藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證課件

藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

上海市藥品檢驗(yàn)所

1藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證加強(qiáng)藥品微生物學(xué)檢驗(yàn)質(zhì)量保證的要求來自：

☆藥品安全形勢的要求☆2005版藥典→2010版藥典要求☆新藥送審中要求☆藥品GMP要求——

國食藥監(jiān)安[2007]648號(hào)附件

《藥品GMP認(rèn)證檢查評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)》

2藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

無菌檢查及微生物限度檢查是區(qū)分產(chǎn)品是否屬于高風(fēng)險(xiǎn)產(chǎn)品的兩個(gè)重要指標(biāo)。

3藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證無菌檢查和微生物限度檢查的性質(zhì)和特點(diǎn)藥品的無菌和微生物限度檢測是指按照一定的檢測程序和質(zhì)量控制措施，確定要求無菌的樣品中是否存有活的微生物（定性試驗(yàn)——一次檢出不得復(fù)試）檢驗(yàn)周期14天?。换蛘?，確定單位（g/ml）樣品中存在微生物的數(shù)量（定量試驗(yàn)），及是否存在某種致病菌（定性試驗(yàn)——一次檢出不得復(fù)試）檢驗(yàn)周期7天

決定了微生物檢驗(yàn)質(zhì)量保證的高要求

*4藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

什么是檢驗(yàn)質(zhì)量？

能按照產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，提供出準(zhǔn)確、可靠的檢驗(yàn)數(shù)據(jù)，這些數(shù)據(jù)能夠客觀地反映出所檢樣品的本質(zhì)。

什么是微生物實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)質(zhì)量？

能準(zhǔn)確地反映出所檢樣品的微生物狀況。

5藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證如何保證微生物實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)質(zhì)量和結(jié)果的準(zhǔn)確性？一、有能滿足工作任務(wù)的完善、合理、科學(xué)的實(shí)驗(yàn)室設(shè)施。（硬件）二、有一整套可遵循的、科學(xué)的、有效的管理規(guī)范和標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范(SOP)。（軟件）三、有訓(xùn)練有素的檢驗(yàn)人員。（人）四、開展檢驗(yàn)系統(tǒng)適用性驗(yàn)證。（法）五、參加能力驗(yàn)證和實(shí)驗(yàn)室之間的比對(duì)。（質(zhì)量保證活動(dòng)）六、進(jìn)行質(zhì)控樣品的考核。（質(zhì)量保證活動(dòng)）6藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證一、有能滿足工作任務(wù)的完善、合理、科學(xué)的實(shí)驗(yàn)室設(shè)施和設(shè)備。

(硬件）7藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證保證實(shí)驗(yàn)環(huán)境——潔凈室（無菌室）、隔離系統(tǒng)、凈化工作臺(tái)、生物安全柜。制備實(shí)驗(yàn)無菌器材——高壓蒸汽滅菌器、電熱恒溫干燥箱。適合微生物生長和保存的——溫控設(shè)備（培養(yǎng)箱、冰箱、低溫冰柜等）。8藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證實(shí)驗(yàn)常用儀器——電動(dòng)勻漿儀、電熱恒溫水浴箱、離心機(jī)、無菌檢查集菌儀、薄膜過濾裝置、顯微鏡等實(shí)驗(yàn)用玻璃儀器——試管、三角燒瓶、刻度吸管、雙碟培養(yǎng)皿等。菌種鑒定儀器。等全國微生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的建立正在積極進(jìn)行中9藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證二、有一整套可遵循的、科學(xué)的、有效的管理規(guī)范和標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范。（軟件）10藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

規(guī)定質(zhì)量方針、目標(biāo)，描述管理體系的要素、要求、職責(zé)與途徑

質(zhì)量手冊(cè)

實(shí)施體系各要素時(shí)涉及各部門管理體系程序文件質(zhì)量活動(dòng)的程序（誰、做什么、何時(shí)、何地、如何做）

標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作中的技術(shù)細(xì)節(jié)（作業(yè)指導(dǎo)書、實(shí)施細(xì)則）（怎么做）

記錄（報(bào)告、表格、原始記錄等）結(jié)果、表明體系正在運(yùn)行

使用范圍

圖1管理體系文件結(jié)構(gòu)檢驗(yàn)工作11藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

依據(jù)和要求：藥品GMP要求——國食藥監(jiān)安[2007]648號(hào)附件《藥品GMP認(rèn)證檢查評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)》計(jì)量認(rèn)證和認(rèn)可委（CNAS)的要求。(CNAS-CL09:2006)實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)場評(píng)審核查表《檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物檢測領(lǐng)域的應(yīng)用說明》2010年版藥典——新增附錄ⅩⅨQ藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)原則。12藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

設(shè)施、設(shè)備、菌種、培養(yǎng)基、樣品、微生物實(shí)驗(yàn)廢棄物等。

微生物實(shí)驗(yàn)室的管理主要涉及：13藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證（一）微生物實(shí)驗(yàn)室潔凈室的管理?潔凈實(shí)驗(yàn)室的建造要求

按藥品GMP要求——國食藥監(jiān)安[2007]648號(hào)附件《藥品GMP認(rèn)證檢查評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)》中

第1101.1102.1301.1401.*1501.1504*1505.*1601.1602.1603.1701.*1801.1901.*1903.2802等的規(guī)定14藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證(CNAS-CL09:2006)《檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物檢測領(lǐng)域的應(yīng)用說明》☆

對(duì)實(shí)驗(yàn)室設(shè)施的要求是以能獲得可靠的生物檢測結(jié)果為重要依據(jù)；實(shí)驗(yàn)室總體布局和各部位的安排應(yīng)有利于減少潛在的對(duì)樣本的污染和對(duì)人員的危害。15藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證☆

對(duì)有潔凈條件要求的工作區(qū)域應(yīng)有明確標(biāo)識(shí)。并能有效地進(jìn)行控制、監(jiān)測和記錄☆

注意實(shí)驗(yàn)室間的有效隔離，

有適當(dāng)措施防止交叉污染?！?/p>

對(duì)進(jìn)入無菌或凈化等特定區(qū)域的人員應(yīng)有效控制

☆有妥善處理廢棄樣品和有害廢棄物的設(shè)施和制度，并且注意生物安全。16藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證?

微生物實(shí)驗(yàn)用潔凈室要求潔凈室（區(qū)）應(yīng)具有高效單向流空氣過濾的裝置及除濕功能。分凈化度為1萬級(jí)的操作室和10萬級(jí)的人流Ⅰ、Ⅱ緩沖間、物流Ⅰ、Ⅱ緩沖間。操作室內(nèi)應(yīng)具有100級(jí)工作區(qū)。相鄰各室保持5～10pa的壓差。

室內(nèi)溫度應(yīng)控制在18～24℃，濕度應(yīng)為45~60%。設(shè)有能達(dá)到空氣消毒的紫外燈和照明燈，照度為300勒克斯。

17藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證?完善、合理的實(shí)驗(yàn)輔助區(qū)域：

樣品接收和儲(chǔ)藏區(qū)、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備操作區(qū)

標(biāo)準(zhǔn)菌株儲(chǔ)藏區(qū)、

細(xì)菌/真菌實(shí)驗(yàn)室（陽性對(duì)照室）、培養(yǎng)室、培養(yǎng)基及器材準(zhǔn)備區(qū)

實(shí)驗(yàn)物品滅菌處理區(qū)污染物處理區(qū)

——各區(qū)域應(yīng)有明確標(biāo)識(shí)。18藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證?潔凈室潔凈度的驗(yàn)證要求

單向流空氣區(qū)與工作臺(tái)面必須定期按國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T16292-16294-現(xiàn)行版【醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法】進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。每年對(duì)潔凈室（區(qū)）作一次潔凈度再驗(yàn)證。并將每次驗(yàn)證結(jié)果記錄歸檔保存?zhèn)洳椋?/p>

19藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

?潔凈室使用管理——1、建立潔凈室使用與清潔維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。

如：☆

SIFDC-SOP-GL-025潔凈室的驗(yàn)證、使用與清潔維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程☆

SIFDC-SOP-JY-025B潔凈室(區(qū))使用標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

20藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證潔凈室使用SOP舉例：（1）保持凈化設(shè)備連續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)，否則每次實(shí)驗(yàn)前至少開啟機(jī)房運(yùn)轉(zhuǎn)一小時(shí)以上，同時(shí)開啟凈化臺(tái)和紫外燈。（2）凡進(jìn)入潔凈室（無菌室）的物品必須先在進(jìn)入物流第1緩沖間時(shí)對(duì)外部表面進(jìn)行消毒滅菌處理，然后置物流第Ⅱ緩沖間內(nèi)開紫外燈進(jìn)行進(jìn)一步滅菌及經(jīng)無菌空氣吹干，再經(jīng)物流傳遞窗送入無菌室。帶纖維、易發(fā)塵物品不得帶進(jìn)凈化實(shí)驗(yàn)室。*21藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

（3）實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入潔凈室（區(qū)）不得化妝、帶手表、戒指等首飾，及吃東西、嚼口香糖等。應(yīng)先洗手。在第一緩沖間內(nèi)換上消毒隔離鞋，戴上滅菌手套，更衣——換上滅菌連褲衣帽（不能讓頭發(fā)、衣袖、手表等暴露在外面），戴上滅菌口罩。然后換第二副滅菌手套，在進(jìn)入第二緩沖間時(shí)換第二雙消毒隔離拖鞋。再進(jìn)入無菌室。*

22藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證（4）

觀察溫度計(jì)、濕度計(jì)上顯示的溫濕度是否在規(guī)定的范圍內(nèi)，并作為實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)記錄在案。如發(fā)現(xiàn)問題應(yīng)及時(shí)尋找原因，及時(shí)報(bào)修和及時(shí)報(bào)告實(shí)驗(yàn)室主管，并將報(bào)修原因和結(jié)果記錄歸檔。*23藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

（5）在每次實(shí)驗(yàn)同時(shí)對(duì)操作室和凈化臺(tái)做微生物沉降菌測定并有記錄。*方法如下：取內(nèi)徑90mm平皿無菌操作注入融化的肉湯瓊脂培養(yǎng)基20ml制成平板，在30～35℃預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)應(yīng)無菌生長。取經(jīng)預(yù)培養(yǎng)過的6只瓊脂平皿，三只置凈化室左、中、右，三只置凈化臺(tái)左、中、右。開始檢驗(yàn)操作即打開6個(gè)平皿蓋，實(shí)驗(yàn)完畢將蓋蓋好。置30～35℃培養(yǎng)48小時(shí)后點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。潔凈室3只平皿平均菌落數(shù)不得超過3個(gè)，單只平皿菌落數(shù)不得超過4個(gè)。凈化臺(tái)3只平皿菌落數(shù)平均不得超過0.5個(gè)。*

24藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證（6）必要時(shí)在實(shí)驗(yàn)同時(shí)對(duì)操作室和凈化臺(tái)進(jìn)行浮游菌測定。方法見浮游菌測定儀操作規(guī)程；標(biāo)準(zhǔn)：萬級(jí)應(yīng)不得過100個(gè)/m3，百級(jí)應(yīng)不得過5個(gè)/m3

（7）為保證潔凈能力，每年一次更換新的紫外燈管，每二年檢查和更換高效過濾頭。并將更換結(jié)果記錄歸檔保存?zhèn)洳椋?5藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

潔凈室清潔、維護(hù)SOP舉例（1）每次試驗(yàn)后均應(yīng)用消毒溶液清潔工作臺(tái)面、地板、傳遞窗、門把手。清潔消毒程序從內(nèi)向外，從高潔凈區(qū)到低潔凈區(qū)。（2）每月末進(jìn)行一次徹底清潔工作，用消毒溶液清潔工作臺(tái)面、地板、墻面、天花板、傳遞窗、門及門把手。清潔消毒程序從內(nèi)向外，從高潔凈區(qū)到低潔凈區(qū)。26藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

（3）為防止微生物耐受性，應(yīng)定期更換消毒劑品種，品種有：5～20倍稀釋的碘伏溶液、0.1%新潔爾滅溶液、1：50的84消毒液、75%乙醇溶液、3%碘酒溶液、5%石炭酸（來蘇兒）消毒溶液、尼泊金酒精消毒液（處方：對(duì)羥基苯甲酸甲脂21.5g，對(duì)羥基苯甲酸丙脂8.6g，75%乙醇10.0L）等。（4）消毒劑濃度與實(shí)際消毒效果密切相關(guān)，應(yīng)按規(guī)定準(zhǔn)確配制。（5）應(yīng)注意每種消毒溶液的消毒容量（能力），及需消毒物的污染程度，一般每1.5L消毒劑所檫洗面積不得大于2.5平方米，以確保清潔、滅菌效果。27藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證2、建立潔凈室使用登記表。

如：

☆

SIFDC-BG-126D潔凈室（區(qū)）使用、維修登記表

☆

SIFDC-BG-083D潔凈室（區(qū)）的清潔、維護(hù)記錄表

——逐月保存并定期歸檔備查！*28藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證（二）微生物實(shí)驗(yàn)設(shè)備的管理

高壓滅菌鍋管理

（1）檔案建立：

從開箱驗(yàn)收記錄→調(diào)試記錄→專人負(fù)責(zé)制→操作規(guī)程（SOP）→定期校驗(yàn)檢定→使用登記→維修記錄→改造或更新記錄→報(bào)廢記錄。應(yīng)貫穿設(shè)備的一生。

（2）壓力表定期校驗(yàn)應(yīng)由計(jì)量測試院定期強(qiáng)檢，以確保消毒質(zhì)量和使用安全。并貼有綠色合格標(biāo)識(shí)后使用。29藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證（3）滅菌條件的驗(yàn)證：應(yīng)按照2005年版中國藥典附錄ⅩⅦ滅菌法中規(guī)定，根據(jù)物品的性質(zhì)選擇滅菌程序：☆

121℃×15分鐘、☆

121℃×30分鐘、☆

116℃×40分鐘必須保證物品滅菌后的SAL≤10-6

由有資質(zhì)的單位進(jìn)行驗(yàn)證。驗(yàn)證資料歸檔保存。

30藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證（4）操作SOP的建立

如：☆SIFDC–SOP-YQ-207B立式壓力蒸汽滅菌器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（5）建立使用記錄、維護(hù)記錄：如：☆

SIFDC-BG-YQ-013D

年高壓滅菌鍋（編號(hào)：

）使用記錄31藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

高壓滅菌器操作SOP的編寫，除按各種型號(hào)使用說明書中的操作步驟要求外，還應(yīng)有滅菌操作指導(dǎo)內(nèi)容。高壓滅菌鍋操作SOP舉例如下：

?由于滅菌保證值與污染菌的耐熱性和污染量有關(guān)，因此，在制備實(shí)驗(yàn)所需的無菌用品的各個(gè)環(huán)節(jié)均應(yīng)采取各種有效的手段（包括預(yù)先煮沸、除菌過濾、分裝防污染等措施）來降低待滅菌物品的微生物污染。

32藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

?

待滅菌物品的表面必須潔凈，不污染有機(jī)物質(zhì)，三角燒瓶、試管、等玻璃容器應(yīng)有相應(yīng)的塞子（膠木螺旋蓋、乳膠塞）排列置于鐵絲筐中，外面應(yīng)有適宜的寬松的包皮或放在儲(chǔ)槽內(nèi)。防止滅菌物品送入無菌室前的再污染。33藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

?放入滅菌器內(nèi)的物品，不能排列過密，應(yīng)保證高壓蒸汽的流通及有效穿透力。

?應(yīng)完全排出高壓蒸汽滅菌器內(nèi)的冷空氣以保證達(dá)到規(guī)定的溫度，如有冷空氣沒有排盡，雖然壓力達(dá)到，但溫度不能達(dá)到規(guī)定的要求，滅菌就不徹底。

?進(jìn)行滅菌效果監(jiān)測：選擇物理、化學(xué)指示劑和生物指示劑進(jìn)行滅菌效果監(jiān)測和驗(yàn)證?！舻诇囟扔?jì)、三M試紙、嗜熱脂肪芽孢桿菌*，并在滅菌記錄中有記錄34藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證凈化工作臺(tái)的管理（1）檔案建立：

從開箱驗(yàn)收記錄→調(diào)試記錄→專人負(fù)責(zé)制→操作規(guī)程（SOP）→潔凈度驗(yàn)證→使用登記→維修記錄→高效過濾更換記錄→報(bào)廢記錄。應(yīng)貫穿設(shè)備的一生。（2）定期潔凈度驗(yàn)證（3）操作SOP的建立（4）建立使用記錄、維護(hù)記錄：35藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證凈化工作臺(tái)操作SOP的編寫，除按各種型號(hào)使用說明書中的操作步驟要求外，還應(yīng)有操作指導(dǎo)內(nèi)容。凈化工作臺(tái)使用SOP舉例：

?啟動(dòng)凈化臺(tái)前用70％的酒精或其它適當(dāng)?shù)南緞┎潦脤恿髋_(tái)的整個(gè)內(nèi)表面并開啟紫外燈，確保層流臺(tái)運(yùn)行30分鐘以上。進(jìn)入潔凈室前關(guān)閉紫外燈。

?

檢驗(yàn)操作時(shí)不得打開紫外燈。防止紫外線對(duì)實(shí)驗(yàn)人員眼睛、皮膚的損傷及影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性。

36藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證?操作人員的手、手臂及頭部是最主要的污染源，操作時(shí)務(wù)必戴上滅菌手套、帽子、口罩。手套必須將袖口包住。頭部絕對(duì)不得伸入操作區(qū)。?在操作區(qū)內(nèi)使用酒精燈前，必須確證氣流方向，防止火焰過大，影響操作人員和高效過濾器的安全。37藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

?仔細(xì)計(jì)劃好實(shí)驗(yàn)操作步驟，避免將不必要的物品放進(jìn)層流區(qū)內(nèi)。應(yīng)根據(jù)層流方向?qū)o菌要求高的物品放在上游。對(duì)水平層流而言，層流區(qū)內(nèi)操作及物品排放應(yīng)注意前后(氣流方向)重疊，防止?jié)崈魵饬魇芪锲纷钃醵a(chǎn)生渦流使物品間發(fā)生交叉污染。

對(duì)垂直層流而言，物品應(yīng)存放在操作區(qū)的左側(cè)或右側(cè)，操作時(shí)避免上下重疊。38藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證?因?qū)恿髋_(tái)的外周和鄰近區(qū)域存在被污染的空氣。人員走動(dòng)或操作應(yīng)注意輕手輕腳，輕拿輕放，防止對(duì)無菌操作帶來不良影響。

?實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用消毒劑擦試整個(gè)層流臺(tái)內(nèi)表面，然后再關(guān)閉風(fēng)機(jī)電源。打開紫外燈。消毒滅菌30分鐘以上。

?根據(jù)使用情況，定期更換層流臺(tái)空氣高效過濾層。每次更換后應(yīng)做潔凈度驗(yàn)證，并將更換日期、潔凈度驗(yàn)證結(jié)果記錄備查在無菌室使用登記冊(cè)上39藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證（三）實(shí)驗(yàn)用菌種的管理：應(yīng)符合：《中國藥典》2010年版相關(guān)規(guī)定和(CNAS-CL09:2006)《檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物檢測領(lǐng)域的應(yīng)用說明》?菌種管理的重要性

在微生物檢驗(yàn)中用的菌種，相當(dāng)于在理化分析中用的對(duì)照品。微生物實(shí)驗(yàn)室對(duì)菌種的管理除了相當(dāng)于化學(xué)實(shí)驗(yàn)室對(duì)對(duì)照品的管理要求外，還有菌種保存的特殊性。40藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

溯源性、有記錄

微生物檢驗(yàn)室用于驗(yàn)證試驗(yàn)、陽性對(duì)照試驗(yàn)、培養(yǎng)基適用性試驗(yàn)等的對(duì)照菌種，應(yīng)是一批形態(tài)、生物化學(xué)、血清學(xué)特性穩(wěn)定的標(biāo)準(zhǔn)菌株，這些菌株應(yīng)來自中國藥品生物制品檢定所的

中國醫(yī)學(xué)菌種保藏中心（CMCC）系列

或

美國菌種保藏中心（ATCC）系列等菌種保藏機(jī)構(gòu)的冷凍干燥菌種。41藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證CNAS-CL09：

2)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有文件化的菌種管理程序（從原始菌種到日常工作用菌）該程序應(yīng)包括：

a)參照菌種是否定期轉(zhuǎn)種傳代，并做確認(rèn)試驗(yàn)，包括實(shí)驗(yàn)室中所需要的關(guān)鍵診斷指標(biāo)？實(shí)驗(yàn)室是否加以記錄并予以保存？

b)每一支參照菌種都應(yīng)以適當(dāng)?shù)臉?biāo)簽、標(biāo)記或其它標(biāo)識(shí)方式來表示其名稱、標(biāo)準(zhǔn)號(hào)、接種日期和所傳代數(shù)。

42藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

c)其管理記錄中還應(yīng)包括（但不限于）以下內(nèi)容：

——從原始菌種傳代到工作用菌種的代數(shù)；

——菌種生長的培養(yǎng)基及孵育條件；

——菌種生存條件。

——要求上述a)、b)、c)均應(yīng)有記錄。

43藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證實(shí)驗(yàn)室應(yīng)做的質(zhì)量管理工作：（1）建立菌種管理程序如：☆SIFDC-CX-030菌種管理程序（2）菌種保管崗位持證上崗（3）建立菌種轉(zhuǎn)種操作SOP.如：☆SIFDC-SOP-GL-023C檢驗(yàn)用菌種保管與轉(zhuǎn)種傳代管理標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程44藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證（4）建立菌種的領(lǐng)用制度如：☆SIFDC-BG-165D菌種傳代領(lǐng)用記錄

（5）進(jìn)行菌種保管的定期檢查。如：☆SIFDC-BG-100D菌種保管與轉(zhuǎn)種傳代的檢查記錄45藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

菌種管理舉例：

1、菌種申購，應(yīng)有室主任同意簽字。

2、指定專人負(fù)責(zé)保管，并持證上崗。

3、建立菌種購入、領(lǐng)用進(jìn)出帳冊(cè)。

4、有菌種專用冰箱加鎖保藏。

5、微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)分保藏菌種和工作用菌種。46藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證6、專人負(fù)責(zé)定期轉(zhuǎn)種、傳代工作。每次轉(zhuǎn)種應(yīng)嚴(yán)格核對(duì)慎防混淆。7、有轉(zhuǎn)種、傳代記錄：日期、菌種名稱、編號(hào)、傳代次數(shù)、培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、菌落型態(tài)、確認(rèn)試驗(yàn)、轉(zhuǎn)種傳代人簽名。8、保藏菌種控制傳代次數(shù)不超過5代9、轉(zhuǎn)種后上一次菌種應(yīng)高壓滅菌后清洗。10、每管工作用菌種斜面開啟后不得重復(fù)使用。并高壓滅菌處理。

47藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

以上10點(diǎn)均應(yīng)在建立的菌種管理文件（菌種管理程序、菌種管理標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范（GL-SOP）、菌種轉(zhuǎn)種傳代標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范（SOP)、菌種轉(zhuǎn)種傳代領(lǐng)用記錄）有體現(xiàn)。48藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證（四）實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基的管理：

應(yīng)符合《中國藥典》2010年版有關(guān)規(guī)定及(CNAS-CL09:2006)實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)場評(píng)審核查表《檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物檢測領(lǐng)域的應(yīng)用說明》

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立和保持有效的適合試驗(yàn)范圍的培養(yǎng)基（試劑）質(zhì)量控制程序49藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證對(duì)所有自備培養(yǎng)基的配制須有記錄，記錄內(nèi)容至少含有：——培養(yǎng)基名稱和類型；——配制日期和配制人員的標(biāo)識(shí)；——培養(yǎng)基/溶液的類型、體積；——分裝的體積；——成分、每個(gè)成分物質(zhì)的含量、制造商、批號(hào)；——

pH（最初和最終）值；——無菌措施，包括實(shí)施的方式、時(shí)間和溫度。

50藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證應(yīng)做的質(zhì)量管理工作：（1）建立培養(yǎng)基質(zhì)量控制程序如：SIFDC-CX-035C培養(yǎng)基質(zhì)量控制程序（2）培養(yǎng)基的配制操作SOP如：SIFDC-SOP-JY-028B培養(yǎng)基配制標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（3）培養(yǎng)基配制記錄如：SIFDC-YSJL-034E-1/1培養(yǎng)基配制原始記錄（成品）

51藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

培養(yǎng)基儲(chǔ)藏保管注意：

干粉培養(yǎng)基包裝未開啟使用前應(yīng)儲(chǔ)藏在陰涼干燥處，開啟使用后的應(yīng)置冰箱儲(chǔ)藏，防止微生物生長、吸潮、結(jié)塊、變質(zhì)。應(yīng)有專人保管并建立帳冊(cè)。帳目立項(xiàng)：進(jìn)貨日期、品名、規(guī)格、批號(hào)、數(shù)量（瓶）、領(lǐng)用日期、領(lǐng)用數(shù)量、領(lǐng)用人等。

52藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

培養(yǎng)基質(zhì)量控制注意;

每批新購進(jìn)的培養(yǎng)基，應(yīng)及時(shí)按藥典要求作適用性（靈敏度）質(zhì)量檢查，應(yīng)符合規(guī)定。靈敏度質(zhì)量檢查原始記錄應(yīng)歸入培養(yǎng)基帳冊(cè)。如果靈敏度質(zhì)量檢查結(jié)果不符合規(guī)定，，則該批培養(yǎng)基應(yīng)作退貨或報(bào)廢處理。如已發(fā)生用不合格培養(yǎng)基獲得的微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均應(yīng)作無效論處。53藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

培養(yǎng)基制備中的質(zhì)量控制注意：?配制培養(yǎng)基應(yīng)采用玻璃容器，以避免接觸金屬離子。?稱量應(yīng)迅速，防止吸潮影響稱量準(zhǔn)確。稱量應(yīng)有校對(duì)。?應(yīng)用水浴加熱溶化，不能直火加熱。防止結(jié)底焦化。影響培養(yǎng)基的營養(yǎng)。?配制后應(yīng)測定培養(yǎng)基滅菌前后的pH值，以確認(rèn)pH值在適宜微生物生長的范圍內(nèi)。一般用10％NaOH液和稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至規(guī)定的范圍。54藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證?嚴(yán)格遵守用驗(yàn)證過的滅菌程序滅菌。（溫度和時(shí)間）?滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)注意避光保存，防止第二次污染。?應(yīng)有配制培養(yǎng)基的原始記錄記錄項(xiàng)目：日期、品名、規(guī)格、批號(hào)、稱量數(shù)（克）、稀釋數(shù)（ML）、滅菌前pH、滅菌后pH、滅菌起始時(shí)間、滅菌結(jié)束時(shí)間、溫度、壓力、配制人、校對(duì)人。

SIFDC-YSJL-034E-1/1培養(yǎng)基配制原始記錄55藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證（五）微生物實(shí)驗(yàn)有害廢棄物管理

應(yīng)符合實(shí)驗(yàn)室安全條例的要求及(CNAS-CL09:2006)《檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物檢測領(lǐng)域的應(yīng)用說明》

實(shí)驗(yàn)室是否有妥善處理廢棄樣品和有害廢棄物的設(shè)施和制度？并且注意生物安全？

56藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證需做的質(zhì)量管理工作：（1）建立滅活和防污染控制程序

見：SIFDC-CX-020C滅活和防污染控制程序（2）建立實(shí)驗(yàn)后帶菌廢棄物消毒滅菌標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

如：SIDC-SOP-GL-035C微生物實(shí)驗(yàn)有害廢棄物處理標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

（3）廢棄物處理和滅活記錄。

57藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證（3）帶菌廢棄物消毒滅菌記錄。如：SIFDC-BG-154D微生物實(shí)驗(yàn)有害廢棄物濕熱滅菌處理登記表58藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

三、有訓(xùn)練有素的檢驗(yàn)人員。

59藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

人是質(zhì)量管理的主體，人員的素質(zhì)對(duì)質(zhì)量體系的運(yùn)行起著極為重要的影響。

微生物實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)符合：《中國藥典》2010年版中的要求:——微生物實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)具備微生物專業(yè)知識(shí)。

60藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

CNAS-CL09《檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物檢測領(lǐng)域的應(yīng)用說明》

第5.2.1節(jié)要求：——實(shí)驗(yàn)室使用人員時(shí)，應(yīng)考慮以下條件

a)有顏色視覺障礙的人員不能執(zhí)行某些涉及到辨色的試驗(yàn)。

b)實(shí)驗(yàn)室人員是否熟悉生物檢測安全操作知識(shí)和消毒知識(shí)？

c)實(shí)驗(yàn)室是否對(duì)在培人員實(shí)施有效監(jiān)督？

d)實(shí)驗(yàn)室是否對(duì)新員工進(jìn)行檢測技能的培訓(xùn)，對(duì)新員工的檢測技能進(jìn)行確認(rèn)？61藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

國食藥監(jiān)安[2007]648號(hào)附件《藥品GMP認(rèn)證檢查評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)》中第*0606條要求：

——“從事藥品質(zhì)量檢驗(yàn)的人員應(yīng)通過相應(yīng)專業(yè)技術(shù)培訓(xùn)后上崗，具有基礎(chǔ)理論知識(shí)和實(shí)際操作技能”；第*0609條要求：

——“進(jìn)入潔凈區(qū)的工作人員（包括維修、輔助人員）應(yīng)定期進(jìn)行衛(wèi)生和微生物學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)、潔凈作業(yè)等方面的培訓(xùn)和考核。

62藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

管理對(duì)微生物檢驗(yàn)人員的要求：☆具有微生物學(xué)、生物化學(xué)、分析化學(xué)等基礎(chǔ)理論專業(yè)知識(shí)?！罱邮苓^無菌技術(shù)和衛(wèi)生要求的培訓(xùn)。☆經(jīng)過崗位考核取得上崗操作資格證。☆參加單位年度培訓(xùn)和繼續(xù)教育，不斷努力學(xué)習(xí)微生物專業(yè)技術(shù)，進(jìn)行知識(shí)和技術(shù)的更新?！罘菍I(yè)技術(shù)人員、無專業(yè)技術(shù)職稱者不得從事藥品微生物學(xué)檢驗(yàn)?！钗⑸飳I(yè)檢驗(yàn)人員不宜隨便更換。63藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證四、開展微生物實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)適用性驗(yàn)證

64藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

國家食品藥品監(jiān)督管理局食藥監(jiān)辦〔2007〕23號(hào)文中規(guī)定

“對(duì)無菌、微生物限度檢查進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證是中國藥典2005年版的一個(gè)重要變化，目的是提高檢驗(yàn)方法的可靠性和科學(xué)性。對(duì)所有進(jìn)行無菌、微生物限度檢查的品種，藥品生產(chǎn)企業(yè)必須采用經(jīng)過驗(yàn)證的方法檢驗(yàn)，以保障得出可靠的結(jié)論?！薄八幤窡o菌、微生物限度檢查方法的驗(yàn)證工作屬于檢驗(yàn)方法學(xué)研究的范疇，在建立藥品的檢驗(yàn)方法時(shí)必須進(jìn)行驗(yàn)證。如果企業(yè)在注冊(cè)時(shí)缺少該方面的資料，應(yīng)責(zé)成其補(bǔ)充?！?65藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證無菌實(shí)驗(yàn)環(huán)境細(xì)菌的監(jiān)測藥品的無菌檢測環(huán)境細(xì)菌與藥品細(xì)菌的比較結(jié)論判斷無菌檢查結(jié)果有效的方法66藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

無菌檢查實(shí)驗(yàn)中：

1、實(shí)驗(yàn)過程的潔凈環(huán)境監(jiān)控驗(yàn)證：

①浮游菌測定、②沉降菌測定。方法：按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。

2、操作者無菌衣、手套的監(jiān)控驗(yàn)證：

①滅菌衣、滅菌手套的無菌檢查。方法：按無菌檢查法中的直接接種法檢查②操作前、操作結(jié)束時(shí)的手印培養(yǎng)。方法：將手印按在培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)后計(jì)數(shù)和分析。67藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

3、設(shè)備表面、

樣品表面無菌性監(jiān)控驗(yàn)證

方法：用接觸碟法或用經(jīng)無菌生理鹽水濕潤后的無菌棉簽涂抹需采樣的表面約25cm2后分別接種到無菌檢查的兩種培養(yǎng)基中后培養(yǎng)應(yīng)無菌生長，接觸碟經(jīng)培養(yǎng)后應(yīng)無菌落生長。68藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

4、培養(yǎng)基適用性檢查。

培養(yǎng)基質(zhì)量的優(yōu)劣對(duì)微生物的生理活性和代謝能力有很大影響,直接關(guān)系到樣品中微生物的生長，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。①培養(yǎng)基靈敏度檢查②培養(yǎng)基無菌性檢查方法：《中國藥典2005年版》無菌檢查法中

69藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

5、樣品所用檢驗(yàn)方法和條件的驗(yàn)證

（確保已充分消除樣品抑菌性）方法：《中國藥典2005年版》無菌檢查法70藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證無菌檢查驗(yàn)證思路和步驟

某種樣品→采用某種方法檢驗(yàn)→得到準(zhǔn)確可信結(jié)果①證明供試品是否有抑菌活性②證明采用有效的方法消除抑菌活性記錄實(shí)驗(yàn)過程，形成驗(yàn)證報(bào)告、形成標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范（SOP）71藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

6、實(shí)驗(yàn)同時(shí)的陽性對(duì)照、陰性對(duì)照試驗(yàn)。陽性對(duì)照驗(yàn)證：如果有菌肯定能得到生長；陰性對(duì)照驗(yàn)證：所用物品的無菌性。是對(duì)實(shí)驗(yàn)是否成立的驗(yàn)證，具有對(duì)方法驗(yàn)證后在具體實(shí)驗(yàn)室使用中的簡單的再驗(yàn)證性質(zhì)。

（經(jīng)常碰到提問：我們的產(chǎn)品檢驗(yàn)方法已經(jīng)過驗(yàn)證，按產(chǎn)品的驗(yàn)證方法實(shí)驗(yàn)的是否可以不做陽性對(duì)照、陰性對(duì)照試驗(yàn)了）方法：藥典無菌檢查法規(guī)定72藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證7、對(duì)檢出微生物的定量、定性及追溯的準(zhǔn)確性保證積累實(shí)驗(yàn)過程環(huán)境中收集到的微生物，逐個(gè)對(duì)其進(jìn)行必要的鑒定，定性到種、族，并做好純菌種的保藏，逐步建立起可能污染實(shí)驗(yàn)環(huán)境的菌譜庫。將產(chǎn)品中撿出的菌進(jìn)行鑒定，定性到種、族，在實(shí)驗(yàn)環(huán)境的菌譜庫中進(jìn)行檢索，排除實(shí)驗(yàn)過程中環(huán)境污染的可能。

73藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證菌種鑒定定性方法：

（1）生化試驗(yàn)：藥典上控制菌檢查中的方法梅里埃API試劑條微生物自動(dòng)鑒定儀：VITK等74藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證（2）紅外測定法75藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證(3）上海市所開展的分子生物學(xué)16SRDNA測序和序列分析方法：PCR擴(kuò)增——測序儀——軟件分析——上美國的GenBank網(wǎng)進(jìn)行數(shù)據(jù)比對(duì)——定性——（種）76藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

成立藥品微生物學(xué)檢驗(yàn)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（共10個(gè)）中國藥品生物制品檢定所中國人民解放軍總后藥品檢驗(yàn)所上海食品藥品檢驗(yàn)所黑龍江省藥品檢驗(yàn)所北京藥品檢驗(yàn)所江蘇省食品藥品檢驗(yàn)所浙江省食品藥品檢驗(yàn)所成都市食品藥品檢驗(yàn)所廣東省食品藥品檢驗(yàn)所廣西省食品藥品檢驗(yàn)所77藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理及質(zhì)量保證

微生物限度實(shí)驗(yàn)中：

1、實(shí)驗(yàn)過程的潔凈環(huán)境監(jiān)控：

可以只進(jìn)行浮游菌測定方法：按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。

2、操作者滅菌衣、滅菌手套的監(jiān)控：

①滅菌衣、滅菌手套的無菌檢查。方法：按無菌檢查法中的直接接種法檢查

②操作前、操作結(jié)束時(shí)的手印培養(yǎng)。

方法：將手印按在培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)后計(jì)數(shù)和