慢性髓系白血病急變期與急性白血病免疫表型比較

慢性髓系白血病急變期與急性白血病免疫表型比較

慢性骨髓疾?。╟ml）是由多能源血漿系統(tǒng)產(chǎn)生的一種惡性疾病。占病變總數(shù)的15%25%。由t（9.22）產(chǎn)生的bcr-abl融合基因是其遺傳特征。在臨床上該病可分為慢性期、加速期和急變期(BC)。CML急變(CML-BC)后的類型各異,初診即為CML-BC的患者易誤診為AL。本研究將58例CML-BC患者的免疫分型資料與同期420例急性白血病(AL)作比較研究,以探討其免疫表型特點(diǎn)。1數(shù)據(jù)和方法1.1研究主題我院1999年1月至2005年8月收治的門診及住院CML-BC病例58例,同期AL420例,各亞型一般資料見(jiàn)表1。1.2免疫分型積分CML-BC及AL參照張之南等主編的《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》(第二版)確診,免疫分型參照2001年世界衛(wèi)生組織(WHO)的免疫表型積分標(biāo)準(zhǔn)。見(jiàn)表2。1.3免疫分析1.3.1pe-cy5標(biāo)記的cd3和cd13單克隆抗體包括FITC標(biāo)記的CD2、CD3、CD10、CD22、CD14、CD34、HLA-DR、cMPO等,PE標(biāo)記的CD7、CD19、CD20、CD17、CD13、CD33、cCD79α等,PE-CY5標(biāo)記的CD45,ECD標(biāo)記的cCD3。同時(shí)加做陰性對(duì)照管,使對(duì)照管細(xì)胞表達(dá)在雙參數(shù)圖中位于10°以內(nèi)。單抗(包括相應(yīng)的陰性對(duì)照)均為法國(guó)Immunotech公司產(chǎn)品。流式細(xì)胞儀為Beckman-Coulter公司的EpicsXL型(USA),采用Expo32-ADC分析軟件。1.3.2抗原細(xì)胞群的檢測(cè)新鮮抽取的肝素抗凝骨髓或外周血(6h內(nèi)),調(diào)整細(xì)胞數(shù)至(0.5～1)×106/ml,取100μl經(jīng)直接免疫熒光標(biāo)記法標(biāo)記,避光15min后上溶血?jiǎng)┤芙饧t細(xì)胞。上機(jī)檢測(cè)至少10000個(gè)細(xì)胞,采用CD45/SSC雙參數(shù)設(shè)門,分析細(xì)胞群表面抗原表達(dá)情況,出現(xiàn)兩系以上標(biāo)記則加做胞漿抗原cMPO/cCD79α/cCD3/CD45。結(jié)果判斷以幼稚細(xì)胞表面抗原表達(dá)≥20%為陽(yáng)性,胞漿抗原表達(dá)≥10%為陽(yáng)性。1.4統(tǒng)計(jì)方法陽(yáng)性率比較采用χ2檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1cml-mal、t系、髓系混合表達(dá)比例的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析CML-AML、CML-ALL、CML-MAL在CML-BC中的比例及AML、ALL、MAL在AL中的比例見(jiàn)一般資料(表1)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,CML-ALL在CML-BC中的比例低于ALL在AL中的比例,CML-MAL在CML-BC中的比例高于MAL在AL中的比例(P<0.05)。4例MAL中3例為T系、B系混合表達(dá);1例為T系、髓系混合表達(dá)。3例CML-MAL中均為B系、髓系混合表達(dá)。2.2cd7和cd32表達(dá)比較分別將各抗原在CML-BC與AL中的表達(dá)情況整理如表3所示,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn):CML-AML中CD7及CD34表達(dá)高于與AML;CML-ALL中CD20表達(dá)高于ALL,CD13表達(dá)低于ALL(P<0.05)。MAL與CML-MAL組因病例數(shù)太少未作統(tǒng)計(jì)學(xué)比較。CML-BC與AL之間各單抗表達(dá)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別。2.3cd7與cd3g共陽(yáng)性表達(dá)CML-BC、CML-AML、CML-ALL、CML-MAL、AL、AML、ALL、MAL中CD7與CD34共陽(yáng)性表達(dá)分別為28.3%、29.7%、16.7%、33.3%、14.8%、16.2%、10.9%、50.0%,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn):CML-AML中CD7與CD34共陽(yáng)性表達(dá)高于AML,CML-BC中CD7與CD34共陽(yáng)性表達(dá)高于AL(P<0.05)。2.4計(jì)其構(gòu)成參照2001年世界衛(wèi)生組織(WHO)的免疫表型積分標(biāo)準(zhǔn)將CML-BC與AL分別分為純型、變異型、裸型、混合型4個(gè)亞型,并分別統(tǒng)計(jì)其構(gòu)成(見(jiàn)表4、表5)。本組276例AML中,純型占62.3%(172/276),變異型占37.7%(104/276);130例ALL中,純型占44.6%(58/130),變異型占55.4%(72/130);42例CML-AML中,純型占59.5%(25/42),變異型占40.5%(17/42);8例CML-ALL中,純型占50.0%(4/8),變異型占50.0%(4/8)。2.5變異型cml-東南角表達(dá)的t系及髓系產(chǎn)物變異型CML-AML伴隨表達(dá)的淋系抗原依次為CD7(73.3%)、CD10(20.0%)、CD19(20.0%)、CD2(14.3%)、CD20(7.7%),AML伴隨表達(dá)的淋系抗原依次為CD7(58.7%)、CD19(25.2%)、CD2(20.6%)、CD10(13.6%)、CD20(1.0%);變異型CML-BALL伴隨表達(dá)的T系及髓系抗原依次為CD33(75.0%)、CD2(33.3%)、CD7(33.3%)、CD13(25.0%),BALL伴隨表達(dá)的T系及髓系抗原依次為CD33(64.7%)、CD13(38.2%)、CD2(29.4%)、CD7(20.6%)、CD14(2.9%);CML-TALL僅1例,為純型,變異型T-ALL伴隨表達(dá)的B系及髓系抗原依次為CD33(75.0%)、CD10(25.0%)、CD19(25.0%)、CD13(25.0%)。3cd7與cd治療CML是多能干細(xì)胞克隆性疾病,急變時(shí)可表現(xiàn)為多種類型,急變?yōu)榧毙粤＜?xì)胞白血病最為多見(jiàn),其次為急淋變,也有報(bào)道急變?yōu)榧毙跃藓思?xì)胞白血病、急性NK細(xì)胞白血病等多種類型的病例。其根本原因在于干細(xì)胞分化過(guò)程中被阻滯在不同階段,導(dǎo)致某類幼稚細(xì)胞的聚集。流式細(xì)胞儀的應(yīng)用對(duì)于AL的亞型鑒別有重要意義,免疫分型已經(jīng)成為AL的MICM診斷的重要組成部分。雖然目前免疫分型對(duì)CML慢性期的診斷幫助甚微,但對(duì)于急變期的檢測(cè)意義重大,明確慢性髓系白血病急變的類型在臨床工作中至關(guān)重要。急淋變的患者較其他急變種類有相對(duì)長(zhǎng)的生存期,對(duì)于化療藥物較敏感,緩解率高。本次研究58例CML-BC中,CML-AML占77.6%,稍高于文獻(xiàn)報(bào)道的58.2%～74.2%;CML-ALL占13.8%,略低于文獻(xiàn)報(bào)道的16.1%～37.93%;CML-MAL占5.2%,均為B系及髓系積分≥2.0,與Favre等的報(bào)道類似。本研究中420例AL中,AML占66.2%,ALL占32.9%,MAL占1.0%,CML-ALL在CML-BC中的比例低于ALL在AL中的比例,CML-MAL在CML-BC中的比例高于MAL在AL中的比例(P<0.05),體現(xiàn)了CML-BC與AL的亞型構(gòu)成差異。CD7主要表達(dá)于所有胸腺細(xì)胞、大部分外周血T淋巴細(xì)胞和起源于T淋巴系的白血病細(xì)胞表面,并且先于T系其他抗原出現(xiàn),是T系早期的一個(gè)良好標(biāo)志,但近年的研究已證實(shí)CD7抗原并非T系特異性標(biāo)志,具有多向分化潛能的造血干/祖細(xì)胞階段也可表達(dá)此抗原。CD34是一種階段特異性而非系列特異性的細(xì)胞分化抗原,能選擇性地表達(dá)于造血干細(xì)胞、祖細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和胚胎成纖維細(xì)胞膜上。正常骨髓CD34陽(yáng)性細(xì)胞包括各系集落形成細(xì)胞及其前體細(xì)胞,在最早期的造血細(xì)胞有高水平表達(dá),但隨著細(xì)胞的成熟,其表達(dá)水平下降。Banavali等研究發(fā)現(xiàn),CML慢性期、加速期、急變期CD34陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,尤其在加速期和急變期分別為(37.3±13.3)%及(58.0±7.3)%。本研究中CML-AML中CD7及CD34表達(dá)高于AML,且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,因此推測(cè)CML-AML干細(xì)胞分化過(guò)程中被阻滯在較AML更早的階段,惡性程度更高。Normann等的研究發(fā)現(xiàn),在CML中所有有急變傾向的患者都是CD7與CD34共陽(yáng)性的,因此推測(cè)有影響預(yù)后的意義。Kosugi等研究表明,CML患者的CD34+、CD7+細(xì)胞比例跟治療反應(yīng)及病程有密切的關(guān)系。在AML的研究中,亦有報(bào)道CD7與CD34共陽(yáng)性表達(dá)者預(yù)后差,生存期短,化療緩解率低,與CML-BC一致。自流式細(xì)胞術(shù)廣泛應(yīng)用于AL的鑒別診斷以來(lái),多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)在AL中有相當(dāng)比例伴有其他系列的抗原表達(dá)。Ly+AML通常被認(rèn)為預(yù)后較Ly-AML差。Ball等研究了339例AML患者發(fā)現(xiàn)Ly+AML組的核型異常比例高,初治緩解率低,復(fù)發(fā)時(shí)間短,長(zhǎng)期生存率低。Khalidi等報(bào)道AML中48.1%伴淋系表達(dá),按表達(dá)頻率依次為CD20、CD7、CD19、CD2、CD3、CD5、CD10。本研究中AML變異型占37.7%,CD20表達(dá)率很低,原因不明,其他抗原的表達(dá)情況與文獻(xiàn)報(bào)道相符。Plensa等的研究發(fā)現(xiàn)222例ALL患者中,43%伴髓系抗原表達(dá),但其主要的臨床和生物學(xué)指標(biāo)與My-ALL無(wú)明顯差別,治療后CR率、EFS、OS也無(wú)明顯差別,而治療起效的速度較My+ALL慢,因此伴髓系抗原表達(dá)并非影響ALL預(yù)后的因素。同樣,CML-BC中也發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象,Motoji等的研究指出,相比AML而言,CML-AML的伴隨抗原表達(dá)更加復(fù)雜,常伴有巨核系、紅系及NK細(xì)胞表面抗原的表達(dá),60%～80%的CML-ALL伴有髓系抗原表達(dá)。本次研究中CML-ALL變異型占50%,與ALL的變異型發(fā)生率并無(wú)