章末驗收評價（三）基因工程

章末驗收評價(三)基因工程一、選擇題(本題共20小題，第1～15小題每題2分，第16～20小題每題3分，共45分)1．下列關于DNA重組技術基本工具的說法，正確的是 ()A．DNA連接酶只能連接雙鏈DNA片段互補的黏性末端B．微生物中的限制酶對自身DNA無損害作用C．限制酶切割DNA后一定能產生黏性末端D．質粒是基因工程中唯一的載體解析：選BDNA連接酶分為兩類：E.coliDNA連接酶和T4DNA連接酶，前者只能將雙鏈DNA片段互補的黏性末端連接起來，而后者既可以連接雙鏈DNA片段互補的黏性末端，也可以連接雙鏈DNA片段的平末端，A錯誤；細菌內的限制酶能限制外源DNA的侵入并使之失活，即能將外源DNA切斷，從而保護自身的遺傳特性，B正確；限制酶切割DNA后，產生的末端有黏性末端和平末端兩種，C錯誤；質粒是常用的載體，除此之外，基因工程中用到的載體還有噬菌體和動植物病毒等，D錯誤。2．下列四個DNA片段，彼此可通過DNA連接酶重組在一起的是 ()A．②④ B．②③C．③④ D．①②解析：選A題圖中黏性末端②ATGG和④CCAT可以堿基互補配對，可用DNA連接酶將其連接在一起，其他各組堿基不能完全互補配對，無法用DNA連接酶將其連接。3．下列關于幾種酶作用的敘述，錯誤的是 ()A．DNA連接酶能使不同脫氧核苷酸的磷酸與脫氧核糖連接B．RNA聚合酶能與基因的特定位點結合，催化遺傳信息的轉錄C．一種限制酶能識別多種核苷酸序列，并切割出多種黏性末端D．DNA聚合酶能把單個脫氧核苷酸分子連接成一條DNA單鏈解析：選CDNA連接酶能使不同脫氧核苷酸的磷酸與脫氧核糖連接，形成磷酸二酯鍵，A正確；RNA聚合酶能與基因的特定位點(啟動子)結合，催化遺傳信息的轉錄，B正確；一種限制酶只能識別一種核苷酸序列，切割出一種黏性末端或平末端，C錯誤；DNA聚合酶在DNA復制過程中發(fā)揮作用，能將單個的脫氧核苷酸連接成一條DNA單鏈，D正確。4．下列關于DNA粗提取與鑒定的敘述，錯誤的是 ()A．利用DNA和蛋白質在不同濃度的NaCl溶液中的溶解度差異提取DNAB．DNA不溶于酒精，在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最高C．提取DNA時，在切碎的洋蔥中加入適量洗滌劑有利于DNA的釋放D．用二苯胺試劑鑒定DNA時，溶液藍色深淺可反映DNA含量多少解析：選BDNA和蛋白質在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，據此可以提取DNA，A正確；DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最低，B錯誤；在提取洋蔥細胞的DNA時，在切碎的洋蔥中加入適量洗滌劑的作用是溶解細胞膜，有利于DNA的釋放，C正確；用二苯胺試劑鑒定DNA時，溶液藍色深淺可反映DNA含量多少，D正確。5．下列有關基因工程和操作工具的敘述，正確的是 ()A．質粒上的抗性基因常作為標記基因供重組DNA的鑒定選擇B．RNA聚合酶能與信使RNA的特定位點結合，催化遺傳信息的轉錄C．利用顯微注射法將人的生長激素基因直接導入小鼠的受精卵，培育超級小鼠D．DNA探針可用于檢測苯丙酮尿癥和21三體綜合征解析：選A質粒上的抗性基因常作為標記基因供重組DNA的鑒定選擇，A正確；RNA聚合酶能與DNA的啟動子識別結合，催化遺傳信息的轉錄，B錯誤；利用顯微注射法將人的生長激素基因與載體結合構建重組載體后導入小鼠的受精卵，培育超級小鼠，C錯誤；DNA探針可用于檢測苯丙酮尿癥，21三體綜合征是染色體遺傳病，不能用DNA探針檢測，D錯誤。6．PCR是一種體外迅速擴增DNA片段的技術，下列有關PCR過程的敘述，正確的是 ()A．待擴增的DNA兩條鏈的解旋過程需要酶的催化B．所用引物的長度越短，與模板鏈結合的特異性越強C．在子鏈的形成過程中，dNTP可以提供原料和能量D．與細胞內DNA復制相比，PCR所需要的酶對高溫比較敏感解析：選CPCR擴增DNA時，DNA解旋過程是通過高溫來實現的，A錯誤；引物越長，能夠配對的概率越低，與模板鏈結合的特異性越強，B錯誤；dNTP包括dATP、dGTP、dCTP和dTTP，在子鏈的形成過程中，可以提供原料和能量，C正確；PCR所需要的酶為耐高溫的DNA聚合酶，其最適溫度較高，對高溫敏感性較弱，D錯誤。7．下列各組生物中均是通過基因工程方法獲得的是 ()A．向日葵豆和無子西瓜 B．超級小鼠和克隆羊C．超級綿羊和無子番茄 D．超級魚和抗蟲棉解析：選D向日葵豆的培育需要采用植物體細胞雜交技術，無子西瓜的培育采用了多倍體育種的方法，A錯誤；超級小鼠的培育需要采用基因工程技術，而克隆羊的培育采用的是核移植、胚胎移植等技術，B錯誤；超級綿羊的培育需要采用基因工程技術，而無子番茄的培育采用生長素促進果實發(fā)育的原理，C錯誤；超級魚和抗蟲棉的培育都需要采用基因工程技術，D正確。8．下列關于基因工程的敘述，正確的是 ()A．抗除草劑基因轉入某植物獲得轉基因植株，其DNA檢測均含目的基因，抗性鑒定為抗除草劑和不抗除草劑。表明一定是前者表達了抗性蛋白而后者目的基因沒有表達B．基因工程常用的工具酶有限制酶和DNA連接酶，其中的限制酶均能特異性地識別6個核苷酸序列C．質?？梢宰鳛榛虻妮d體使用，通常采用抗生素合成基因作為標記基因D．目的基因在供體細胞與受體細胞中的表達產物可能不同解析：選D抗除草劑基因轉入某植物獲得轉基因植株，但不抗除草劑，也可能是翻譯后的肽鏈未能正確折疊形成特定的空間結構，A錯誤；限制酶通常能特異性地識別4個或6個核苷酸序列，B錯誤；質粒中的抗生素合成的抗性基因通常作為標記基因，C錯誤；原核細胞中表達的真核細胞基因，由于原核細胞沒有內質網、高爾基體等細胞器，表達產物與真核細胞中可能不同，D正確。9.如圖為某質粒限制酶酶切圖譜。某基因不含圖中限制酶識別序列。為使PCR擴增的該基因與該質粒構建重組質粒，則擴增的該基因兩端需分別引入哪兩種限制酶的識別序列()注：圖中限制酶的識別序列及切割形成的黏性末端均不相同。A．NdeⅠ和BamHⅠ B．NdeⅠ和XbaⅠC．XbaⅠ和BamHⅠ D．EcoRⅠ和KpnⅠ解析：選A構建重組質粒時，要將目的基因插入到啟動子和終止子之間，而且不能破壞啟動子、終止子、復制原點，抗生素抗性基因等部位。故只能選用NdeⅠ和BamHⅠ切割質粒和含目的基因的DNA片段，因此在PCR擴增的該基因的兩端需分別引入NdeⅠ和BamHⅠ兩種限制酶的識別序列。10．下列關于蛋白質工程的敘述，正確的是 ()A．通過對基因結構的定點改造實現對玉米中賴氨酸合成過程中的關鍵酶結構的改造屬于蛋白質工程B．將人的胰島素基因導入大腸桿菌細胞內，使大腸桿菌生產人的胰島素的技術屬于蛋白質工程C．蛋白質工程不需要構建基因表達載體D．通過蛋白質工程改造后的蛋白質的特性不能遺傳給子代解析：選A通過對基因結構的定點改造實現對玉米中賴氨酸合成過程中的關鍵酶結構的改造屬于蛋白質工程，A正確；將人的胰島素基因導入大腸桿菌細胞內，使大腸桿菌生產人的胰島素的技術屬于基因工程，B錯誤；在蛋白質工程中，改造后的基因需要導入受體細胞內才能表達出相應的蛋白質，故需要構建基因表達載體，C錯誤；蛋白質工程的實質是對基因進行改造，從而實現對蛋白質的改造，改造后的蛋白質的特性可遺傳給子代，D錯誤。11．研究人員將生長激素基因通過質粒導入大腸桿菌細胞，使其表達，產生生長激素。已知質粒中存在兩個抗性基因：甲是抗鏈霉素基因，乙是抗氨芐青霉素基因，且目的基因要插入到基因乙中，而大腸桿菌不帶有任何抗性基因。下列敘述正確的是 ()A．導入大腸桿菌的質粒一定為重組質粒B．RNA聚合酶是構建該重組質粒必需的工具酶C．起始密碼子位于基因的首端，能起始轉錄過程D．在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基中不能生長，但在含鏈霉素培養(yǎng)基中能生長的可能是符合生產要求的大腸桿菌解析：選D導入大腸桿菌的質?？赡転橹亟M質粒，也可能為普通質粒，A錯誤；構建基因表達載體過程中需要的工具酶為限制酶和DNA連接酶，不需要RNA聚合酶，B錯誤；啟動子位于基因的首端，是RNA聚合酶識別和結合的部位，能驅動轉錄過程，而密碼子是指mRNA上的三個相鄰堿基，C錯誤；據題干信息分析可知，目的基因要插入到基因乙中，因此標記基因抗氨芐青霉素基因被破壞而抗鏈霉素基因完整，故在含氨芐青霉素培養(yǎng)基中不能生長，但在含鏈霉素培養(yǎng)基中能生長的可能是符合生產要求的大腸桿菌，D正確。12．十年前兩個研究小組幾乎同時發(fā)現，將四個特定基因通過一定方法導入處于分化終端的體細胞(如成纖維細胞等)中，可誘導其形成具有胚胎干細胞樣分化潛能的誘導型多能干細胞，再誘導可分化出人體特定細胞和組織。這項先進技術的潛在應用前景是 ()A．解決異體組織或器官排斥難題B．克隆具有優(yōu)良品質的動物個體C．改造和優(yōu)化人類基因組結構D．體細胞誘導形成多能干細胞體現了細胞的全能性解析：選A可以用病人的體細胞進行此項技術處理，誘導其形成具有胚胎干細胞樣分化潛能的誘導型多能干細胞，進而分裂和分化，形成組織、器官，解決異體組織、器官排斥難題，A正確；這項技術屬于轉基因技術，不屬于克隆技術，B錯誤；該項技術只是將四個特定基因導入處于分化終端的體細胞(如成纖維細胞等)中，并沒有改造和優(yōu)化人類基因組結構，C錯誤；體細胞誘導形成多能干細胞的過程并沒有形成個體，故不能體現細胞的全能性，D錯誤。13．伯格首先在體外進行了DNA改造的研究，成功地構建了第一個體外重組DNA分子。下列相關敘述正確的是 ()A．不同的DNA分子必須用同一種限制酶切割，才能產生相同的黏性末端B．DNA連接酶、DNA聚合酶，RNA聚合酶和逆轉錄酶都能催化形成磷酸二酯鍵C．當限制酶在它識別序列的中心軸線兩側將DNA的兩條鏈分別切開時，產生的是平末端D．限制酶和DNA連接酶的作用部位不同解析：選B不同的限制酶切割不同的DNA分子后也可能會產生相同的黏性末端，A錯誤；DNA連接酶、DNA聚合酶、RNA聚合酶和逆轉錄酶都能催化形成磷酸二酯鍵，B正確；當限制酶在它識別序列的中心軸線兩側將DNA的兩條鏈分別切開時，產生的是黏性末端，C錯誤；限制酶和DNA連接酶作用的部位都是磷酸二酯鍵，其中限制酶能將磷酸二酯鍵切斷，而DNA連接酶能將磷酸二酯鍵連接起來，D錯誤。14．中華鱘是地球上最古老的脊椎動物，被稱為“活化石”。研究者試圖通過蛋白質工程改造中華鱘體內的某些蛋白質，使其更加適應現在的水域環(huán)境，以下說法錯誤的是()A．該工程可以定向改變蛋白質分子的結構B．改造后的中華鱘的后代不具有改造的蛋白質C．改造后的中華鱘和現有中華鱘仍是同一物種D．改造蛋白質是通過改造基因結構而實現的解析：選B蛋白質工程可以定向改造蛋白質分子的結構，A正確；蛋白質工程改造的是基因，可以遺傳給子代，因此改造后的中華鱘的后代也具有改造的蛋白質，B錯誤；改造后的中華鱘具有新的性狀，但其和現有中華鱘仍是同一物種，C正確；改造蛋白質是通過改造基因結構而實現的，D正確。15．SRY-PCR技術是現階段進行人類胚胎性別鑒定最準確的方法，具有取樣少、對胚胎損傷小、檢測時間短等優(yōu)點。下列敘述錯誤的是 ()A．SRY基因位于Y染色體上B．SRY-PCR前應制備足量的兩種引物C．SRY-PCR利用了DNA熱變性的原理D．應將PCR產物與胚胎提取物進行抗原－抗體雜交以鑒定胚胎性別解析：選DSRY基因控制男性睪丸發(fā)育，是決定人類男性性別的基因，是男性特有的基因，位于Y染色體上，A正確；SRY-PCR需要引物，DNA的兩條鏈所需的引物不同，擴增后引物成為新的DNA分子的一部分，所以在SRY-PCR前應制備足量的兩種引物，B正確；SRY-PCR利用了DNA加熱變性打開雙螺旋，形成兩條單鏈作為復制模板的原理，C正確；應將PCR產物與胚胎提取物進行DNA分子雜交以鑒定胚胎性別，D錯誤。16．如圖是利用基因工程技術生產疫苗的部分過程，其中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ為四種限制酶。下列有關說法正確的是()A．圖示過程是基因工程的核心步驟，所需的限制酶一定來自原核生物B．圖示中構建基因表達載體時，需用到EcoRⅠ、SmaⅠ兩種限制酶C．一種限制酶只能識別一種特定的核糖核苷酸序列并在特定的位點切割D．抗卡那霉素基因的存在有利于將含有抗原基因的細胞篩選出來解析：選D圖示表示基因表達載體的構建過程，是基因工程的核心步驟，所需的限制酶一般來自原核生物，A錯誤；由于SmaⅠ的識別序列位于目的基因上，若使用該限制酶，將破壞目的基因，所以此表達載體構建時需用到EcoRⅠ、PstⅠ兩種限制酶，B錯誤；限制酶具有特異性，即一種限制酶只能識別一種特定的脫氧核苷酸序列并在特定的位點切割，C錯誤；抗卡那霉素基因作為標記基因，主要作用是篩選含有目的基因的受體細胞，D正確。17.新冠疫情的快速控制，離不開政府的科學決策和我國對新冠病毒(RNA病毒)的快速檢測能力。熒光定量PCR技術可定量檢測樣本中DNA含量，其原理是在PCR反應體系中加入引物的同時，加入與某條模板鏈互補的熒光探針，當TaqDNA聚合酶催化子鏈延伸至探針處會水解探針，使熒光監(jiān)測系統(tǒng)接受到熒光信號，即每擴增一次，就有一個熒光分子生成(如圖)。Ct值(循環(huán)閾值)的含義為每個反應管內的熒光信號到達設定閾值時所經歷的循環(huán)數。下列說法錯誤的是()A．檢測新冠病毒時，需加入逆轉錄酶將新冠病毒RNA轉化為cDNAB．PCR每個循環(huán)包括變性、復性(引物和模板結合)、延伸3個階段C．Ct值越大表示被檢測樣本中病毒數目越多，患者危險性更高D．若樣本被污染，RNA酶將病毒RNA降解，檢測結果可能為陰性解析：選C檢測新冠病毒時，需加入逆轉錄酶將新冠病毒RNA轉化為cDNA，才能被檢測到，A正確；PCR每個循環(huán)包括變性(解開雙鏈)、復性(引物和模板結合)、延伸(TaqDNA聚合酶作用)3個階段，B正確；Ct值越大表示被檢測樣本中病毒數目越少，患者危險性更低，C錯誤；若樣本被污染，RNA酶將病毒RNA降解，則逆轉錄無法得到相應DNA，檢測結果可能為陰性，D正確。18．生物工程是一門生物科學與工程技術有機結合而興起的一門綜合性的科學技術，近些年來發(fā)展迅猛，碩果累累。下列關于生物工程的說法，錯誤的是()A．植物體細胞雜交和動物細胞融合技術的原理是一樣的，植物組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)技術的原理是不同的B．從理論上講，基因工程和細胞工程都可以定向改造生物的遺傳物質和克服遠緣雜交不親和的障礙C．基因工程的工具酶有限制酶、DNA連接酶等，細胞工程的工具酶有纖維素酶、胰蛋白酶等D．通過基因工程和發(fā)酵工程可以生產出乙肝疫苗、胰島素、某些種類的單克隆抗體解析：選A植物體細胞雜交包括兩大步驟，一是細胞融合，其原理是細胞膜的流動性，二是植物組織培養(yǎng)，其原理是植物細胞的全能性，動物細胞融合的原理是細胞膜的流動性和細胞的增殖，A錯誤。基因工程和細胞工程都可以定向改造生物的遺傳性狀，B正確。植物體細胞雜交時，需要用纖維素酶和果膠酶去除細胞壁；動物細胞培養(yǎng)時，需要用胰蛋白酶對組織進行分散處理，獲得單個細胞；基因工程需要限制酶和DNA連接酶，C正確。利用基因工程和發(fā)酵工程可以生產生物藥品，如乙肝疫苗、胰島素、單克隆抗體等，D正確。19．從紅豆杉細胞中提取的紫杉醇是目前最好的抗腫瘤藥物之一。為提高紅豆杉細胞培養(yǎng)物中紫杉醇的產量，研究人員構建紫杉醇合成關鍵酶基因(Bapt)的超表達載體，并將其導入紅豆杉細胞，具體流程如下圖。下列相關說法正確的是()A．過程①和②使用的酶均為DNA聚合酶B．p1303載體上可能含有增強Bapt基因表達的序列C．可使用Bapt基因制成的探針檢測過程⑤是否成功D．改造的紅豆杉細胞需組織培養(yǎng)至完整植株再進行紫杉醇提取解析：選B①為逆轉錄過程，需要逆轉錄酶的催化；②為PCR擴增過程，該過程需要使用TaqDNA聚合酶，A錯誤；根據題干信息“研究人員構建紫杉醇合成關鍵酶基因(Bapt)的超表達載體來提高紫杉醇產量”可知，p1303載體上可能含有增強子序列，作用是促進Bapt基因的表達，B正確；因為紅豆杉細胞中本身存在Bapt基因，不管超表達載體是否成功導入，其都能與Bapt基因探針形成雜交分子，因此不能通過Bapt基因探針來檢測步驟⑤是否成功，C錯誤；要獲得細胞產物，只需要培養(yǎng)到愈傷組織階段即可，不需要培育成完整的紅豆杉植株，D錯誤。20．實時熒光RTPCR可用于RNA病毒的核酸檢測，其原理是在PCR復性過程中探針和引物一起與模板結合，探針兩側分別帶有熒光基團和抑制熒光發(fā)出的淬滅基團，新鏈延伸過程中，DNA聚合酶會破壞探針，導致熒光基團與淬滅基團分離而發(fā)出熒光。利用RTPCR進行核酸檢測的相關過程如圖所示。下列說法錯誤的是()A．做RTPCR之前，需要先根據cDNA的核苷酸序列合成引物和探針B．RNA不能作為PCR擴增的模板，故需要將樣本中的RNA逆轉錄為DNA后再進行擴增C．若檢測結果有強烈熒光信號發(fā)出，說明被檢測者沒有感染病毒D．病毒的檢測還可以檢測病毒的物質或病毒引發(fā)產生的抗體，其原理都是抗原－抗體雜交解析：選CPCR需要根據目的基因的核苷酸序列合成引物，同時RTPCR還需要探針與待測樣本DNA混合，A正確；PCR擴增必須以DNA為模板，RNA不能作為PCR擴增的模板，所以需要將樣本中的RNA逆轉錄為DNA后再進行擴增，B正確；若檢測結果有強烈熒光信號發(fā)出，說明被檢測者極有可能感染了病毒，C錯誤；RNA病毒的檢測方法有①RNA檢測，即檢測病毒的遺傳物質RNA；②特異性抗原蛋白檢測，即檢測病毒表面的一種糖蛋白；③特異性抗體檢測，即檢測感染者體內通過免疫反應所產生的某種抗體；后兩種方法的原理是抗原－抗體雜交，D正確。二、非選擇題(共5小題，共55分)21．(10分)為生產高效價疫苗和簡化計劃免疫程序，科學家研制出基因工程乙肝－百白破(rHB-DTP)四聯(lián)疫苗，各項檢測均通過rHB-DTP四聯(lián)疫苗制檢規(guī)程的要求。其有效成分是乙肝病毒表面抗原、百日咳桿菌菌苗、白喉桿菌類毒素和破傷風桿菌類毒素。請分析回答：(1)為獲取百日咳桿菌相關的基因，可從百日咳桿菌的細胞中提取對應____________，在逆轉錄酶的作用下合成雙鏈cDNA片段，獲得的cDNA片段與百日咳桿菌中該基因堿基序列____________(填“相同”或“不同”)。(2)目前常用獲取目的基因的方法是______________。(3)研究發(fā)現，如果將白喉桿菌類毒素20位和24位的氨基酸改變?yōu)榘腚装彼幔庖咝Ч?，請寫出此種技術的基本流程：_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(4)實驗證明，一定時間內間隔注射該疫苗3次效果更好，其主要原因是體內產生的____________數量增多，當同種抗原再次侵入人體時，機體在更短時間內產生體液免疫的原因是______________________________________________________________________________________________。(5)單克隆抗體是廣泛應用于臨床治療的一種生物制品。單克隆抗體的優(yōu)點在于________________________________________________________________________。解析：(1)為獲取百日咳桿菌相關的基因，可從百日咳桿菌的細胞中提取對應的mRNA，由mRNA合成cDNA的過程屬于逆轉錄過程，需要逆轉錄酶。獲得的cDNA片段只包含基因的編碼區(qū)，沒有非編碼區(qū)，因此與百日咳桿菌中該基因堿基序列不同。(2)目前獲取目的基因常用PCR技術。(3)將白喉桿菌類毒素20位和24位的氨基酸改變?yōu)榘腚装彼釋儆诘鞍踪|工程的范疇，故其基本流程是從預期蛋白質功能出發(fā)→設計預期的蛋白質結構→推測應有的氨基酸序列→找到并改變相對應的脫氧核苷酸序列或合成新的基因→獲得所需要的蛋白質。(4)一定時間內間隔注射該疫苗3次效果更好，其主要原因是體內產生的記憶細胞數量增多，當同種抗原再次侵入人體時二次免疫的特點是短時間內迅速產生記憶細胞和大量的抗體，免疫預防作用更強。(5)單克隆抗體具有純度高、特異性強、靈敏度高的優(yōu)點。答案：(1)mRNA不同(2)PCR技術(3)從預期蛋白質功能出發(fā)→設計預期的蛋白質結構→推測應有的氨基酸序列→找到并改變相對應的脫氧核苷酸序列或合成新的基因→獲得所需要的蛋白質(4)記憶細胞機體內記憶細胞數量增多，當同種抗原再次侵入人體時，記憶細胞迅速增殖分化，快速產生大量抗體(5)純度高、特異性強、靈敏度高22．(11分)人類在預防與診療傳染性疾病的過程中，經常使用疫苗和抗體。已知某傳染性疾病的病原體為RNA病毒，該病毒表面的A蛋白為主要抗原，疫苗生產和抗體制備的部分流程如下圖，回答下列問題：(1)過程③構建A基因重組載體時，必須使用____________和____________兩種工具酶。由過程③構建A基因重組載體，其組成除了目的基因外，還必須有啟動子、____________、____________以及復制原點等。(2)過程④要檢測A基因是否進入受體細胞，常用的方法是____________法；要檢測A基因在受體細胞內是否翻譯出蛋白質，需用________________法。(3)單克隆抗體的制備過程中，運用了動物細胞工程中的____________和____________兩大技術。(4)單克隆抗體的制備過程中，兩次篩選的目的不同，其中第二次篩選的目的是________________________。篩選時所用的培養(yǎng)基是特定的____________培養(yǎng)基。解析：(1)構建A基因重組載體時，首先需用限制酶切割含有A基因的外源DNA分子和載體，再用DNA連接酶連接A基因和載體形成A基因重組載體；由過程③構建A基因重組載體，其組成除了目的基因外，還必須有啟動子、終止子、標記基因以及復制原點等。(2)過程④要檢測A基因是否進入受體細胞，常用的方法是DNA分子雜交法；要檢測A基因在受體細胞內是否翻譯出蛋白質，需用抗原－抗體雜交法。(3)由圖可知，單克隆抗體的制備過程中，需要將漿細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合，再篩選出特定的雜交瘤細胞進行擴大培養(yǎng)，因此該過程運用了動物細胞工程中的動物細胞融合和動物細胞培養(yǎng)兩大技術。(4)單克隆抗體的制備過程中，在將X進行擴大培養(yǎng)之前，至少需要經過兩次篩選，一次是用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞；另一次是用專一抗體檢測方法篩選出能產生所需抗體的雜交瘤細胞。篩選時所用的培養(yǎng)基是特定的選擇性培養(yǎng)基。答案：(1)限制酶DNA連接酶終止子標記基因(2)DNA分子雜交抗原－抗體雜交(3)動物細胞融合動物細胞培養(yǎng)(4)篩選出能產生所需抗體的雜交瘤細胞選擇性23．(12分)四尾柵藻生長周期短、適應性強，是一種高潛力生物柴油新型原料，但其油脂產量低。研究人員從含油量高的紫蘇中提取DGAT1(催化油脂合成的關鍵酶)基因，并成功導入到四尾柵藻細胞內，獲得轉基因的產油四尾柵藻。其制備流程如下圖，圖中AmpR表示氨芐青霉素抗性基因，LacZ基因可使細菌利用培養(yǎng)基中的物質Xgal，進而使菌落呈現藍色，無該基因或該基因被破壞，菌落呈白色?；卮鹣铝袉栴}：(1)從高表達的紫蘇組織細胞中提取總的RNA，經逆轉錄獲得cDNA，用于PCR擴增。該過程獲得cDNA的原理是_______________________________________________________。(2)PCR擴增DGAT1基因時，使反應體系中的模板cDNA解旋為單鏈的條件是________________。在DNA延伸的過程中，使用TaqDNA聚合酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因是_____________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)構建的pMD19-DGAT1導入到經CaC12溶液處理的感受態(tài)大腸桿菌細胞中，并通過________________(方法)接種到含__________________________的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。一段時間后，挑選__________色的菌落以提取質粒pMD19-DGAT1。(4)用限制酶BamHⅠ和XbaⅠ切割pMD19-DGAT1和pBI121，將其連接成重組表達載體pBI121-DGAT1，并將其導入四尾柵藻細胞中。與單酶切相比，雙酶切的優(yōu)點是_________。解析：(1)cDNA是逆轉錄獲得的。在逆轉錄酶作用下，以mRNA為模板按照堿基互補配對原則合成cDNA。(2)PCR技術，采用超過90℃高溫使雙鏈DNA解螺旋。在PCR反應中，加熱的溫度會高達90℃，此時大腸桿菌DNA聚合酶會變性失活，無法發(fā)揮作用，而TaqDNA聚合酶是耐高溫的DNA聚合酶，高溫下仍保持活性。(3)構建的PMD19DGAT1導入到經CaCl2溶液處理的感受態(tài)大腸桿菌細胞中，基因中含有LacZ基因的大腸桿菌可以利用培養(yǎng)物質中的Xgal來使菌落呈現藍色，通過稀釋涂布平板法將大腸桿菌細胞接種到含氨芐青霉素和Xgal的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，LacZ基因成功表達的菌落呈現藍色，由于LacZ答案：(1)在逆轉錄酶作用下，以mRNA為模板按照堿基互補配對原則合成cDNA(2)加熱至90℃以上TaqDNA聚合酶熱穩(wěn)定性高，而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下失活(3)稀釋涂布平板法Xgal和氨芐青霉素白(4)使DGAT1基因能定向插入表達載體，減少自身環(huán)化24．(10分)PCR技術是一項可在體外短時間內復制大量DNA片段的技術。圖1表示PCR技術的過程和原理，回答下列問題：(1)①過程若發(fā)生在細胞內，稱為__________，其作用是__________________________。(2)通常情況下②過程中的兩個引物核苷酸序列________(填“相同”或“不相同”)。③過程需要____________酶。(3)PCR技術和凝膠電泳技術結合，可以用于特定DNA分子的鑒定，從而可用于刑偵破案。從某案件相關人員血液中提取的DNA電泳結果如圖2所示。①DNA凝膠電泳的一般原理是核酸磷酸基團帶________電荷，在電場中可向陽極移動，不同DNA分子的______________大小不同，在電場中遷移率不同。圖2結果顯示被告人________(填“是”或“不是”)殺人犯。②PCR技術不僅為遺傳病的診斷帶來了便利，而且改進了檢測細菌和病毒的方法。若要檢測一個人是否感染了艾滋病病毒，可以取少量血液加入PCR反應體系，其中的________(填字母)可作為模板擴增出目的DNA。A．白細胞DNA B．病毒蛋白質C．血漿抗體 D．病毒核酸解析：(1)圖中①過程是利用PCR技術在體外高溫條件下使得DNA的兩條鏈解開的過程，①過程若發(fā)生在細胞內，稱為解旋，其作用是提供DNA單鏈作為復制模板鏈。(2)PCR過程中引物分別與兩條模板鏈結合，兩條模板鏈的堿基互補，因此需要的兩個引物的核苷酸序列一般不相同。③過程表示子鏈的合成，該過程中需要用到耐高溫的DNA聚合酶。(3)①DNA凝膠電泳的一般原理是核酸磷酸基團帶負電荷，在電場中可向陽極移動，不同DNA分子的相對分子質量大小不同，在電場中遷移率不同。由圖2DNA電泳結果圖可知，被告人衣服上的血的DNA電泳結果與被害人DNA電泳結果高度相似，因此可以判斷被告人是殺人犯。②PCR是聚合酶鏈式反應，用于擴增DNA序列，所以可以用PCR擴增血液中病毒逆轉錄產生的核酸DNA，檢測一個人是否感染了艾滋病病毒，故選D。答案：(1)解旋提供DNA單鏈作為復制模板鏈(2)不相同耐高溫的DNA聚合(TaqDNA聚合)(3)①負相對分子質量是②D25．(12分)中國科學家陳薇院士領銜的團隊研制的重組新冠疫苗的制備流程如圖?；卮鹣铝袉栴}：(1)步驟③為PCR擴增，所需主要工具酶是________________。(2)步驟④是__________________