微生物學(xué)采樣細(xì)菌

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微生物學(xué)樣品采集方法

1整理ppt2良好的樣品采集、保存、運(yùn)送是微生物檢驗(yàn)質(zhì)量保證最重要的前提條件。采集的樣品的質(zhì)量常常決定了檢驗(yàn)結(jié)果，從而直接影響食物中毒的處理工作。2整理ppt3食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)——

GB4789.1-?總那么4樣品的采集4.1采樣原那么4.1.1根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康?、食品特點(diǎn)、批量、檢驗(yàn)方法、微生物的危害程度等確定采樣方案。4.1.2應(yīng)采用隨機(jī)原那么進(jìn)行采樣，確保所采集的樣品具有代表性。4.1.3采樣過程遵循無菌操作程序，防止一切可能的外來污染。4.1.4樣品在保存和運(yùn)輸?shù)倪^程中，應(yīng)采取必要的措施防止樣品中原有微生物的數(shù)量變化，保持樣品的原有狀態(tài)。3整理ppt44.2采樣方案4.2.1類型二級(jí)采樣方案設(shè)有n、c和m值三級(jí)采樣方案設(shè)有n、c、m和M值n：同一批次產(chǎn)品應(yīng)采集的樣品件數(shù)c：最大可允許超出m值的樣品數(shù)m:微生物指標(biāo)可接受水平的限量值M:微生物指標(biāo)的最高平安限量值注1：二級(jí)采樣方案-n個(gè)樣品中允許有≤c個(gè)樣品其相應(yīng)微生物指標(biāo)檢驗(yàn)值大于m值注2：三級(jí)采樣方案-n個(gè)樣品中允許全部樣品中相應(yīng)微生物指標(biāo)檢驗(yàn)值小于或等于m值；允許有≤c個(gè)樣品其相應(yīng)微生物指標(biāo)檢驗(yàn)值在m值和M值之間；不允許有樣品相應(yīng)微生物指標(biāo)檢驗(yàn)值大于M值。4整理ppt5

按采樣方案的結(jié)果判定

按三級(jí)采樣方案設(shè)定的指標(biāo):n=5,c=2,m=100cfu/g,M=1000cfu/g假設(shè)5個(gè)樣品的檢驗(yàn)結(jié)果均小于或等于m值〔≤100cfu/g〕√假設(shè)≤2個(gè)樣品位于m和M之間〔100cfu/g<X≤1000cfu/g〕√假設(shè)3個(gè)及以上樣品的檢驗(yàn)結(jié)果位于m值和M值之間X假設(shè)有任一樣品的檢驗(yàn)結(jié)果大于M值〔>1000cfu/g〕X5整理ppt6

例1：嬰幼兒配方粉微生物標(biāo)準(zhǔn)CODEOFHYGIENICPRACTICEFORPOWDEREDFORMULAEFORINFANTSANDYOUNGCHILDREN〔2004－2007〕微生物/采樣方案

ncmM致病菌阪崎腸桿菌3000/100gNA

沙門氏菌6000/25gNA加工衛(wèi)生指標(biāo)菌落總數(shù)52500/g5000/g

腸桿菌1020/25gNA6整理ppt7

例2：速凍預(yù)包裝面米食品－微生物指標(biāo)

項(xiàng)目指標(biāo)生制品熟制品ncm（cfu/g）M（cfu/g）ncm（cfu/g）M（cfu/g）菌落總數(shù)－5110000100000大腸菌群－5110100霉菌計(jì)數(shù)－521001000沙門氏菌５００/25g－50０/25g－金黃色葡萄球菌511000/25g10000/25g51100/25g1000/25g單核細(xì)胞增生性李斯特菌a

－50０/25g－a僅適用于以肉、禽、蔬菜為主要原料的速凍熟制品。

7整理ppt84.2.2各類食品的采樣按相應(yīng)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定執(zhí)行4.2.3食源性疾病及食品平安事件中食品樣品的采樣4.2.3.1由工業(yè)化批量生產(chǎn)加工的食品污染導(dǎo)致的食源性疾病或食品平安事件，食品樣品的采集和判定原那么按4.2.1和4.2.2執(zhí)行。同時(shí)，確保采集現(xiàn)場(chǎng)剩余食品樣品。4.2.3.2由餐飲單位或家庭烹調(diào)加工的食品導(dǎo)致的食源性疾病或食品平安事件，食品樣品的采集按GB14938中衛(wèi)生學(xué)檢驗(yàn)的要求執(zhí)行。8整理ppt9GB4789.1-?總那么

4.3各類食品的采樣方法4.3.1即食類預(yù)包裝食品：取相同批次的最小零售原包裝，檢驗(yàn)前要保持包裝的完整，防止污染。4.3.2非即食類預(yù)包裝食品：包裝小于500g的固態(tài)食品或小于500mL的液態(tài)食品，取相同批次最小零售包裝；大于500mL的液態(tài)食品，應(yīng)在采樣前搖動(dòng)或用無菌棒攪拌液體，使其到達(dá)均質(zhì)后分別從相同批次的n個(gè)容器中采集5倍或以上檢驗(yàn)單位的樣品；大于500g的固態(tài)食品，應(yīng)用無菌采樣器從同一包裝的幾個(gè)不同部位分別采取適量樣品，放入同一個(gè)無菌采樣容器內(nèi),采樣總量應(yīng)滿足微生物指標(biāo)檢驗(yàn)的要求。9整理ppt104.3各類食品的采樣方法4.3.3散裝食品或現(xiàn)場(chǎng)制作食品：根據(jù)不同食品的種類和狀態(tài)及相應(yīng)檢驗(yàn)方法中規(guī)定的檢驗(yàn)單位，用無菌采樣器現(xiàn)場(chǎng)采集5倍或以上檢驗(yàn)單位的樣品，放入無菌采樣容器內(nèi),采樣總量應(yīng)滿足微生物指標(biāo)檢驗(yàn)的要求。4.3.4食源性疾病及食品平安事件的食品樣品：采樣量應(yīng)滿足食源性疾病診斷和食品平安事件病因判定的檢驗(yàn)要求。10整理ppt11食源性疾病判定標(biāo)準(zhǔn)及處理總那么

GB14938—修訂要點(diǎn)13.1術(shù)語食源性疾病〔foodbornedisease〕:因攝入食物而導(dǎo)致的感染性或中毒性疾病。食源性感染〔foodborneinfection〕：攝入被細(xì)菌、病毒或寄生蟲污染的食物而引起的感染性疾病。食物中毒〔foodintoxication〕:攝入被生物性毒素、化學(xué)性毒物污染或含有天然毒性成分的食物而引起的急性中毒性疾病。食源性疾病爆發(fā)〔foodbornediseaseoutbreak〕：因攝入相同食物而出現(xiàn)兩例或兩例以上病癥相似病例的事件。食源性疾病散發(fā)〔foodbornediseasesporadicoccurrence〕:單個(gè)病例罹患某種食源性疾病的事件，或兩個(gè)及多個(gè)病例在時(shí)間、地點(diǎn)的分布及病例相互之間并無關(guān)聯(lián)的單個(gè)事件。11整理ppt12食源性疾病判定標(biāo)準(zhǔn)及處理總那么

GB14938—修訂要點(diǎn)23.2分類細(xì)菌性食源性疾?。簲z入含有一定數(shù)量的食源性致病菌或細(xì)菌毒素〔如沙門氏菌、肉毒毒素等〕的食物，而引起的一類感染或中毒性疾病。病毒性食源性疾?。簲z入含有一定數(shù)量的病毒〔如甲肝病毒、諾如病毒等〕的食物而引起的一類感染性疾病。寄生蟲性食源性疾?。簲z入含有一定數(shù)量的感染性寄生蟲〔如廣州管圓線蟲、旋毛蟲等〕的食物而引起的一類感染性疾病。12整理ppt13食源性疾病判定標(biāo)準(zhǔn)及處理總那么

GB14938—?修訂要點(diǎn)2化學(xué)性食物中毒：攝入被某種化學(xué)毒物污染，或在加工制作過程中產(chǎn)生或誤用某種化學(xué)毒物〔如亞硝酸鹽、鋇鹽等〕的食物，而引起的一類急性中毒性疾病。真菌毒素食物中毒：攝入被某種真菌毒素污染〔如嘔吐毒素、3－硝基丙酸等〕的食物，而引起的一類急性中毒性疾病。有毒動(dòng)物食物中毒：攝入含有有毒成分的動(dòng)物性食物〔如河豚魚、有毒貝類等〕所引起的一類急性中毒性疾病。有毒植物食物中毒：攝入含有有毒成分的植物性食物〔如毒蘑菇、菜豆等〕所引起的一類急性中毒性疾病。13整理ppt14GB14938系列標(biāo)準(zhǔn)〔1－13〕食源性疾病判定標(biāo)準(zhǔn)及處理總那么食源性沙門氏菌病判定標(biāo)準(zhǔn)及處理原那么食源性金黃色葡萄球菌腸毒素中毒判定標(biāo)準(zhǔn)及處理原那么食源性副溶血性弧菌病判定標(biāo)準(zhǔn)及處理原那么食源性病原性大腸埃希氏菌病判定標(biāo)準(zhǔn)與處理原那么食源性變形桿菌病判定標(biāo)準(zhǔn)及處理原那么食源性蠟樣芽胞桿菌病判定標(biāo)準(zhǔn)及處理原那么食源性肉毒梭菌病判定標(biāo)準(zhǔn)及處理原那么食源性椰毒假單胞菌酵米面亞種病判定標(biāo)準(zhǔn)及處理原那么食源性單核細(xì)胞增生李斯特菌病判定標(biāo)準(zhǔn)及處理原那么食源性空腸彎曲菌病判定標(biāo)準(zhǔn)及處理原那么食源性志賀氏菌病判定標(biāo)準(zhǔn)及處理原那么食源性阪崎腸桿菌病判定標(biāo)準(zhǔn)及處理原那么14整理ppt15食物中毒現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查常備用品〔1〕采樣工具：注射器、肛拭子、咽拭子、消毒棉簽、消毒紗布、調(diào)匙、勺子、夾子、鑷子、剪刀、屠工用刀、酒精燈、標(biāo)號(hào)用品、75%酒精、其它消毒滅菌器具等。〔2〕樣品容器：滅菌塑料袋、廣口瓶、滅菌試管、滅菌糞便盒、樣品冷藏設(shè)施等15整理ppt16食物中毒現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查常備用品〔3〕防護(hù)用品：工作衣或隔離衣、口罩、白帽子、手套、靴子等?！?〕調(diào)查用表：食物中毒個(gè)案調(diào)查登記表、調(diào)查結(jié)果匯總表、衛(wèi)生監(jiān)督文書等?！?〕檢驗(yàn)設(shè)備：血平板、毒物快速分析設(shè)備、深部溫度計(jì)等。16整理ppt17食物中毒現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查常備用品6〕取證工具：照相機(jī)、錄音機(jī)、攝象機(jī)等。〔7〕參考資料：各種食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原那么、食品衛(wèi)生相關(guān)法律法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)及其它有關(guān)專業(yè)技術(shù)參考資料等?！?〕其它：通訊工具、交通工具、生活用品等。17整理ppt18微生物采樣方法

--采樣要求應(yīng)盡一切努力完成對(duì)中毒發(fā)生現(xiàn)場(chǎng)可疑中毒食品的樣品采集工作，根據(jù)具體情況采集病人排泄物、嘔吐物、血液樣本、尿液。樣品采集、保存、運(yùn)送是微生物檢驗(yàn)最重要的前提條件。采樣的質(zhì)量常常決定了檢驗(yàn)結(jié)果，從而直接影響本次食物中毒的處理工作。18整理ppt19微生物采樣方法

--采樣品種

按臨床病癥和檢驗(yàn)?zāi)康模簢I吐物、血液、尿液、大便、剩余的食品、食品容器和加工用具外表涂抹等，可能條件下還應(yīng)采集廚師和直接接觸食品人員的手拭、肛拭等。按現(xiàn)場(chǎng)具體情況進(jìn)行：對(duì)腹瀉病人要注意采集糞便和肛拭；對(duì)發(fā)熱病人注意采集血液樣品；對(duì)疑心化學(xué)性食物中毒應(yīng)采集血液和尿液；無剩余可疑食品時(shí)應(yīng)采集相關(guān)容器、用具、抹布等涂抹樣品。19整理ppt20微生物采樣方法

--采樣人數(shù)盡可能采集較多的人數(shù)：對(duì)一起發(fā)病規(guī)模較大的食物中毒事件一般至少應(yīng)采集10-20名具有典型臨床病癥的病人的檢驗(yàn)樣品，同時(shí)應(yīng)采集局部具有相同進(jìn)食史但未發(fā)病者的同類樣品作為對(duì)照。20整理ppt21微生物采樣方法

--糞便(一)、病人糞便標(biāo)本的采集和運(yùn)送1.選取有膿血、粘液局部的糞便3-5克，液體糞便那么取絮狀物2-5ml，盛于滅菌的容器中，或用采便管采集腹瀉病人大便，及時(shí)送檢和接種。2.在無法獲得糞便的情況下，可用經(jīng)無菌生理鹽水〔或保存液〕或增菌液用濕潤(rùn)的棉拭子插入肛門4-5cm深處〔小兒2-3cm〕，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)一圈，擦取直腸外表的黏液后取出，盛入運(yùn)送培養(yǎng)基或保存液中送檢。*注意為保證多個(gè)檢驗(yàn)工程的開展，同一病人應(yīng)至少采集2支肛拭。21整理ppt22微生物采樣方法

--糞便3.糞便標(biāo)本應(yīng)盡量在病程早期和治療前采集；無論中毒病人是否已經(jīng)服藥，均應(yīng)進(jìn)行大便采集。同時(shí)應(yīng)采集新鮮糞便。假設(shè)無法獲得時(shí)，可用采便管或棉拭子采集。4.標(biāo)本采集后要立即送檢。拖延送檢可使病原菌數(shù)量迅速減少或雜菌過度生長(zhǎng)，影響致病菌的檢出率。5.應(yīng)采集嚴(yán)重腹瀉中毒病人的大便。22整理ppt23微生物采樣方法

--糞便不同病原菌導(dǎo)致的腹瀉，其糞便的性狀不同，在采樣過程中既要采集有價(jià)值的局部〔如膿血局部〕，又要從大便性狀上判斷引起食物中毒的病因。典型的黏液膿血相兼大便：志賀菌膿便：志賀菌、EIEC血便：沙門、彎曲菌、志賀菌、EIEC米泔樣大便：霍亂水樣便腹瀉：各種食物中毒血水樣大便：腸出血性大腸桿菌闌尾炎病癥：耶爾森菌23整理ppt24微生物采樣方法

–咽拭1.擬檢查腦膜炎奈瑟菌時(shí)，應(yīng)自鼻咽部采集標(biāo)本。即用無菌的咽拭子〔一端彎曲的金屬棉拭子〕由口腔進(jìn)入伸向鼻咽部，到達(dá)咽后壁擦取標(biāo)本。標(biāo)本采集后應(yīng)立即保溫送檢。24整理ppt25咽拭示范咽拭子：將棉簽檫拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，同樣將棉簽浸入4-5ml采樣液中，尾部棄去。25整理ppt26微生物采樣方法

–鼻拭漱口液2.擬檢查流感等病毒等采集標(biāo)本時(shí)，成人標(biāo)本為咽喉漱洗液及鼻拭子。兒童為咽拭子。采樣液為20%牛肉湯生理鹽水，成人咽喉漱洗液用10ml，兒童咽拭子用3ml。病人先咳嗽數(shù)次，然后將采樣液倒入口內(nèi)，仰頭漱洗咽部約1分鐘，吐回采樣杯中，倒入無菌試管，塞緊塞子，再取棉拭子沾取鼻腔分泌物，放在同一采樣試管中。兒童采樣用棉拭子涂抹咽壁及扁桃體，放入3ml采樣液中，置冰瓶中立即送檢。注：取鼻洗液和漱口液時(shí)，需預(yù)先了解患者是否對(duì)抗菌素有過敏史，如有，那么洗液和漱口液不應(yīng)含有抗菌素。如為細(xì)菌檢驗(yàn)，也不應(yīng)有抗生素。26整理ppt27鼻拭示范鼻拭子：將棉簽輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩緩轉(zhuǎn)動(dòng)退出。以同一拭子拭兩側(cè)鼻孔。將棉簽浸入4-5ml采樣液中，尾部棄去。27整理ppt28微生物采樣方法

–食品標(biāo)本〔一〕食品樣品采集的根本要求

〔1〕盡量采取中毒患者食用后的剩余食品；

〔2〕無直接剩余食品時(shí)，采集可疑中毒食品的包裝或者用滅菌生理鹽水洗滌盛過可疑中毒食品的容器，取洗滌液；

〔3〕采集同一加工場(chǎng)所加工的其它直接入口食品；

〔4〕半成品或原料，假設(shè)是化學(xué)性、有毒動(dòng)植物食物中毒采集食品原料尤為重要；

〔5〕調(diào)查人員應(yīng)對(duì)食品加工場(chǎng)所進(jìn)行認(rèn)真全面搜查，以客觀結(jié)果判斷是否還存在剩余食品或者原料。28整理ppt29微生物采樣方法

–食品標(biāo)本〔二〕食品標(biāo)本的采集方法被污染的食品，采樣前應(yīng)先通過調(diào)查，根本上弄清污染物、污染范圍和造成污染的原因，才能對(duì)可疑污染物進(jìn)行采樣檢驗(yàn)。1.采樣時(shí)，應(yīng)根據(jù)被污染食品數(shù)量的多少，決定取樣件數(shù)。發(fā)現(xiàn)可疑污染物或污染物的包裝材料，都應(yīng)加以收集和保管好。2.樣品的采集必須在無菌操作下進(jìn)行，各種采樣用具必須是無菌的，采樣用的工具不能重復(fù)使用。29整理ppt30微生物采樣方法

–食品標(biāo)本3.

采集污染食品的檢樣數(shù)量一般應(yīng)根據(jù)檢驗(yàn)工程進(jìn)行確定。檢樣一般至少以25g〔ml〕開展一個(gè)工程的檢測(cè)為準(zhǔn)。液體樣品要振搖混勻，冰凍樣品應(yīng)保持冷凍狀態(tài)，非冷凍食品可放0-5℃中保存。4.采樣后應(yīng)立即送檢，一般不得超過3小時(shí)。如路途遙遠(yuǎn)，可將檢樣保存在1-5℃環(huán)境中。30整理ppt31微生物采樣方法

–食品標(biāo)本〔三〕操作環(huán)節(jié)的采樣食品在生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)過程中，對(duì)直接接觸食品的生產(chǎn)設(shè)備、工具、用具、盛放食物的容器及操作人員的手等，均可進(jìn)行采樣檢驗(yàn)，以證明其染菌的情況和對(duì)食品的污染程度。采樣的面積以10cm×10cm為基準(zhǔn)。這類采樣主要針對(duì)細(xì)菌性食物中毒。１.對(duì)食品生產(chǎn)設(shè)備、工具的采樣，可用經(jīng)過滅菌的小刀，在機(jī)械設(shè)備、管道或工具上刮下黏附在外表的污物，放入滅菌采樣管或采樣瓶中。31整理ppt32微生物采樣方法

–食品標(biāo)本2.

對(duì)食品用具、盛器的采樣，可用經(jīng)過滅菌的棉拭，蘸取滅菌的生理鹽水等，在刀、砧板、抹布、碗盆等容器、冰箱、水池、下水道口、設(shè)備、工具或操作人員的手上，直接抹擦后，放入采樣管中。在放入試管時(shí)，應(yīng)用滅菌剪刀，將接觸手的棉拭剪掉，或折斷后裝入，并在火焰上將管口滅菌后，及時(shí)將試管蓋好。32整理ppt33微生物采樣方法

–食品標(biāo)本〔四〕采樣單的填寫采集的樣品要及時(shí)填寫采樣單，記錄相關(guān)工程，做好樣品標(biāo)記。對(duì)采集的樣品，確定檢驗(yàn)工程時(shí)，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況綜合考慮，做到目的明確，有選擇有針對(duì)性確實(shí)定需要檢驗(yàn)的工程。33整理ppt34微生物采樣方法

–食品標(biāo)本〔五〕采樣器械及試劑的本卷須知1.

采樣用的試管、瓶子、盛器、剪刀、鑷子、棉拭等均應(yīng)該是無菌。2.

采樣用的生理鹽水、漱洗液、運(yùn)送培養(yǎng)基及有關(guān)試劑等都應(yīng)該滿足新鮮、無菌的要求，同時(shí)應(yīng)符合采樣所需要的試劑量。一般運(yùn)送培養(yǎng)基為5ml/管為宜。34整理ppt35微生物采樣方法

–食品標(biāo)本3.

肛拭、食品和環(huán)節(jié)等采樣，其采樣量須滿足必須開展的檢驗(yàn)工程的要求，如肛拭采樣要用二根棉拭，食品采樣須多于25g〔ml〕以上。4.

采樣的同時(shí)，應(yīng)及時(shí)做好樣品標(biāo)記，完整填寫采樣單。立即將檢樣送檢驗(yàn)室，并有交接手續(xù)。35整理ppt36微生物采樣方法

–其他標(biāo)本嘔吐物采集嘔吐物已被處理掉時(shí)，涂抹被嘔吐物污染的物品。應(yīng)采集洗胃液。

血液采集至少5名中毒病人急性期(3天內(nèi))和恢復(fù)期(2周左右)靜脈血3ml。副溶血弧菌為1-2日和1周。同時(shí)采集正常人靜脈血作為對(duì)照。

食品加工人員帶菌情況采樣手、鼻、咽和有感染灶的皮膚等涂抹樣。便樣。

尿液采集

水樣采集

其它采樣36整理ppt37微生物采樣方法

--注意問題采樣要標(biāo)準(zhǔn)：采集食品要保證一定的數(shù)量；肛拭采樣必須保證運(yùn)送培養(yǎng)基的質(zhì)量，用二根棉拭進(jìn)行采樣，采樣時(shí)必須有一定的深度，否那么即使是肛拭樣本也會(huì)造成無細(xì)菌生長(zhǎng)現(xiàn)象；采樣要及時(shí)，用于細(xì)菌性食物中毒檢驗(yàn)的樣品盡量在服用抗生素以前采集。37整理ppt38微生物采樣方法

--注意問題4.不同樣品采樣方法不同。采集樣品時(shí)應(yīng)盡量符合無菌要求；5.樣品采集后應(yīng)妥善保管，有條件時(shí)備檢樣品應(yīng)置冰箱內(nèi)或冰盒中保存〔溫度通?？刂圃?℃左右〕；6.采樣時(shí)應(yīng)注明樣品名稱、來源、建議檢驗(yàn)工程等。38整理ppt39微生物采樣方法

–標(biāo)本運(yùn)送標(biāo)本運(yùn)送：標(biāo)本采集后應(yīng)根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康募皶r(shí)送檢。一般情況下，標(biāo)本應(yīng)在低溫下，24小時(shí)內(nèi)運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室后，病毒別離標(biāo)本應(yīng)盡快進(jìn)行接種別離，48小時(shí)內(nèi)能進(jìn)行接種的可置于4℃保存，如未能接種應(yīng)置-70℃或以下保存。血清標(biāo)本可在4℃存放一周，長(zhǎng)期保存置-20℃或以下。39整理ppt河北cdc2021年5月40微生物采樣方法----通用要求樣品種類采樣數(shù)量采樣方法

糞便2ml(g)置無菌樣品容器內(nèi)嘔吐物50-200g置無菌樣品容器內(nèi)血液不少于3ml靜脈無菌采樣尿液30-50ml取清潔中段尿固體食品200-500g置無菌樣品容器內(nèi)液體食品200-500ml