維生素的測定

第三章維生素的測定

維生素廣泛存在于各種生物體中，其種類繁多，化學(xué)結(jié)構(gòu)與生理功能各異。因此無法按照結(jié)構(gòu)或功能分類。按其溶解性可分為脂溶性(VA、VD、VE、VK)和水溶性(VBl、VB2、VB6、VBl2、VP、VPP、Vc)兩大類。1整理ppt維生素是人體生命活動不可缺少的營養(yǎng)物質(zhì)，它們一般在動物和人體內(nèi)不能合成或合成數(shù)量少，滿足不了動物和人體的需要，必須依靠從食物中攝取。在食物中缺乏了任何一種維生素，人和動物都會發(fā)生特有的缺乏病癥，如缺乏維生素A、B和C時，可分別引起夜盲癥、腳氣病和壞血病等，嚴(yán)重時足以致命。某些維生素含量的上下，是評價農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)的重要指標(biāo)之一。2整理ppt維生素是維持人體正常生理功能所必需的一類有機化合物。維生素按其溶解性可分為：水溶性維生素抗壞血酸〔Vc〕具有酸性和強復(fù)原性，水果中柑橘、檸檬含量較高，為40-50mg%，紅果和棗的含量更高，棗中540mg%。3整理ppt硫胺素〔VB1〕缺少，那么神經(jīng)組織功能缺乏，可出現(xiàn)相應(yīng)的神經(jīng)肌肉病癥如多發(fā)性神經(jīng)炎、肌肉萎縮及水腫。谷類、豆類及肉類含量較多，動物性食品中以肝、腎、腦含量較多。核黃素〔VB2〕需要量與能量代謝有關(guān)。動物性食品比植物性食品含量高，肝臟達(dá)2mg/100g煙酸〔Vpp〕可預(yù)防癩皮病發(fā)生。含量最多的是蘑菇、酵母等，肝臟為10mg/100g。葉酸葉酸為各種細(xì)胞生長所必需。動物肝臟、豆類、各種綠葉蔬菜和水果含量較多。4整理ppt維生素B6可幫助糖類、脂肪和蛋白質(zhì)分解、利用，也幫助糖元由肝臟或肌肉中釋放熱能。蛋黃、肉、魚、乳，以及谷類、種子外皮、蔬菜含量豐富。維生素B12唯一含金屬〔鈷〕的維生素，機體中含量降至0.5mg/100g左右便會出現(xiàn)貧血，即惡性貧血。主要來源為肉類，以內(nèi)臟、魚類、蠔類及蛋類為多。泛酸〔VB3〕與糖類、脂肪和蛋白質(zhì)代謝有密切關(guān)系。廣泛存在于動、植物食品中。生物素參與體內(nèi)的固定CO2〔羧化〕和轉(zhuǎn)羧基作用。分布廣泛，腸道細(xì)菌亦能合成。5整理ppt脂溶性維生素VA具有促進(jìn)正常生長與繁殖、維持上皮組織與視力正常的生理功能。只存在于動物性食品中，肝、腎雞蛋、魚卵和全奶等。植物那么可提供作為維生素A元的類胡蘿素或胡蘿卜素，如菠菜、胡蘿卜、紅心甘薯、辣椒，以及水果如杏、柿子等。VD人體VD的主要來源并非食物，而是皮下7-脫氫膽固醇經(jīng)紫外線照射轉(zhuǎn)變而來。海水魚的肝臟含量最為豐富。6整理ppt

VE

具有抗氧化的功能，與機體的抗衰老有關(guān)。人體所需大多來自谷類于植物油。

VK

作用主要是促進(jìn)肝臟生產(chǎn)凝血酶原，從而具有促進(jìn)凝血作用。綠葉蔬菜含量最為豐富，蛋黃、大豆油和豬肝也是良好來源。7整理ppt維生素的分析是一項比較復(fù)雜的工作。其樣品分析的一般程序是：①用酸、堿或酶分解樣品，使其中的維生素游離出來；②用溶劑進(jìn)行提??；③別離干擾物質(zhì)，對樣液進(jìn)行別離提純；④用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行定量等。維生素的分析方法很多，選用方法時應(yīng)根據(jù)樣品的品種、類型、待測維生素的性質(zhì)、含量以及干擾物質(zhì)多少等因素來決定。下面重點介紹維生素C、維生素B1和B2以及作為維生素A原的β-胡蘿卜素的測定。8整理ppt一、維生素C的測定維生素C又稱抗壞血酸?！?〕純品為白色無臭結(jié)晶，熔點為190～192℃。〔2〕溶于水或乙醇中，不溶于油劑。〔3〕在水溶液中易被氧化，在堿性條件下易分解，在弱酸條件下較穩(wěn)定。9整理ppt10整理ppt11整理ppt總抗壞血酸包括復(fù)原型、氧化型抗壞血酸和2,3-二酮古樂糖酸。Vc測定主要有：測定復(fù)原型Vc和氧化型Vc的總含量〔如熒光法，2,4－二硝基苯肼法、高效液相色譜法等)及復(fù)原型Vc測定法(2,6－二氯靛酚滴定法，電位滴定法，碘滴定法，鉬藍(lán)比色法，碘酸鉀萃取分光光度法等)兩類,其中,有些方法既可測定Vc全量,也可測定復(fù)原型Vc,如酶法。12整理ppt高效液相色譜法、熒光法要求樣品的純度較高，高效液相色譜法可以同時測得抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的含量，具有干擾少，準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性好，靈敏、簡便、快速等優(yōu)點，是上述幾種方法中最先進(jìn)、可靠的方法，但需要有昂貴的儀器，目前尚無法普遍采用。

13整理ppt2.6-二靛酚滴定法測定的是復(fù)原型抗壞血酸，該法簡便，也較靈敏，但特異性差，樣品中的其他復(fù)原性物質(zhì)(如Fe2+、Sn2+、Cu2+等)會干擾測定，使測定值偏高。對深色樣液滴定終點不易區(qū)分，如山楂，樹莓，草莓等。14整理ppt2,4-二硝基苯肼比色法和熒光法測得的是抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的總量，操作麻煩，耗時較長。但也易受色素影響,當(dāng)待測液本身有顏色時,消光值會受到影響,從而影響到測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。15整理ppt鉬藍(lán)比色法那么不然,該法不易受樣品提取液顏色的影響。紫外分光光亮法是操作簡便，不受樣品提取液顏色的影響，但是重復(fù)間偏差較大。碘滴定法不適于花青素含量高的果蔬樣品Vc測定。16整理ppt17整理ppt18整理ppt19整理ppt20整理ppt〔一〕復(fù)原型維生素C的測定維生素C具有較強的復(fù)原性，對光敏感，氧化后的產(chǎn)物稱為脫氫抗壞血酸，仍然具有生理活性。進(jìn)一步水解那么生成2，3-二酮古樂糖酸，失去生理作用。在食品中，這三種形式均有存在，但主要是前兩者，故許多國家的食品成分表均以抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的總量表示。21整理ppt22整理ppt1、方法原理抗壞血酸(Vc)結(jié)構(gòu)中有烯二醇存在，因此具有復(fù)原性，能將藍(lán)色染料2，6-二氯靛酚復(fù)原為無色的化合物，Vc那么被氧化為脫氫Vc，反響式如下：23整理ppt2,6-二氯靛酚具有酸堿指示及氧化復(fù)原指示的兩種特性。氧化態(tài)時呈深藍(lán)色(堿介質(zhì)中)或淺紅色(酸性介質(zhì)，變色范圍pH4～5)，復(fù)原態(tài)時為無色。根據(jù)這個特性．用堿性藍(lán)色染料的標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定植物樣品酸性浸出液中Vc到剛變淺紅色為終點，由染料的用量即可計算Vc的含量。滴定終點的紅色是剛過量的未被復(fù)原的(氧化型)染料溶液在酸性介質(zhì)中的顏色。24整理ppt2、注釋〔1〕偏磷酸是Vc的最正確穩(wěn)定劑，且具有沉淀蛋白質(zhì)的作用。但其價格較貴，在室溫下放置易轉(zhuǎn)化為正磷酸，降低對Vc的穩(wěn)定性。草酸廉價易得,有與磷酸相近的穩(wěn)定性。而醋酸適于浸提含有Fe2+的樣品。根據(jù)Vc在酸性溶液中相對較穩(wěn)定這一特性，歷來采用的提取劑都是各種各樣的酸性溶液,現(xiàn)在一般采用的主要是2%偏磷酸、2%草酸溶液，其次是8%醋酸、10%三氯乙酸及偏磷酸-醋酸混合液。25整理ppt26整理ppt27整理ppt(2)所用的提取劑草酸、標(biāo)定Vc用的碘酸液以及標(biāo)準(zhǔn)Vc液均不穩(wěn)定，須避光、低溫保存。碘酸液以貯備液保存〔較高濃度，0.1mol·L-1〕。Vc臨用臨配，不能加熱配制。(3)樣品采取后，應(yīng)浸泡在量的2％草酸溶液中，以防止抗壞血酸氧化損失。測定時整個操作過程要迅速，防止抗壞血酸被氧化。28整理ppt(4)KIO3與復(fù)原Vc的主要反響如下：從上述反響式可知1mol(1/6KIO3)與1mol(1/2C6H8O6)完全反響，故1/2C6H8O6的摩爾質(zhì)量為88g·mol-1。29整理ppt(5)2,6-二氯靛酚固體試劑有時含有分解產(chǎn)物，染料溶液長久貯存時也會生成分解主物，從而使滴定終點不敏銳，因此應(yīng)在使用前檢查。檢查方法：取15mL染料溶液參加過量的Vc溶液，假設(shè)復(fù)原后的溶液帶有顏色，表示此溶液已不能使用。保存在棕色瓶和冰箱中。30整理ppt(6)使用白陶土?xí)r，要對每批新的白陶土測定對Vc的回收率。(7)樣品中可能有其它復(fù)原性物質(zhì)也可使染料復(fù)原。但其復(fù)原染料的速度較慢，故滴定終點以淺紅色在15s不褪色為準(zhǔn)。(8)本法適用于測定復(fù)原型抗壞血酸，不適于有亞鐵、亞錫、亞銅、亞硫酸鹽或硫代硫酸鹽共存的樣品。31整理ppt(9)樣品切碎、縮分及稱量等過程會使樣品切口接觸空氣而促進(jìn)維生素C氧化，應(yīng)盡量動作迅速,Vc提取液對光敏感，操作室內(nèi)應(yīng)設(shè)置窗簾，以防加速Vc氧化。(10)所有試劑最好用重蒸餾水配制。(11)標(biāo)定靛酚滴定液時與滴定樣品液時，滴定終點的掌握應(yīng)嚴(yán)格一致，否那么將引起誤差。(12)測定樣液時，需做空白對照，樣液滴定體積扣除空白體積。32整理ppt(13)Vc的含量隨樣品個體或部位的不同差異很大，因此測定Vc時取樣的代表性尤為重要。測定樣品平均含量時，一般至少取均勻個體5個以上，縱切分成4－8等分，再分別取對角的2-4片，切碎，充分混合后四分法分取樣。(14)滴定時，可同時吸二個樣品。一個滴定，另一個作為觀察顏色變化的參考。(15)在處理各種樣品時，如遇有泡沫產(chǎn)生，可參加數(shù)滴辛醇消除。〔16〕復(fù)原型Vc含量〔mg.kg-1〕<100允許誤差〔mg.kg-1〕5.0，100-1000允許10.033整理ppt〔二〕維生素C總量的測定(2，4－二硝基苯肼比色法)1、方法原理：Vc總量包括復(fù)原型Vc、脫氫型Vc和二酮古樂糖酸，將樣品中的復(fù)原型抗壞血酸氧化為脫氫抗壞血酸，進(jìn)一步水解為二酮古樂糖酸。二酮古樂糖酸與2,4-二硝基苯肼耦聯(lián)生成紅色的脎。其呈色的強度與二酮古樂糖酸濃度成正比，可以比色定量。34整理ppt2、操作步驟稱樣→加等量2%草酸→于高速搗碎機搗碎→取勻漿20g→用1%草酸定容100ml→過濾→取濾液10ml→加1%草酸10ml→加少量活性炭→搖1分鐘→靜置過濾→各取濾液2ml于樣品管和樣品空白管→各管參加1滴硫脲溶液→于樣品管中參加2，4-二硝基苯肼0.5ml→分別于兩個管加蓋→于37℃保溫箱3小時35整理ppt保溫箱3小時→取出后樣品管放入冰水中→樣品空白管取出后冷至室溫→在樣品空白管參加2，4-二硝基苯肼→0.5ml→樣品管和空白管都于冰浴中→滴加9︰1H2SO42ml于各管中→邊滴邊搖→防止溫度升高炭化后呈黑色→冰浴中取出→室溫下放置30分鐘后，在540nm測消光值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的含量。36整理ppt3、本卷須知〔1〕本法為國家標(biāo)準(zhǔn)方法，適用于蔬菜、水果及其制品中總抗壞血酸的測定?！?〕硫脲可防止Vc被氧化，且可幫助脎的形成，最終溶液中硫脲的濃度應(yīng)一致，否那么影響色度。〔3〕參加H2SO4(9︰1)溶液后試管從冰水中取出，溶液顏色會繼續(xù)變深，所以必須準(zhǔn)確參加H2SO4后．30min內(nèi)比色(糖存在造成顯色不穩(wěn)定,顏色會逐漸加深)。37整理ppt(4)活性炭對抗壞血酸的氧化作用，是基于其外表吸附的氧進(jìn)行界面反響，參加量過低，氧化不充分，測定結(jié)果偏低，參加量過高，對抗壞血酸有吸附作用，使結(jié)果也偏低?；钚蕴宽毘浞炙峄拍苡休^強的氧化能力，且具有除色素的雙重作用。1mol·L-1HCl,100g于750ml，煮沸1-2h，沸水洗滌至無Fe2+，烘干。38整理ppt(5)2,4-二硝基苯肼和氧化型Vc藕聯(lián)形成脎在脫水氧化環(huán)境下才穩(wěn)定。(6)溶液中其他的酮和酮衍生物和2,4-二硝基苯肼也形成脎，故須作空白試驗〔指沒有Vc參與下形成脎的量〕。(7)硫脲可防止抗壞血酸繼續(xù)氧化，同時促進(jìn)脎的形成。最后溶液中硫脲的濃度要一致，否那么影響測定結(jié)果。39整理ppt(8)測定波長一般在495～540nm，樣品雜質(zhì)多時在540nm較適宜，但靈敏度較最大吸收波長(520nm)下的靈敏度降低30％。(9)加9:1硫酸溶液時，為防止溶液中的糖炭化而變黑色，需邊滴加邊搖試管。40整理ppt二、維生素B1、B2

測定VB1又叫硫胺素，VB1是一種重要的維持人體代謝平衡的物質(zhì),缺乏時可能引起腳氣病、多發(fā)性神經(jīng)炎等疾病。VB1存在于糙米、酵母、谷類、肝、肉類、豆類及其他動植物組織中，動物組織不如植物含量豐富。測定VB1的方法有重量法、滴定法、熒光法、電位法及示波電位滴定法等。世界各國都用熒光法測定。41整理ppt〔一〕VB1的性質(zhì)⑴VB1在中性、堿性下不穩(wěn)定，易分解；⑵VB1在酸性條件下穩(wěn)定，即使加熱酸性也穩(wěn)定；⑶VB1為白色結(jié)晶，微溶于C2H5OH，不溶于乙醚或CHCl3，易溶于水。42整理ppt〔二〕VB2〔核黃素〕的性質(zhì)⑴VB2在中性水里溶解極少，呈黃綠色的熒光，在強酸性和強堿性溶液中那么充分溶解。(2)橙黃色針狀結(jié)晶，熔點為282℃的，耐熱，對空氣、氧氣穩(wěn)定。測定VB2的方法有光黃素?zé)晒夥ā⒑它S素?zé)晒夥?、高效液相色譜法。光黃素?zé)晒夥`敏度和精密度都較高，適用于測定農(nóng)產(chǎn)品中的VB2。高效液相色譜法測定維生素具有簡便、快速，可同時進(jìn)行多種水溶性維生素測定等優(yōu)點，是近年開展較快的測定方法。43整理ppt〔三〕VB1和VB2的測定〔液相色譜法〕1、方法原理：樣品在稀鹽酸溶液中經(jīng)消化，用淀粉酶和木瓜酶分解樣液中的淀粉和蛋白質(zhì)后，即得到VB2的測定樣液。此溶液在堿性鐵氰化鉀溶液中氧化后用異丁醇提取所得VB1測定樣液。然后用YWG-Cl8柱,乙腈－磷酸鹽緩沖溶液作流動相，以熒光檢測器進(jìn)行液相色譜法測定，求出樣品中VB1和VB2的含量。44整理ppt2、操作步驟(1)樣品處理固體樣品粉碎過20目篩，果蔬、肉類及水產(chǎn)品經(jīng)搗碎備用。稱取試樣1.00g(VB1和VB2含量不低于0.5μg)于50mL棕色容量瓶中，參加0.1mol·L-1鹽酸溶液35ml，在超聲波浴中超聲3min或轉(zhuǎn)動搖勻，在高壓滅菌鍋內(nèi)121℃保持20～30min或置于沸水浴中加熱30min，然后輕搖數(shù)次，取出，冷卻至40℃以下，分別加混合酶液各2.5mL，搖勻，置于37℃下過夜或42～43℃加熱4h，冷卻，用水定容。樣液經(jīng)3000r/min速度離心過濾，取約10ml，濾液備用。然后取濾液直接進(jìn)行VB2測定。45整理ppt取上述濾液5ml于60ml分液漏斗中，沿分液漏斗壁加堿性鐵氰化鉀溶液3ml(邊搖邊加)，繼續(xù)振搖10s，立即參加異丁醇8ml，并猛烈振搖45s．靜置分層后棄去水層。有機相通過無水硫酸鈉小柱，其收集液為VB1待測液。(2)標(biāo)準(zhǔn)溶液制備。準(zhǔn)確吸取2mg·L-1VB1和VB2混合工作液0、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00ml，于50ml棕色容量中，再參加與樣品等量的0.1mol·L-1鹽酸，以下操作同樣品處理，得到VB2標(biāo)準(zhǔn)系列水溶液和VB1標(biāo)準(zhǔn)系列異丁醇溶液。(3)樣品測定。46整理ppt4、注釋〔1〕VB2測定用消化后的濾液直接進(jìn)樣，處理后的標(biāo)準(zhǔn)和樣品都有雜質(zhì)峰，但能別離VB2，不影響測定?！?〕由于VB1被堿性鐵氰化鉀氧化并不是定量產(chǎn)生硫色素，但在恒定條件下是一個恒量。用異丁醇萃取的VB1也是如此。因此本法采取等體積進(jìn)樣?！?〕樣品處理是能否獲得滿意結(jié)果的關(guān)鍵。47整理ppt〔4〕液相色譜儀需有：a.熒光分光光度檢測器及記錄儀；b.色譜柱〔5〕VB1和VB2測定時所用的流動相不同。VB1：用流動相A，以磷酸鹽緩沖液80份〔0.025mol·L-1磷酸緩沖液，pH＝7.4〕和乙腈20份相混而成；VB2：流動相B，以磷酸鹽緩沖液82份和乙腈18份混合而成。48整理ppt〔6〕堿性鐵氰化鉀溶液。吸取150g·L-1氫氧化鈉溶液97mL參加10g·L-1鐵氰化鉀3mL混合而成。混合酶溶液〔淀粉酶和木瓜酶各3g，用2mol·L-1醋酸鈉稀釋至100mL〕〔7〕測時時儀器條件〔參考〕VB1：激發(fā)波長435nm，狹縫為10nm，發(fā)射波長為375nm，狹縫為12.5nm，靈敏度10。VB2：激發(fā)波長440，發(fā)射波長為565,狹縫為12.5nm，靈敏度3,其他同VB1。49整理ppt50整理ppt51整理ppt52整理ppt53整理ppt54整理ppt55整理ppt56整理ppt三、紙層析法測定β－胡蘿卜素胡蘿卜素原只存在于植物性食品中，但以含有胡蘿卜為食物的家禽、獸類、水產(chǎn)動物及其加工產(chǎn)品，以及為著色而添加胡蘿卜素的食品，也含有胡蘿卜素。胡蘿卜或濃縮胡蘿卜汁中胡蘿卜素含量的多少是評價其品質(zhì)優(yōu)劣的重要指標(biāo)和開發(fā)利用的主要依據(jù)。胡蘿卜素對熱及酸、堿比較穩(wěn)定，但紫外線和空氣中的氧可促進(jìn)其氧化破壞。因?qū)儆谥苄跃S生素，故可用有機溶劑從農(nóng)產(chǎn)品中提取。57整理ppt胡蘿卜素是具有類似維生素A的生物活性和效力的物質(zhì)，稱維生素A原。胡蘿卜素常有α、β、γ幾種異構(gòu)體，其中以β胡蘿卜素的生理效能最大。在動物的小腸內(nèi)、肝臟中轉(zhuǎn)化為維生素A。結(jié)構(gòu)式如下：58整理pptβ-胡蘿卜素是植物色素，存在于谷物、蔬菜、水果等食物中。以每百克可食局部計，小米0.12mg、玉米0.34mg、玉米面0.13mg、黃豆0.40mg、黃豆粉0.48mg、綠豆0.22mg、毛豆0.23mg.因β-胡蘿卜素是有色色素，可采用直接比色法定量分析。但在植物體內(nèi)，胡蘿卜素經(jīng)常與葉綠素、葉黃素等共存，在提取β－胡蘿卜素時，這些色素也能被有機溶劑提取，因此在測定前，必須將胡蘿卜素與其他色素分開。59整理ppt目前測定胡蘿卜素的方法主要有以下幾種:

紙層析法;薄層層析法;柱層析法;分光光度法;高效液相色譜法或液質(zhì)聯(lián)用法。60整理ppt

61整理ppt紙層析法：是一種操作方便且易于掌握，同時可測定多種樣品，測定結(jié)果具有較高的準(zhǔn)確度和精密度，線性相關(guān)極顯著，不需要特定的設(shè)備，本錢較低，適合條件較簡陋，普通實驗室均可采用的測定β-胡蘿卜素含量的方法。62整理ppt(一)紙層析的原理根據(jù)固定相的形式把固定相裝于管子中的色譜稱為柱色譜，把固定相成平面板狀的色譜稱為平板色譜，如紙層析、薄層層析。紙層析是以濾紙纖維及其結(jié)合水形成的復(fù)合物作為固定相。將待別離的樣品溶液點在濾紙的一端，在密閉的容器中，用適宜的溶劑(展開劑)作為流動相，帶動樣品斑點，從濾紙的一端向另一端遷移，此稱為展開。63整理ppt由于樣品中，各組分與濾紙親和力的強弱差異，及在展開劑中溶解度的大小不同，在展開過程中，經(jīng)過反復(fù)的吸附、解吸，經(jīng)一定時間產(chǎn)生差速遷移，使樣品中各組分得以別離。經(jīng)顯色劑顯色，可在濾紙上看到別離的斑點。這些斑點就是通常所說的色譜。在兩相中，吸附力強、溶解度大的組分，遷移速度快，斑點離原點距離就大，反之距離就小。各組分在濾紙中的位置，可用比移值Rf來表示。根據(jù)Rf值可以定性，根據(jù)斑點大小及顏色深淺可以定量。

64整理ppt常用的展開劑有：正乙烷(石油醚)、正庚烷、環(huán)己烷、四氯化碳、甲苯、苯、乙醚、CH2Cl2、CHCl3、乙酸乙酯、吡啶、丙酮、丁醇、丙醇、乙醇、甲醇、乙酸、水、氨水。65整理ppt(二)胡蘿卜素的層析別離及定量測定1、原理：以丙酮和石油醚提取農(nóng)產(chǎn)品中的胡蘿卜素及其他植物色素；以石油醚為展開劑進(jìn)行紙層析，胡蘿卜素極性最小，移動速度最快，從而與其他色素別離；剪下含胡蘿卜素的區(qū)帶、洗脫后于450nm波長下定量測定。66整理ppt2、樣品的采集和處理(1)糧食：樣品用水洗3次，置60℃烤箱中烤干，磨粉，貯于塑料瓶內(nèi)，放一小包樟腦精，蓋緊瓶塞保存，備用。(2)蔬菜與其他植物性食品：取可食部用水沖洗3次后，用紗布吸去水滴，切碎，用勻漿器制成勻漿，貯于塑料瓶內(nèi)冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?7整理ppt3．測定步驟以下步驟需在避光條件下進(jìn)行。(1)樣品提?。孩偃∵m量樣品，相當(dāng)于原樣1～5g(含胡蘿卜素約20～80μg)的勻漿，糧食樣品視其胡蘿卜素含量而定，置100mL帶塞錐形瓶中，參加丙酮20mL，石油醚5mL，振搖1min，靜置5min，將提取液轉(zhuǎn)入盛有100mL50g／L硫酸鈉溶液的分液漏斗中，再于錐形瓶中參加10mL丙酮+石油醚混合液，振搖1min，放置5min，將提取液并入分液漏斗中，如此提取2～3次，直至提取物無色為止。68整理ppt②植物油和高脂肪樣品：需先皂化，取適量樣品(小于10g)，加脫醛乙醇30mL，再加10mL氫氧化鉀溶液，回流加熱30min，然后用冰水使之迅速冷卻，皂化后樣品用石油醚提取，直至提取液無色為止。69整理ppt(2)洗滌：①將提取液3(1)①靜置分層，棄去下層水溶液，反復(fù)用50g／L硫酸鈉溶液振搖洗滌，每次約15mL，直至下層水溶液清亮為止。②將皂化后樣品提取液3(1)②用水洗滌至中性。③將①或②的石油醚提取液通過盛有10g無水硫酸鈉的小漏斗，漏入球形瓶，用少量石油醚分?jǐn)?shù)次洗凈分液漏斗和無水硫酸鈉層內(nèi)的色素，洗滌液并入球形瓶內(nèi)。70整理ppt(3)濃縮與定容：將上述球形瓶內(nèi)的提取液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上減壓蒸發(fā)，水浴溫度為60℃，蒸發(fā)至約1mL時，取下球形瓶，用氮氣吹干，立即參加2.00mL石油醚定容，備層析用。(4)紙層析：①點樣：點樣在18cm×30cm濾紙下端距底邊4cm處點樣，各點相距4cm，點樣量0.100～0.400mL樣品濃縮液,形成的色斑應(yīng)盡量小且規(guī)那么整齊。AB和CD間迅速點樣。71整理ppt72整理ppt②展開：待紙上所點樣液自然揮發(fā)干后，將濾紙卷為圓