發(fā)酵工程實(shí)驗(yàn)

發(fā)酵工程試驗(yàn)2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院試驗(yàn)一發(fā)酵培養(yǎng)基配制熟悉發(fā)酵培養(yǎng)基配制的要求熟悉玻璃器皿的包扎掌握滅菌方法一.試驗(yàn)?zāi)康?014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院1.營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基蛋白胨10g，牛肉膏3g，NaCl5g，瓊脂20g，加水至1000mL，pH7.2-7.4。通過稱量、溶解和調(diào)節(jié)pH等步驟，配制上述培養(yǎng)基；分裝成200ml/瓶，每人一瓶，進(jìn)行滅菌。2.配制45mL無菌水（內(nèi)裝6顆玻璃珠）一三角瓶/人，4.5mL無菌水試管4枝/人，另外包扎好培養(yǎng)皿6個/人，0.5mL和5mL移液管各1枝/人，涂布棒1枝/人。3.將上述配好的培養(yǎng)基，無菌水，培養(yǎng)基，移液管和涂布棒放入滅菌鍋滅菌，備用。二.試驗(yàn)內(nèi)容2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院三.玻璃儀器的包扎2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院1.移液管的包扎ABCD2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院EFGH2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院2.試管的包扎ABCD2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院E2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院四.思考討論配制發(fā)酵培養(yǎng)基時應(yīng)該注意什么？使用壓力蒸汽滅菌鍋時要注意哪些問題？2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)二發(fā)酵菌種的自然選育學(xué)習(xí)從自然環(huán)境中分離工業(yè)微生物菌株的方法掌握涂布分離方法一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院1.取試管斜面一接種環(huán)，放入裝有45mL無菌水的三角瓶中，震蕩10min，即為10-1的稀釋液；2.取4.5mL無菌水4枝，用記號筆編上10-2、10-3、10-4、10-5.3.取10-1的稀釋液，震蕩后靜止2min，用無菌移液管吸取0.5mL上層細(xì)胞加至一根4.5mL無菌水的試管中，即成10-2的稀釋液；同理，振蕩2min，用無菌移液管吸取10-2的稀釋液0.5mL加至另一根4.5mL無菌水的試管中，即成10-3的稀釋液；依次類推，得到10-4，10-5的稀釋液。4.在超凈臺上，吸取10-5、10-4、

10-3的稀釋液0.1mL，加至瓊脂培養(yǎng)皿平板上，用無菌涂布棒涂布均勻。5.將涂布的培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)于恒溫培養(yǎng)箱中，32℃培養(yǎng)2天后觀察。二.實(shí)驗(yàn)內(nèi)容2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)操作：1.斜面接種無菌操作技術(shù)2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院①②③④2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院⑤⑥⑦2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院2.倒平板：按無菌要求，在火焰旁操作，取融化并冷卻至不燙手的固化培養(yǎng)基（約50℃），倒入無菌培養(yǎng)皿中，倒量以鋪滿皿底為限，不超過培養(yǎng)皿高度的1/3。2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院3.平板劃線接種：2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院平板劃線示意圖2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院菌體細(xì)胞濃度稀釋示意圖2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院涂布示意圖2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院下一次實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備50mL生理鹽水（0.45gNaCl)/人，包扎滅菌；5.0mL,0.5mL移液管，涂布棒/人包扎滅菌；營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每組1L,每人200mL分裝后，滅菌；4.5mL無菌水4枝/人,包扎后滅菌；2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)三發(fā)酵菌種的誘變育種一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私庹T變育種的基本原理掌握突變菌株的分離方法二.紫外線誘變原理2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院1.菌體懸浮液的制備

取單菌落一接種環(huán)，放入裝有50mL的生理鹽水的三角瓶中，用玻璃珠振蕩10分鐘，制得菌體懸浮液。用顯微鏡直接計數(shù)法計數(shù)懸浮液中的細(xì)胞數(shù)，并通過稀釋將懸浮液調(diào)整至大約107個/mL。三.實(shí)驗(yàn)內(nèi)容2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院2.誘變

取9cm直徑無菌培養(yǎng)皿1只/人，加入制備好的菌懸液5mL和磁力攪拌棒（預(yù)先滅菌），然后放于磁力攪拌器上，打開皿蓋，在距紫外線30cm處照射90秒，而后，從中取出0.5mL誘變后菌液，加入4.5mL（10-2）試管中，振蕩搖勻2min，再稀釋至10-3，10-4，10-5，分別取0.1mL涂布平板。3.培養(yǎng)觀察

32℃培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)，2天后觀察培養(yǎng)結(jié)果。2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院思考題誘變育種過程要注意哪些關(guān)鍵步驟？2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)四大米淀粉的液化淀粉的液化配制30％的淀粉乳（按200ml升配制），調(diào)節(jié)pH值至6.5，加入氯化鈣(對固形物0.2％)，加入液化酶(12-20U/g淀粉)，在劇烈攪拌下，先加熱至72℃，保溫15min，再加熱至90℃，并維持30min，以達(dá)到所需的液化程度，碘反應(yīng)呈棕紅色。液化結(jié)束后，再升溫至120℃，保持5-8min，以凝聚蛋白質(zhì)，改進(jìn)過濾。一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊髮W(xué)生掌握用酶法從淀粉原料到水解糖的制備原理及方法。二.實(shí)驗(yàn)內(nèi)容2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院葡萄糖聚合度與碘液的呈色表葡萄糖聚合度與碘液呈色最高吸收波長（nm)葡萄糖無色糊精16淡紅色480

21紅色510

28紅紫色540

34紫色560

41蘭紫色580淀粉61蘭色600淀粉120蘭色620淀粉330蘭色6302014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院淀粉遇碘液呈藍(lán)色糊精遇碘液呈紫色2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院思考題：1.淀粉液化時加氯化鈣的作用？2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)五淀粉的糖化淀粉的糖化液化結(jié)束后，將料液用鹽酸將pH調(diào)至4.2-4.5，同時升溫至60℃。加入糖化酶1.0g，60℃保溫。若干小時后，當(dāng)用無水酒精檢驗(yàn)無糊精存在時，將料液pH調(diào)至4.8-5.0，同時，將料液加熱至80℃，保溫20min．然后將料液溫度降至60-70℃，開始過濾。要求學(xué)生掌握用酶法從淀粉原料到水解糖的制備原理及方法。一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?實(shí)驗(yàn)內(nèi)容2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院淀粉糊精麥芽糖葡萄糖碘液藍(lán)色紫色碘液原色碘液原色無水酒精白色渾濁白色渾濁微溶澄清淀粉液化和糖化的終點(diǎn)判斷糖化酶分解糊精的原理是什么？思考題2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)六發(fā)酵液中還原糖的測定二.實(shí)驗(yàn)步驟1.斐林試劑的標(biāo)定

準(zhǔn)確吸取斐林甲、乙液各5ml，置入250ml錐形瓶，加水10ml，從滴定管中預(yù)先加入約20ml0.1%的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液，搖勻，于電爐上加熱至沸騰，在沸騰狀態(tài)下(同時關(guān)掉電爐，以便滴定終點(diǎn)時顏色判斷）繼續(xù)滴加標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液，至藍(lán)色剛好消失為終點(diǎn)。記錄前后總共消耗的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液的總體積。同法平行操作三份，取接近的兩次體積的平均值V0。2.滴定

準(zhǔn)確吸取斐林甲、乙液各5ml，置入250ml錐形瓶，加水10ml。吸取0.05ml大米淀粉水解葡萄糖液，搖勻后加熱沸騰，繼續(xù)用0.1%的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液滴定至藍(lán)色消失。記錄消耗的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液的總體積V。3.計算

還原糖(g/100ml)=（V0-V)×0.1%×1/0.05×100一.目的：掌握可發(fā)酵性還原糖的測定方法作出發(fā)酵過程的糖耗代謝曲線2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)七發(fā)酵罐結(jié)構(gòu)與空氣管道滅菌1.掌握發(fā)酵罐的基本結(jié)構(gòu)和操作方法2.掌握空氣管道滅菌的方法3.掌握發(fā)酵罐滅菌方法一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院二.發(fā)酵罐結(jié)構(gòu)和基本條件2.1發(fā)酵罐的基本條件1.結(jié)構(gòu)上具有適宜的徑高比。發(fā)酵罐的高度與徑高比一般為1.7~4，罐身越長，氧氣的利用率越高。2.有一定的剛度與強(qiáng)度，由于發(fā)酵罐在滅菌過程和工作時，罐內(nèi)有一定的壓力和溫度。因此需要一定的強(qiáng)度。3.攪拌通風(fēng)裝置使之氣液充分混合，保證發(fā)酵液一定的溶解氧。4.足夠的冷卻面積。5.盡量減少死角。6.軸封嚴(yán)密。7.維修操作檢測方便2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院2.2發(fā)酵罐的結(jié)構(gòu)組成好氣性機(jī)械攪拌發(fā)酵罐是密閉式受壓設(shè)備，主要部件包括罐體、攪拌器、軸封、消泡器、傳動裝置、空氣分布器，擋板、冷卻裝置、人孔和視鏡等。2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院通用的機(jī)械攪拌通風(fēng)發(fā)酵罐主要部件有罐體﹑攪拌器﹑擋板﹑軸封﹑空氣分布器﹑傳動裝置﹑冷卻管(或夾套)﹑消泡器﹑人孔﹑視鏡等。底部排污閥空氣分布器內(nèi)冷卻盤管葉輪夾套人孔齒輪箱軸封視鏡攪拌器切向高度液體高度圖4發(fā)酵罐結(jié)構(gòu)圖及術(shù)語2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)八液化型淀粉酶活力的測定掌握分光光度法測定液化型淀粉酶活力的基本原理和方法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院二、實(shí)驗(yàn)原理

淀粉酶是指能催化分解淀粉分子中糖苷鍵的一類酶，包括α-淀粉酶，淀粉1，4-麥芽糖苷酶（β-淀粉酶），淀粉1，4-葡萄糖苷酶（糖化酶）和淀粉1，6-葡萄糖苷酶(異淀粉酶)。α-淀粉酶可從淀粉分子內(nèi)部切斷淀粉的α-1，4糖苷鍵，形成麥芽糖、含有6個葡萄糖單位的寡糖和帶有支鏈的寡糖，使淀粉的黏度下降，因此又稱為液化型淀粉酶。

淀粉遇碘呈藍(lán)色。這種淀粉-碘復(fù)合物在660nm處有較大的吸收峰，可用分光光度計測定。隨著酶的不斷作用，淀粉長鏈被切斷，生成小分子糊精，使其對碘的藍(lán)色反應(yīng)逐漸消失，因此可以根據(jù)一定時間內(nèi)藍(lán)色消失的程度為指標(biāo)來測定α-淀粉酶的活力。2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院三、實(shí)驗(yàn)步驟1、酶液稀釋用pH6.0緩沖液將粗酶液作適當(dāng)稀釋。2、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:將可溶性淀粉稀釋成0.2%，0.5%，1%1.5%和2%的稀釋液；吸取淀粉稀釋液2.0ml加至試管中，再加入磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液1.0ml，40℃水浴保溫5min；加蒸餾水1mL，40℃保溫30min后加入0.5mol/L乙酸10ml;吸取反應(yīng)液1mL，加稀碘液10mL,混勻，在660nm下測得吸光度A[用2.0mL蒸餾水代替步驟（2）中的淀粉稀釋液作為對照]；以淀粉濃度作為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線。2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院3、淀粉酶活力測定

用2%可溶性淀粉溶液按3(2)操作，用稀釋后的粗酶液1mL代替3(3)中的蒸餾水，測吸光度A660,從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出相應(yīng)的淀粉濃度，求出被酶消耗的淀粉量(表1-3)。2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院管號1234567(樣品)淀粉稀釋液/mL2(0%)2(0.2%)2(0.5%)2(1.0%)2(1.5%)2(2.0%)2(2.0%)緩沖液/mL111111140℃水浴保溫5min蒸餾水/mL1111110粗酶液/mL0000001

40℃保溫30min，然后加入0.5mol/L乙酸10ml，混勻吸取反應(yīng)液1mL稀碘液/mL10101010101010A660表1-3液化型淀粉酶活力測定2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院4、酶活力計算

酶活力以每毫升粗酶液在40℃,pH6.0的條件下每小時所分解的淀粉毫克數(shù)來衡量。四、思考題1、是否可直接用蒸餾水作對照?2、糊精與碘反應(yīng)生成的顏色（如紅色）是否會對結(jié)果產(chǎn)生影響？用糊精溶液作一試驗(yàn)。2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)九麥芽汁的制備1.熟悉麥汁的制備流程，為啤酒發(fā)酵準(zhǔn)備發(fā)酵培養(yǎng)基.2.制備酵母菌繁殖培養(yǎng)基一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院二、實(shí)驗(yàn)原理麥汁制備包括原料糖化、麥醪過濾和麥汁煮沸等幾個步驟。糖化一般分階段進(jìn)行：先將糖化醪調(diào)至35℃，使麥芽中的酶最大限度地溶出,利用麥芽磷酸酯酶水解菲汀成酸性磷酸鹽。在麥芽酶類中，肽酶分解蛋白質(zhì)為多肽和氨基酸，一般溫度為45-50℃，這一過程也叫蛋白質(zhì)休止。α-淀粉酶和β-淀粉酶是兩種關(guān)鍵的酶，它們的最適pH均在5.6左右。α-淀粉酶最適作用溫度70℃左右，50℃以下活性很弱，至80℃是失活，其作用方式為不規(guī)則地切斷淀粉的α-1，4糖苷鍵，產(chǎn)物大部分為糊精，也生成少量麥芽糖、異麥芽糖及葡萄糖。β-淀粉酶的最適作用溫度為60~65℃,能從淀粉及糊精的非還原末端依次切下麥芽糖，同時發(fā)生瓦爾登轉(zhuǎn)位反應(yīng)，即構(gòu)型翻轉(zhuǎn)，α構(gòu)型轉(zhuǎn)變?yōu)棣聵?gòu)型。2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院三、實(shí)驗(yàn)步驟1、麥芽粉碎

稱取100g麥芽，用谷物粉碎機(jī)粉碎，注意調(diào)節(jié)粉碎顆粒度，使粗細(xì)粉比例控制在1：2.5，同時使麥皮破而不碎。必要時可稍稍回潮后再粉碎。2、糖化

糖化是利用麥芽中所含的酶，將麥芽和輔助原料中的不溶性高分子物質(zhì)，逐步分解為可溶性低分子物質(zhì)的過程。制成的浸出物溶液就是麥汁。

浸出糖化法：純碎利用酶的生化作用進(jìn)行糖化的方法。在糖化鍋內(nèi)加入約200ml純凈水，邊攪拌，邊將粉碎后的麥芽粉緩慢倒入糖化鍋內(nèi)，讓麥芽粉分散均勻。然后按下述流程糖化。

35~37℃pH5.2,保溫30min→45~50℃pH5.3,60min→65℃pH5.6,30min(碘液反應(yīng)完全)→

76~78℃用濾紙過濾，得到澄清麥芽汁。2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院四、思考題1.麥芽粉碎程度會對過濾產(chǎn)生怎樣的影響？2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)十麥芽汁（浸出物）濃度的測定了解用密度（比重）瓶法測定密度的原理，掌握測定方法。學(xué)習(xí)用比重瓶測定麥芽汁濃度的方法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院二、實(shí)驗(yàn)原理在一定溫度下，各種物質(zhì)都有其相應(yīng)的密度。當(dāng)物質(zhì)純度改變時，密度也隨著改變，故測定密度可檢測物質(zhì)的純度或溶液的濃度。如在啤酒發(fā)酵中，隨著糖分的消耗、酒精和CO2的產(chǎn)生，密度會逐漸下降，因此可通過測定發(fā)酵液的密度來了解發(fā)酵過程。2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院

為了調(diào)整啤酒釀制時的原麥汁濃度，控制發(fā)酵的進(jìn)程，常常在麥汁制造及啤酒發(fā)酵過程中測定麥汁的濃度，其中主要是測定麥汁及啤酒中所含的浸出物含量，浸出物越多，密度也越大。浸出物是指啤酒中以膠體形式存在的一組物質(zhì)，包括：(1)糖類

啤酒熱值的重要來源。包括可發(fā)酵性糖和非發(fā)酵性糖（低聚糖、糊精、β-葡聚糖和戊聚糖）。低聚糖含量高，可使啤酒口味醇厚，但若可發(fā)酵糖殘留過高，會引起啤酒冷渾濁，不利于啤酒的生物穩(wěn)定性；2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院(2)含氮物質(zhì)

啤酒中的含氮物質(zhì)約為300～800mg/L（以氮計），相當(dāng)于麥汁含氮量的55%～65%。(3)維生素和無機(jī)礦質(zhì)元素

啤酒中含有較多的維生素B、維生素C和0.1%～0.2%的無機(jī)礦質(zhì)元素。它們除賦予啤酒營養(yǎng)價值外，還有一些特殊功效，如鐵、鈷、鎳的鹽類能促進(jìn)啤酒起泡，鈷鹽還有防止噴涌的作用。(4)苦味質(zhì)和多元酚

啤酒中的苦味物質(zhì)是一系列被稱為異α-酸的化合物。啤酒的苦味質(zhì)含量一般為15~40BU,花色苷30～40mg/L，多元酚物質(zhì)100～200mg/L。花色苷過高會破壞啤酒的膠體穩(wěn)定性及香味穩(wěn)定性。

2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院

麥汁和啤酒發(fā)酵液在20℃的密度規(guī)定為，在空氣中20℃樣品與同體積20℃水的質(zhì)量之比值。2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院三、實(shí)驗(yàn)步驟1、空瓶稱量將密度瓶洗干凈后，吹干或低溫烘干（可用少量酒精或乙醚洗滌），冷卻至室溫，精確稱量至0.1mg。2、稱水質(zhì)量將煮沸并冷卻至15~18℃的蒸餾水裝滿密度瓶（注意瓶內(nèi)不要留有氣泡）。裝上溫度計，立即浸入20±0.1℃的恒溫水?。ɑ蛏囵B(yǎng)箱）中，讓瓶內(nèi)溫度計的指示上升至20℃并在20℃下保溫5min，取出密度瓶，并用濾紙吸取溢出支管外的水，立即蓋上小帽，室溫下平衡溫度后，擦干瓶壁上的水精確稱量至0.1mg。2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院3、樣品稱量倒出蒸餾水，用少量麥芽汁洗滌3次后，加入冷卻至15~18℃的樣品，按2測得樣品質(zhì)量。4、密度計算

密度瓶和樣品質(zhì)量-空瓶質(zhì)量樣品密度=———————————————

密度瓶和蒸餾水質(zhì)量-空瓶質(zhì)量5、查表查閱密度-浸出物對照表2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院密度浸出物1.00000.0001.00100.2571.00200.5141.00300.7701.00401.0261.00501.2831.00601.5391.00701.7951.00802.0531.00902.3051.01002.5601.01102.8141.01203.067密度浸出物1.01303.3311.01403.5731.01503.8261.01604.0071.01704.3291.01804.5801.01904.8301.02005.0801.02105.3301.02205.5801.02305.8281.02406.0771.02506.325密度-浸出液濃度對照表（g/100g)密度浸出物1.03909.7511.04009.9931.041010.2341.042010.4751.043010.7161.044010.9951.045011.1951.046011.4351.047011.6731.048011.9121.049012.1501.050012.3871.051012.624密度浸出物1.02606.5721.02706.8191.02807.0661.02907.3121.03007.5581.03107.8031.03208.0481.03308.2931.03408.5371.03508.7811.03609.0241.03709.2671.03809.5092014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院四、思考題若無20℃恒溫水浴，怎樣盡可能測準(zhǔn)密度?2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院掌握酒精含量的測定方法，監(jiān)測酒類產(chǎn)品的質(zhì)量。實(shí)驗(yàn)十一酒精度的測定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院二、實(shí)驗(yàn)原理

蒸餾是分離液體混合物的一種有效方法。其原理是基于發(fā)酵產(chǎn)物的沸點(diǎn)不同，將所需物質(zhì)從液體混合物中分離出來。它與蒸發(fā)不同，蒸發(fā)是去除低沸點(diǎn)物質(zhì)和部分水蒸氣，使代謝產(chǎn)物濃縮的過程，而蒸餾要得到的恰恰是低沸點(diǎn)物質(zhì)。發(fā)酵工業(yè)中常用的蒸餾方法有簡單蒸餾、精餾和特殊蒸餾等。按壓力的不同，又可將簡單蒸餾分為常壓蒸餾、加壓蒸餾和減壓蒸餾。目前酒精、白酒、丙酮、丁醇等都用蒸餾方法來提取。啤酒發(fā)酵中的酒精含量一般較低，好在酒精的沸點(diǎn)只有78oC，因此可用小火將發(fā)酵液或啤酒中的酒精蒸餾出來，收集蒸餾液，測定其密度。然后根據(jù)密度-酒精度對照表(表3-11)，可查得酒精含量。啤酒工業(yè)中，酒精度是指利用在20oC時酒精水溶液與同體積純水的質(zhì)量之比，求得相對密度(d2020),然后查表得出試樣中的酒精的體積分?jǐn)?shù)，以V/V的百分?jǐn)?shù)表示。2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院三、實(shí)驗(yàn)步驟酒精度的測定(1)在已精確稱量至0.05g的500mL蒸餾瓶中，用容量瓶量取100mL除氣的啤酒，用50mL蒸餾水分3次沖洗容量瓶，洗液并入蒸餾瓶中，并加玻璃珠數(shù)粒；(2)按上冷凝器，冷凝器下端用一100mL容量瓶(最好是原容量瓶)接收餾出液。若室溫較高，為了防止酒精蒸發(fā)，可將容量瓶浸于冷水或冰水中(最好用容量瓶，也可先用量筒接取，然后洗入容量瓶中);(3)打開冷卻水，插上電爐電源，開始蒸餾時用文火加熱，沸騰后可加強(qiáng)火力(注意不可讓沸騰后的泡沫流入冷凝器中，冷凝管出口水溫不得超過20oC)，蒸餾至餾出液接近100mL(96mL左右)時停止加熱；蒸餾時間應(yīng)控制在30~60min;(4)取下容量瓶，在20oC平衡一定時間后，加蒸餾水至100mL，混勻;2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院(5)用密度瓶法精確測定溜出液密度；(6)查密度-酒精度對照表(表3-11)，求得酒精含量。2014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院表3-11密度-酒精度對照表密度酒精度密度酒精度密度酒精度密度酒精度1.00000.0000.99701.6200.99403.3200.99105.1300.99990.0550.99691.6750.99393.3750.99095.1900.99980.1100.99681.7300.99383.4350.99085.2550.99970.1650.99671.7850.99373.4900.99075.3150.99960.2200.99661.8400.99363.5500.99065.3750.99950.2700.99651.8900.99353.6100.99055.4450.99940.3250.99641.9500.99343.6700.99045.5100.99930.3800.99632.0050.99333.7300.99035.5700.99920.4350.99622.0600.99323.7850.99025.6350.99910.4850.99612.1200.99313.8450.99015.7000.99900.5400.99602.1700.99303.9050.99005.7600.99890.5900.99592.2250.99293.9650.98995.8200.99880.6450.99582.2800.99284.0300.98985.8902014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院0.99870.7000.99572.3350.99274.0900.98975.9500.99860.7500.99562.3900.99264.1500.98966.0150.99850.8050.99552.4500.99254.2150.98956.0800.99840.8550.99542.5050.99244.2750.98946.1500.99830.9100.99532.5600.99234.3350.98936.0250.99820.9650.99522.6200.99224.4000.98926.2700.99811.1150.99512.6750.99214.4600.98916.3300.99801.0700.99502.7300.99204.5200.98906.3950.99791.1250.99492.7900.99194.5800.98896.4550.99781.1800.99482.8500.99184.6400.98886.5200.99771.2350.99472.9100.99174.7000.98876.5800.99761.2850.994629700.99164.7600.98866.6450.99751.3450.99453.0300.99154.8250.98856.7100.99741.4000.99443.0900.99144.8850.98846.7800.99731.4550.99433.1500.99134.9450.98836.8400.99721.5100.99423.2050.99125.0050.98826.9100.99711.5650.99413.2650.99115.0700.98816.9802014-09-24浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院四、思考題(1)是否可以在餾出液接近90mL時停止蒸餾?(2)如果餾出液大于100mL，會對結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？2014-0