫，宣布成功得到了恒河猴的克隆胚胎，他運(yùn)用傳統(tǒng)的體細(xì)胞核轉(zhuǎn)移技術(shù)，將恒河猴的皮膚細(xì)胞移植入卵細(xì)胞中，并將這個(gè)細(xì)胞培育成逐漸形成胚胎，從中提取出胚胎干細(xì)胞。33

克隆人34克隆人制備過(guò)程將普通的男性細(xì)胞和一枚女性卵子結(jié)合起來(lái)，儲(chǔ)存于女性卵子中的遺傳信息將事先被消除。通過(guò)細(xì)胞分裂形成的胚胎應(yīng)只帶有這名男性的全部遺傳信息，最后將胚胎移植到女性子宮中，獲得男性克隆后代。當(dāng)然，如果一對(duì)夫婦愿意的話，也可以克隆女性。35克隆的人類(lèi)胚胎36ACT公司的研究人員將一枚卵細(xì)胞中的DNA全部剔除，然后用一枚成年人皮膚細(xì)胞中的細(xì)胞核替代上述DNA，由于這個(gè)卵細(xì)胞事先經(jīng)過(guò)受精，所以開(kāi)始自然分裂，但它并沒(méi)有發(fā)育成一個(gè)嬰兒，而是演變成干細(xì)胞，研究人員得到3個(gè)早期胚胎，其中兩個(gè)發(fā)育到4細(xì)胞階段，另一個(gè)至少發(fā)育到6細(xì)胞階段。由于這證明人體單個(gè)細(xì)胞的遺傳物質(zhì)能被誘導(dǎo)發(fā)育成為幼胚胎，因此這項(xiàng)研究被認(rèn)為是向著克隆人的方向邁出了關(guān)鍵一步。

37但他們強(qiáng)調(diào)：不會(huì)制造用于生育目的的胚胎，他們的研究是為了幫助病人。威斯特將這一成果稱為走向醫(yī)學(xué)新時(shí)代的“蹣跚第一步〞，是治療性克隆研究中的重大突破，將幫助研究人員找到治療帕金森綜合征、糖尿病和早老性癡呆等疾病的方法。38克隆人最新進(jìn)展

2003年1月第1個(gè)克隆人？11月26日，安蒂諾里在羅馬再次引爆了輿論炸彈。他在記者招待會(huì)上透露：一名懷有克隆胚胎的婦女已懷孕33周。B超顯示，胎兒為男性，目前重約2.7公斤，發(fā)育良好。如果一切順利的話，世界上第一個(gè)“克隆人〞將于２００３年1月的第一個(gè)星期誕生。39目前，克隆技術(shù)開(kāi)展十分迅速，克隆技術(shù)已展示出廣闊的應(yīng)用前景。在不久的將來(lái)，克隆技術(shù)將可以用來(lái)治療糖尿病、中風(fēng)、癌癥、艾滋病、心臟病以及諸如帕金森綜合癥等精神疾病，并極大改變現(xiàn)有的器官移植理論和治療手段，給人類(lèi)帶來(lái)福音。然而，克隆技術(shù)也存在著一些弊端。12.4.2動(dòng)物克隆進(jìn)一步研究的問(wèn)題及應(yīng)用前景401.技術(shù)尚不成熟2.克隆動(dòng)物的體細(xì)胞突變、壽命及其他遺傳問(wèn)題3.來(lái)自克隆動(dòng)物的可應(yīng)用性的思考4.社會(huì)學(xué)和理論學(xué)問(wèn)題12.4.2.1克隆動(dòng)物研究的問(wèn)題4112.4.2.2細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景1.靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物克隆成功及克隆人胚胎的研究克隆動(dòng)物的最新進(jìn)展來(lái)自于一名在香港出生、在美國(guó)俄勒岡州靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物研究中心從事研究的華人科學(xué)家安東尼·錢(qián)(Anthonycam)，他于2000年左右成功利用胚胎分裂法復(fù)制兩只恒河猴。成功復(fù)制恒河猴可以說(shuō)是生物科技上的一大突破。因?yàn)檫@是人類(lèi)第一次克隆出與人最類(lèi)似的靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物。422.轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)為了克隆技術(shù)更加優(yōu)化，更具有實(shí)用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)效益，就必須結(jié)合基因工程技術(shù)，培育出更有前途的轉(zhuǎn)基因克隆哺乳動(dòng)物，使之成為用途廣泛的“活體生物反響器〞。43干細(xì)胞研究開(kāi)辟第二戰(zhàn)場(chǎng)，克隆羊技術(shù)路線或已過(guò)時(shí)2007年11月20日，日本京都大學(xué)的山中伸彌和美國(guó)威斯康星大學(xué)的詹姆斯湯姆森分別在?細(xì)胞??科學(xué)?雜志上發(fā)表重量級(jí)論文，宣布他們用基因改造的手段，將人類(lèi)體細(xì)胞改造成了類(lèi)胚胎干細(xì)胞，在功能上幾乎可以和胚胎干細(xì)胞相媲美。體細(xì)胞是一種已經(jīng)分化得十分成熟的細(xì)胞，相當(dāng)于命運(yùn)已經(jīng)定型，但是山中伸彌和湯姆森用逆轉(zhuǎn)錄病毒為載體，將四個(gè)不同作用的關(guān)鍵基因轉(zhuǎn)入體細(xì)胞內(nèi)，令其與原有基因發(fā)生重組，竟然能讓體細(xì)胞重新返回到“生命原點(diǎn)〞，變成一個(gè)多功能的干細(xì)胞，具有胚胎干細(xì)胞的特性，這種細(xì)胞，人們稱之為誘導(dǎo)性多功能干細(xì)胞〔ips〕，它們就像是失憶了一樣，忘記了自己先前的身份，重新“從零開(kāi)始〞。山中伸彌oct3/4、sox2、c-myc、klf4和湯姆森選擇的基因有兩個(gè)不同的基因oct3/4、sox2、Nanng、Lin28448.2核移植技術(shù)的應(yīng)用一、核移植技術(shù)的應(yīng)用：制備轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物，進(jìn)行生物制藥物生產(chǎn)培育優(yōu)良畜種，擴(kuò)大良種種群開(kāi)展異種動(dòng)物克隆，拯救瀕危動(dòng)物與干細(xì)胞技術(shù)結(jié)合，開(kāi)展治療性克隆利用核移植技術(shù)，研究生物學(xué)的基本問(wèn)題。45異種動(dòng)物克隆北山羊46二、核移植技術(shù)存在問(wèn)題：成功率低核移植理論研究相對(duì)于技術(shù)研究而言較為滯后體細(xì)胞克隆后有可能出現(xiàn)老化現(xiàn)象核移技術(shù)環(huán)節(jié)尚需不斷完善。47

有關(guān)克隆動(dòng)物與人存在的問(wèn)題48贊同的49意大利醫(yī)生

安蒂諾里——

克隆人的帶頭人50冒死也要克隆人的科學(xué)家布瓦瑟利耶

51反對(duì)的52“多利羊〞之父反對(duì)克隆人中國(guó)日?qǐng)?bào)網(wǎng)站消息：被譽(yù)為“多利羊〞之父的英國(guó)科學(xué)家威爾穆特1月4日稱，“多利羊〞感染了早期關(guān)節(jié)炎，哺育動(dòng)物的克隆平安問(wèn)題再度受到質(zhì)疑。威爾穆特呼吁，反對(duì)任何克隆人的方案?！拔艺J(rèn)為，已經(jīng)有足夠的證據(jù)說(shuō)明，克隆人的行動(dòng)是完全不負(fù)責(zé)任的。〞他說(shuō)，克隆技術(shù)目前還存在很多不確定因素，他們?cè)趯?duì)動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)經(jīng)常遇到大量畸形或異常情況，因此克隆技術(shù)目前不適合用于人類(lèi)。

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本報(bào)訊〔記者曾偉〕克隆動(dòng)物都會(huì)早衰嗎？昨日，記者就此采訪了中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)陳永福教授，他和他的研究小組曾經(jīng)在我國(guó)率先克隆出第一頭克隆牛。陳教授說(shuō)，生命的長(zhǎng)短取決于染色體分裂的次數(shù)，多利羊之所以6歲多就出現(xiàn)早衰病癥，那是因?yàn)樗倪z傳物質(zhì)取自于一頭六七歲的綿羊。按普通綿羊十一二歲的壽命，這頭綿羊體細(xì)胞中的染色體已經(jīng)分裂了六七年，因此，它們?cè)诙嗬蝮w內(nèi)當(dāng)然也就只能再持續(xù)分裂六七年了。所以說(shuō)，克隆技術(shù)無(wú)法讓細(xì)胞“返老還童〞。54任何克隆動(dòng)物都有基因上的缺陷。克隆羊和克隆牛都有體形過(guò)度龐大的問(wèn)題。該缺陷在克隆鼠身上也存在?？寺∨！⒀?、豬都存在發(fā)育不良、免疫系統(tǒng)缺陷和心肺功能不健全的問(wèn)題。

55三只體細(xì)胞克隆豬猝死動(dòng)物克隆安全性再受質(zhì)疑(附圖)

8月27日，著名科學(xué)期刊《自然》雜志報(bào)道稱，一個(gè)臺(tái)灣研究小組克隆的三頭豬在年僅6個(gè)月大小時(shí)由于心臟病先后死亡?？寺?dòng)物的健康問(wèn)題再度引起科學(xué)界關(guān)注。這三頭克隆豬采用與多莉羊克隆技術(shù)的一個(gè)變種克隆而來(lái)。該研究小組最先克隆出4頭豬，但其中一頭出生幾天內(nèi)即已夭折。領(lǐng)導(dǎo)該項(xiàng)研究的康涅狄格大學(xué)JerryYang將之成為“成年克隆猝死綜合征”。這些克隆豬的悲劇命運(yùn)再次清楚地提醒人們，克隆動(dòng)物與正常動(dòng)物存在很大不同。許多克隆動(dòng)物都會(huì)生病或者出生后很快夭折，即使著名的“多莉”羊也僅僅在6歲的時(shí)候死亡，這相對(duì)于其同類(lèi)還是較為年輕。問(wèn)題可能是成年體細(xì)胞中的DNA沒(méi)有按照胚胎發(fā)育的過(guò)程進(jìn)行適當(dāng)?shù)闹匦抡{(diào)整。該研究小組正在試圖找出相關(guān)的基因，可能是些控制心臟功能的基因。這些克隆豬的死亡使豬器官移植到人體的設(shè)想受到質(zhì)疑。研究人員已經(jīng)制成部分人化的豬細(xì)胞，并將其克隆成為完整的豬。這些豬的器官可以移植到人體內(nèi)而不會(huì)在受體內(nèi)產(chǎn)生排異反應(yīng)。Yang表示，現(xiàn)在這個(gè)設(shè)想值得擔(dān)心。另外，克隆豬的猝死也使克隆人的安全性受到質(zhì)疑。但也有科學(xué)家認(rèn)為，這樣的問(wèn)題可以通過(guò)克隆動(dòng)物的