丙泊酚、氯胺酮、神經(jīng)節(jié)苷酯對(duì)幼年SD大鼠認(rèn)知功能和神經(jīng)細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究

丙泊酚、氯胺酮、神經(jīng)節(jié)苷酯對(duì)幼年SD大鼠認(rèn)知功能和神經(jīng)細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究第一部分丙泊酚對(duì)幼年SD大鼠認(rèn)知和神經(jīng)細(xì)胞的影響目的:探討反復(fù)注射不同劑量丙泊酚(propofol)對(duì)幼年SD大鼠學(xué)習(xí)記憶功能及Caspase-3和Bcl-2表達(dá)的影響。方法:將日齡17-18天的清潔級(jí)(SPF)幼年SD大鼠32只(體重33g-42g)隨機(jī)平均分為4組,分別給予:生理鹽水10ml/kg(NS組)、丙泊酚50mg/kg(P50組)、丙泊酚100mg/kg(P100組)、丙泊酚200mg/kg(P200組),每天一次,各組均連續(xù)腹腔注射6天。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定給藥方式:NS組,P50組為一次性注射,剩余兩組則分次給藥:丙泊酚首次50mg/kg,待刺激大鼠有體動(dòng)反應(yīng)時(shí)追加50mg/kg,直至給完當(dāng)天總量。每天各組大鼠醒2小時(shí)后,前5天進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)測(cè)試其空間學(xué)習(xí)能力,第6天撤去平臺(tái)并測(cè)試其記憶能力。第6天測(cè)試結(jié)束后處死實(shí)驗(yàn)大鼠,斷頭取腦組織,應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Caspase-3和Bcl-2的表達(dá)情況。結(jié)果:(1)與NS組相比,P100組和P200組逃避潛伏期、上臺(tái)前路程顯著延長(zhǎng),穿越平臺(tái)次數(shù)明顯減少(P<0.05)。(2)免疫組化結(jié)果顯示,P100組和P200組Caspase-3的表達(dá)明顯較NS組與P50組增高(P<0.05)。(3)與NS組相比,P100、P200組Bcl-2的表達(dá)均明顯降低(P<0.05);P50組與NS組相比Bcl-2的表達(dá)沒(méi)有明顯差異(P>0.05);P200組和P100組表達(dá)沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。結(jié)論:小劑量的丙泊酚對(duì)幼鼠的認(rèn)知功能沒(méi)有影響,較大劑量的丙泊酚則可能促發(fā)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡,對(duì)幼鼠的認(rèn)知產(chǎn)生影響,其機(jī)制可能與Caspase-3的表達(dá)增加和Bcl-2的表達(dá)減低,引起神經(jīng)細(xì)胞凋亡有關(guān)。第二部分丙泊酚復(fù)合神經(jīng)節(jié)苷酯對(duì)幼年SD大鼠認(rèn)知功能和神經(jīng)細(xì)胞的影響目的:探討丙泊酚復(fù)合神經(jīng)節(jié)苷酯(GM1)多次給藥對(duì)幼年SD大鼠認(rèn)知功能和腦神經(jīng)細(xì)胞caspase-3表達(dá)的影響。方法:SPF級(jí)SD幼年大鼠77只,日齡17-18天,體重33g-42g,隨機(jī)分為7組,每組11只,每組分別腹腔注射生理鹽水10ml/kg(NS組)、丙泊酚50mg/kg(P50組)、丙泊酚100mg/kg(P100組)、丙泊酚200mg/kg(P200組)、神經(jīng)節(jié)酯10mg/kg(G組)、丙泊酚100mg/kg+神經(jīng)節(jié)酯10mg/kg(P100G)組及丙泊酚200mg/kg+神經(jīng)節(jié)酯10mg/kg(P200G組),連續(xù)腹腔注射6天,給藥方式由預(yù)實(shí)驗(yàn)確定。前5天每天均用Morris水迷宮測(cè)試其空間學(xué)習(xí)能力,第6天撤去平臺(tái)測(cè)試其記憶能力。第6天測(cè)試結(jié)束后處死實(shí)驗(yàn)大鼠,斷頭取腦組織,每組隨機(jī)選取8只應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)caspase-3,余下3只取新鮮組織做western-blotting檢測(cè)。結(jié)果:1水迷宮:1)G組、P50組與NS組相比各項(xiàng)指標(biāo)沒(méi)有顯著性差異。2)P100組與NS組相比潛伏期、上臺(tái)前路程、穿越平臺(tái)次數(shù)均有顯著性差異(P<0.05);P100G組與NS組相比,上臺(tái)前路程明顯變長(zhǎng)(P<0.05)。3)P200組和P200G組尋找平臺(tái)潛伏期比NS組及G組明顯要長(zhǎng),上臺(tái)前路程也明顯延長(zhǎng),穿越平臺(tái)次數(shù)明顯減少(P<0.05)。2、免疫組化檢測(cè):1)G組、P50組與NS組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05);2)P100組、P200組、P100G組和P200G組Caspase-3的表達(dá)與NS組相比均明顯增強(qiáng)(P<0.05);3)P200組,P200G組與P50組相比均有明顯增高(P<0.05);4)P100組與NS組與G組有顯著性差異(P<0.05)。3、western-blotting檢測(cè):1)P50組、G組、P100G組與NS組相比沒(méi)有顯著差異(P>0.05);2)與NS組相比,P100組、P200組和P200G組與β-actin的比值明顯高于NS組與β-actin的比值(P<0.05),這三組之間沒(méi)有顯著性差異。結(jié)論:神經(jīng)節(jié)苷酯能明顯抑制大劑量丙泊酚引起的caspase-3的表達(dá)增加,抑制其引起的神經(jīng)細(xì)胞凋亡,減輕其引起的幼鼠學(xué)習(xí)記憶能力下降。第三部分氯胺酮對(duì)幼年SD大鼠認(rèn)知功能和神經(jīng)細(xì)胞的影響實(shí)驗(yàn)研究目的:觀察氯胺酮對(duì)SD幼年大鼠認(rèn)知功能和腦神經(jīng)細(xì)胞caspase-3表達(dá)的影響。方法:同前,將SPF級(jí)SD幼年大鼠22只,日齡17-18天,體重33g-42g,隨機(jī)分為2組,每組11只,每組分別給予生理鹽水10ml/kg(NS組)、氯胺酮50mg/kg(Keta組),采用腹腔注射,一次性給予,連續(xù)6天。前5天每天均用Morris水迷宮測(cè)試其空間學(xué)習(xí)能力,第6天撤去平臺(tái)測(cè)試其記憶能力。第6天測(cè)試結(jié)束后處死實(shí)驗(yàn)大鼠,斷頭取腦組織,每組隨機(jī)選取8只應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)caspase-3,余下3只取新鮮組織做western-blotting檢測(cè)。結(jié)果:1、水迷宮實(shí)驗(yàn)中氯胺酮組,潛伏期、上臺(tái)前路程變長(zhǎng),穿越平臺(tái)次數(shù)減少,與NS組相比均有明顯差異(P<0.05)。2、免疫組化及