抗原抗體反應(yīng)本科06-9課件

臨床免疫學(xué)檢驗教研室Lcmyjy@126.com免疫學(xué)檢驗是研究免疫學(xué)技術(shù)及其在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中應(yīng)用的一門學(xué)科免疫學(xué)技術(shù)起源于檢測病原微生物菌體抗原及其抗體的血清學(xué)診斷１８９６年Widal首先利用傷寒病人的血清與傷寒桿菌發(fā)生特異性凝集來診斷傷寒病Antigen-antibodyreactioninvitro

1.PrincipleofAg-Abreaction2.CharacteristicsofAg-Abreaction3.InfluencingfactorsofAg-Abreaction4.TypesofAg-Abreaction5.Glossary

廣醫(yī)檢驗系徐霞PrincipleofAg-AbReaction

第一節(jié)抗原抗體反應(yīng)原理

Ag表位和Ab超變區(qū)分子間的結(jié)構(gòu)互補性和親和性第一階段為特異性結(jié)合階段，快第二階段為可見反應(yīng)階段，慢基本條件：結(jié)合力親和性親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體抗原和抗體的結(jié)合是互補性的特異性結(jié)合非共價鍵結(jié)合(Non-covalentBonds)弱的結(jié)合力,極短距離內(nèi)才發(fā)生效應(yīng)

一、抗原抗體結(jié)合力一、抗原抗體結(jié)合力1．靜電引力(electrostaticforce)2．范德華引力(VanderWaalsforce)3．氫鍵結(jié)合力(hydrogenbondingforce)4．疏水作用力(hydrophobicforce)

靜電引力（庫倫引力）

（electrostaticforces）（coulombicforces）

概念：抗原和抗體分子帶有相反電荷的氨基和羧基基團之間相互的引力。

引力的大小與兩個相互作用基團間的距離的平方成反比

疏水作用力(hydrophobicforce)

概念：兩個疏水基團在水溶液中相互接觸時，由于對水分子排斥而趨向聚集的力?？乖瓫Q定簇與抗體上的結(jié)合點靠近，互相間正、負極性消失，親水層立即失去。此力在抗原抗體反應(yīng)中的結(jié)合是很重要的。

提供的作用力最大,約占總結(jié)合力的50%

抗原抗體結(jié)合力示意圖抗原抗體氫鍵結(jié)合力

ONONHH靜電引力--++范德華力-++-+--+疏水作用力排斥的水抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的重要條件是抗原抗體之間特定部位的空間結(jié)構(gòu)必須相互吻合，具有互補性；其次，抗原決定簇與抗體超變區(qū)必須緊密接觸，才能有足夠的結(jié)合力使抗原抗體分子結(jié)合在一起。

二、抗原抗體親和性和親和力親和性（affinity）是抗體分子上一個抗原結(jié)合點與對應(yīng)的抗原表位之間相互適應(yīng)而存在的引力，是抗原抗體之間固有的結(jié)合力。

親和常數(shù)親和性用平衡常數(shù)K表示K值越大，親和性越高；親和性越高，與抗原結(jié)合越牢。親和力親和力（avidity）指抗體結(jié)合部位與抗原表位之間結(jié)合的強度，與抗體結(jié)合價直接相關(guān)（多價優(yōu)勢）

血清學(xué)反應(yīng)條件下，抗原抗體均帶負電荷，使極化的水分子在其周圍形成水化層，成為親水膠體

三、親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體

當(dāng)抗原與抗體結(jié)合后，表面電荷減少，水化層變薄；而且由于抗原抗體復(fù)合物形成后，與水接觸的表面積減少，由親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體。

在電解質(zhì)作用下，各疏水膠體之間靠攏，形成可見的抗原抗體復(fù)合物。

親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體示意圖親水膠體疏水膠體轉(zhuǎn)化NaCl可見反應(yīng)第二節(jié)抗原抗體反應(yīng)的特點*1.特異性*2.比例性*3.可逆性

一、

特異性（specificity）*概念：抗原分子，只能與由它刺激所產(chǎn)生的抗體結(jié)合而起反應(yīng)的專一性能。一、特異性*決定因素：由抗原決定簇和抗體分子超變區(qū)之間空間結(jié)構(gòu)的互補性決定的。

抗體分子N端可變區(qū)形成3nm×1.5nm×0.7nm的槽溝，只有與其空間結(jié)構(gòu)互補的抗原決定簇才能如楔狀嵌入?？贵w的結(jié)構(gòu)抗原抗體互補性結(jié)合特異性示意圖兩種不同的抗原物質(zhì)具有部分相同或類似結(jié)構(gòu)的抗原表位，則可與彼此相應(yīng)的抗體反應(yīng)，為交叉反應(yīng)Cross-ReactionABCD

anti-A

anti-B

anti-C

anti-D

Immunize

ImmunogenCross-reactiveantigen

AEFGABCDReactivitywithrabbitantiserum*最適比(optimalratio)或等價點(equivzlencepoint)最迅速出現(xiàn)沉淀時的抗原抗體的濃度比或量比。二、比例性（proportionality）等價帶(equivalencezone)抗原與抗體分子比例合適的范圍。帶現(xiàn)象：Ag與Ab比例不適而不出現(xiàn)可見反應(yīng)。*前帶(prozone)抗體過量時。*后代(postzone)

抗原過量時。AbAg定量的抗體遞增的抗原出現(xiàn)沉淀量最多的管為最適比例管Marrack網(wǎng)格學(xué)說(lattictheory)比例性示意圖抗體過量比例合適抗原的量抗原過量抗體沉淀的量前帶等價帶后帶

三、可逆性（reversibility)概念：是指抗原與抗體結(jié)合成復(fù)合物后，在一定條件下可解離為游離抗原與抗體的特性。

解離后抗原抗體仍保持原有特性。解離因素：一是抗體對應(yīng)抗原的親和力；二是環(huán)境因素（pH、離子強度等)對復(fù)合物的影響第三節(jié)抗原抗體反應(yīng)影響因素一、反應(yīng)物自身因素

*抗原：1.理化特性2.Ag決定簇數(shù)量3.Ag決定簇種類*抗體：1.來源2.特異性與親和力3.濃度二、環(huán)境條件：*電解質(zhì)：0.85%NaCl*酸堿度：pH6～9*溫度：15～40℃*對照的設(shè)置：陽性對照陰性對照空白對照標(biāo)準品對照第四節(jié)抗原抗體反應(yīng)類型1.沉淀反應(yīng)2.凝集反應(yīng)3.補體參與的反應(yīng)4.中和反應(yīng)5.免疫標(biāo)記表

抗原抗體反應(yīng)的基本類型表反應(yīng)類型實驗技術(shù)檢測方法敏感度沉淀反應(yīng)液相沉淀試驗觀察沉淀、檢測濁度+，++++瓊脂凝膠擴散觀察掃描沉淀線或環(huán)+凝膠電泳技術(shù)或峰或弧++補體參與反應(yīng)補體溶血試驗以裸眼或光電比色儀++補體結(jié)合試驗觀察測定溶血現(xiàn)象+++免疫標(biāo)記技術(shù)熒光免疫技術(shù)檢測熒光現(xiàn)象++++放射免疫技術(shù)檢測放射性++++酶標(biāo)免疫技術(shù)檢測酶底物顯色++++發(fā)光免疫技術(shù)測定發(fā)光強度++++生物素-親合素技術(shù)結(jié)合其它標(biāo)記技術(shù)++++金標(biāo)免疫技術(shù)檢測金顆粒沉淀++++凝集反應(yīng)

直接凝集試驗用裸眼、放大鏡或顯+間接凝集試驗微鏡觀察紅細胞或膠++凝集抑制試驗乳等顆粒和各種凝集+++協(xié)同凝集試驗現(xiàn)象+++抗球蛋白試驗+++中和反應(yīng)病毒中和試驗病毒感染性喪失+毒素中和試驗外毒素毒性丟失++AffinityThestrengthofreactionbetweenantibodyandantigenatasingleantigenicsite.

AffinityconstantDescribesthebindinginteractionbetweenantibodyandantigen.Alsoknownasassociationorequilibriumconstant.

Antibo