鹽酸二甲雙胍緩釋片中雙氰胺的測(cè)定

鹽酸二甲雙胍緩釋片中雙氰胺的測(cè)定

鹽酸二甲基丙烯酸酯是一種用于治療非胰島素依賴(lài)糖尿病的降血糖藥物。根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》2000年版的第二部分，鹽酸二甲基丙烯酸酯的檢測(cè)采用了分層色譜法，限制為0.04%，但鹽酸二甲基甲酯片的“物質(zhì)檢驗(yàn)”沒(méi)有雙氰胺檢驗(yàn)。在2002年的《英國(guó)藥典》版中，鹽酸二甲基丙烯酸酯及其片劑中都有0.02%的雙氰胺試驗(yàn)。作者在鹽酸二甲雙胍緩釋片的研究過(guò)程中,根據(jù)《英國(guó)藥典》2002年版鹽酸二甲雙胍片中“雙氰胺檢查”項(xiàng)下的條件,并結(jié)合我國(guó)的實(shí)際情況,改善了色譜條件,采用國(guó)產(chǎn)SCX柱檢查雙氰胺,制定了雙氰胺檢查的標(biāo)準(zhǔn)。鹽酸二甲雙胍和雙氰胺的結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1。1精密ph計(jì)高效液相色譜儀(AutosamplerL—7200,UV—VISDetectorL—7420,PumpL—7110,日本HITACHI公司),精密pH計(jì)(上海雷磁儀器廠)。鹽酸二甲雙胍緩釋片(寧夏康亞藥業(yè)有限公司,批號(hào)20010221、20010222、20010223),鹽酸二甲雙胍對(duì)照品(寧夏康亞藥業(yè)有限公司,含量100.2%),磷酸二氫銨(分析純),磷酸(分析純),重蒸水(自制),雙氰胺(中國(guó)藥品生物制品檢定所)。2方法2.1鹽酸二甲雙醚緩釋片中鹽酸二甲雙醚類(lèi)物質(zhì)的方法學(xué)研究參照《英國(guó)藥典》2002年版(BP2002)鹽酸二甲雙胍片“有關(guān)物質(zhì)檢查”項(xiàng)下的檢查方法,進(jìn)行鹽酸二甲雙胍緩釋片中鹽酸二甲雙胍有關(guān)物質(zhì)的方法學(xué)研究。《中華人民共和國(guó)藥典》2000年版鹽酸二甲雙胍“有關(guān)物質(zhì)檢查”項(xiàng)規(guī)定雙氰胺的限度為樣品的0.04%,故規(guī)定鹽酸二甲雙胍緩釋片中,雙氰胺的限度為樣品的0.04%。2.2檢測(cè)波長(zhǎng)的確定參照《英國(guó)藥典》2002年版(BP2002)鹽酸二甲雙胍“雙氰胺檢查”項(xiàng)下的方法,同時(shí)通過(guò)試驗(yàn)確定雙氰胺檢查的波長(zhǎng)為218nm。2.3流動(dòng)相、流速色譜柱:hypersilSCX柱(4.6mm×150mm,5μm,大連依利特);流動(dòng)相:0.43mol·L-1磷酸二氫銨(pH2.5);流速:1.0mL·min-1;柱溫:40℃。2.4鹽酸二甲雙fig的聚合酶鏈反應(yīng)tr溶劑與輔料均在4min以前出峰,不對(duì)鹽酸二甲雙胍造成干擾。鹽酸二甲雙胍色譜峰與其他峰達(dá)到了完全分離。理論塔板數(shù)按圖2計(jì)算:n=5.54×(tR/W1/2)2=5.54×(20.53/0.67)2=5190。tR為鹽酸二甲雙胍的保留時(shí)間;W1/2為半峰高寬。A—Sample(1);B—Standardof1-cyanoguanidine;C—Sample(3)參照以上試驗(yàn)結(jié)果,規(guī)定理論塔板數(shù)按鹽酸二甲雙胍計(jì)算不得低于2000。2.5l-1溶液取雙氰胺適量,以蒸餾水為溶劑,制成0.03、0.02、0.01mg·L-1的溶液,進(jìn)樣20μL。測(cè)得各質(zhì)量濃度樣品的峰高與噪音(垂線峰高),計(jì)算得最低檢測(cè)質(zhì)量濃度80μg·L-1。2.6峰面積rsd的測(cè)定取雙氰胺適量,配成雙氰胺質(zhì)量濃度為1mg·L-1的溶液,進(jìn)樣20μL,重復(fù)進(jìn)樣6次,記錄峰面積,雙氰胺峰面積的RSD為0.8%。2.7溶液配制與測(cè)定精密稱(chēng)取鹽酸二甲雙胍緩釋片細(xì)粉適量(約相當(dāng)于鹽酸二甲雙胍250mg),置100mL量瓶中,加適量無(wú)水乙醇分散,加流動(dòng)相,超聲使溶解,并稀釋至刻度,搖勻,作為溶液(1);精密稱(chēng)取10mg雙氰胺,置100mL量瓶中,用水溶解并稀釋至刻度,搖勻,再精密量取1mL,用流動(dòng)相稀釋至100mL量瓶中,作為溶液(2);精密量取溶液(1)1mL至50mL量瓶中,用流動(dòng)相稀釋至刻度,精密量取2.5mL至50mL量瓶中,用流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻,作為溶液(3)。精密量取溶液(2)20μL,注入液相色譜儀,調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度,使溶液(2)的峰高不少于滿(mǎn)量程的50%,再精密量取溶液(1)、(3)各20μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,溶液(1)的色譜圖記錄至主成分峰保留時(shí)間的2倍,溶液(1)中雙氰胺的峰面積不超過(guò)溶液(2)的峰面積,在排除溶劑峰后,其他雜質(zhì)峰的面積之和不超過(guò)溶液(3)主成分峰的峰面積。各溶液色譜圖見(jiàn)圖2。3流動(dòng)相scx-1a.對(duì)鹽酸二甲雙胍片3批樣品(批號(hào)20010221、20010222、20010223)進(jìn)行檢查,結(jié)果溶液(1)中雙氰胺的含量小于溶液(2)中雙氰胺的量;其他雜質(zhì)總量小于0.1%。b.《英國(guó)藥典》2002年版(BP2002)采用PartisphereSCX柱、0.15mol·L-1磷酸二氫銨緩沖液(pH3.0)為流動(dòng)相。作者采用國(guó)產(chǎn)HypersilSCX柱(大連依利特),流動(dòng)相不變,鹽酸二甲雙胍的保留時(shí)間約為50min;作者將流動(dòng)相0.15mol·L-1磷酸二氫銨緩沖液(pH3.0)改為