九免疫熒光染色觀察腫瘤細胞骨架_第1頁
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文檔簡介

免疫熒光染色觀看腫瘤細胞骨架試驗九試驗?zāi)康呐c要求把握免疫熒光技術(shù)的根本原理;了解免疫熒光技術(shù)在生命科學(xué)中的廣泛應(yīng)用.一、試驗的根本原理熒光顯微鏡是一種較為常用的的光學(xué)顯微鏡，其根本原理是利用肯定波長的激發(fā)光對樣品進展激發(fā)，使之產(chǎn)生肯定波長的熒光，從而用于對樣品構(gòu)造或其組分進展定性、定位、定量觀看檢測。抗體能特異性地識別相應(yīng)的抗原，并與之結(jié)合。這種結(jié)合在體外也能發(fā)生，這種特性就是很多免疫檢測方法的根底。熒光技術(shù)與免疫技術(shù)的結(jié)合可用于對樣品構(gòu)造或其組分進展定性、定位、定量觀看檢測。三、試劑與器材人腫瘤細胞涂片甲醇、H2O2、濾紙、PBS、正常羊血清封閉液、一抗、FITC標記的IgG、甘油/PBS封片劑、蓋玻片熒光顯微鏡玻片細胞置于甲醇中-10℃固定5min，室溫涼干〔或冷丙酮固定5min，室溫涼干〕；

PBS漂洗2min×3次；

3%H2O2室溫孵育10min〔以去除細胞內(nèi)源性過氧化物酶活性〕；

PBS漂洗5min×3次；

10%正常羊血清封閉液〔0.1MPBS配制〕室溫封閉20min；

棄封閉液〔此步驟不必PBS洗滌〕；

四、試驗步驟用適當比例稀釋的一抗〔一般稀釋比為1:100-1:200〕37℃孵育1h〔或4℃孵育過夜〕；

PBS漂洗5min×3次；

用適當比例稀釋的二抗〔FITC標記的IgG〕〔一般稀釋比為1:100-1:200，用加有BSA的TBS－T配制〕室溫孵育30min〔避光黑暗條件下進展〕；

PBS漂洗5min×3次；

甘油/PBS封片劑〔PBS:甘油=1：9，v/v，pH8.0-8.5〕封片；

熒光顯微鏡或激光共聚焦掃描顯微鏡觀看拍照。

五、留意事項

1.留意各級抗體濃度的使用范圍;

2.熒光抗體孵育時要留意避光;

3.留意各步驟的漂洗要充分.六、作業(yè)與思考題

試述免疫熒光技術(shù)的根本原理,并描

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