結(jié)核分支桿菌檢驗(yàn)?zāi)_本

同學(xué)們大家好，歡迎大家來到微生物檢驗(yàn)課堂。我是伊寧衛(wèi)生學(xué)校的周曉璇老師,本次課我們一起學(xué)習(xí)結(jié)核分支桿菌。結(jié)核分枝桿菌常常被稱為是細(xì)菌界又丑又懶又作精的細(xì)菌，那是為什么呢？讓我們一起來探索。結(jié)核分枝桿菌為細(xì)長直或略彎桿狀，有時(shí)分枝，有莢膜。革蘭染色陽性，但因結(jié)核分枝桿菌外側(cè)有較厚的脂質(zhì)層，故在革蘭染色時(shí)，不易著色，常采用抗酸染色進(jìn)行染色，此菌為抗酸菌。結(jié)核分枝桿菌為專性需氧菌，最適PH值6.5到6.8，生長非常緩慢，繁殖一代需要18到24小時(shí)才能完成，營養(yǎng)要求也高，常采用的培養(yǎng)基為羅氏培養(yǎng)基，在羅氏培養(yǎng)基，培養(yǎng)2到4周后可見乳白色米黃色顆粒結(jié)節(jié)或菜花狀的r型菌落，鑒于結(jié)核分枝桿菌生長緩慢，營養(yǎng)要求高，菌落不規(guī)則的特點(diǎn)，所以被稱為又丑又懶又作精的細(xì)菌。同時(shí)，結(jié)合分枝桿菌的抵抗力，也有它獨(dú)樹一幟的特點(diǎn)，他對75%的乙醇、濕熱、紫外線相對敏感，但可以耐受較干燥、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿的環(huán)境，也可以耐受孔雀綠。微生物檢查法：結(jié)核病的臨床診斷需結(jié)合流行病學(xué)、臨床表現(xiàn)、影像和病理檢查結(jié)果綜合判斷，微生物學(xué)檢查法是確診依據(jù)。根據(jù)疾病類型和病灶部位采集標(biāo)本。如肺結(jié)核采取痰液標(biāo)本，最好取早晨第一次痰液，挑取帶血痰或濃痰。腎或膀胱結(jié)核采取無菌導(dǎo)尿或取中段尿液，腸結(jié)核采取糞便樣本，結(jié)核性腦膜炎，采取腰椎穿刺或采取腦積液。采集后的標(biāo)本可直接涂片或離心沉淀、濃縮集菌后再涂片，用抗酸染色法染色鏡檢，如鏡下找到抗酸桿菌，則報(bào)告為查到抗酸桿菌，既可能是結(jié)核分枝桿菌，也可以是牛分枝桿菌、非結(jié)核分枝桿菌。細(xì)菌涂片檢查法較為簡單快速，但靈敏度低。2.分離培養(yǎng)：將待檢樣品，先置于4%氫氧化鈉或3%鹽酸培養(yǎng)基處理，再用離心沉淀法去沉淀物接入改良羅氏培養(yǎng)基，培養(yǎng)基所含的孔雀綠可抑制雜菌生長，在37℃環(huán)境下培養(yǎng)3-4周，可見菌落生長。根據(jù)生長速度和菌落特點(diǎn)可初步判斷為結(jié)核分枝桿菌。進(jìn)一步用結(jié)核染色法、生化反應(yīng)和分子診斷技術(shù)鑒定菌種。同時(shí)，抗結(jié)核一線藥物的敏感實(shí)驗(yàn)也是非常有必要做的，采用商業(yè)化的快速培養(yǎng)系統(tǒng)，檢測時(shí)間可縮到2-3周，3.免疫學(xué)診斷：（1）結(jié)核菌素皮膚實(shí)驗(yàn)（簡稱TST），也稱ppd實(shí)驗(yàn)，是檢測機(jī)體是否存在針對結(jié)核菌素的遲發(fā)型超敏反應(yīng)的一種皮試實(shí)驗(yàn)，PPD即為純蛋白衍生物。是將細(xì)菌接種于甘油肉湯培養(yǎng)基，收集過濾液并加熱處理，再經(jīng)三氯醋酸沉淀后的純化物，主要成分為細(xì)菌分泌的蛋白質(zhì)且耐熱的成分。實(shí)驗(yàn)方法是：取5單位的PPD，注入受試者前臂下皮，48至72小時(shí)后觀察接種部位出現(xiàn)紅腫應(yīng)激反應(yīng)，并測量應(yīng)急直徑，直徑≥5mm者為陽性，直徑≥20mm者為強(qiáng)陽性，以輔助診斷機(jī)體是否感染結(jié)核分枝桿菌。（2）結(jié)核菌素皮試實(shí)驗(yàn)，又稱TST，TST實(shí)驗(yàn)僅用于輔助診斷兒童結(jié)核病，常用于評估卡介苗的免疫接種效果，潛伏結(jié)核病感染的流行病學(xué)調(diào)查或評估腫瘤病人的細(xì)胞免疫功能。需要注意的是，卡介苗免疫接種可引起不良性反應(yīng)，另外，在發(fā)生感染早期患嚴(yán)重的結(jié)核病或伴有其他嚴(yán)重疾病，致細(xì)胞免疫功能低下，人群可出現(xiàn)陰性反應(yīng)。（3）γ干擾素釋放實(shí)驗(yàn)（IFN-γ）機(jī)體被結(jié)核分枝桿菌感染后，外周血中存在抗原特異性的T細(xì)胞，當(dāng)再次遇到抗原刺激時(shí)，能迅速活化增殖并產(chǎn)生IFN-γ。IFN-γ釋放實(shí)驗(yàn)是基于此原理建立的一種體外免疫檢測結(jié)核分枝桿菌感染的新方法。具體操作方法是：采集受試者外周學(xué)全血，或分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，分離結(jié)核分枝桿菌桿菌較為特意的抗原，通過酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)定量檢測血漿中的IFN-γ的含量或酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)檢（ELISPOT）測分泌IFN-γ的T細(xì)胞的數(shù)量。該實(shí)驗(yàn)方法特異性高于TST，且2天內(nèi)可獲得結(jié)果，但不能將活動(dòng)性結(jié)核病人從潛伏結(jié)核病感染中區(qū)分出來。（4）分子診斷：常用PCR技術(shù)，檢測結(jié)核分枝桿菌DNA，靈敏度高，每毫升標(biāo)本中含有10到100個(gè)活菌即可檢出。RIF技術(shù)：以全自動(dòng)實(shí)時(shí)熒光定量pcr技術(shù)為基礎(chǔ)，檢測rpoB基因?？稍趦尚r(shí)內(nèi)同時(shí)檢測標(biāo)本中存在的結(jié)核分枝桿菌和對利福平的耐藥性，可用于快速診斷。4.防治原則：對于結(jié)核病高負(fù)擔(dān)，國家針對新生兒普遍接種卡介苗（BCG）免疫接種。全球150多個(gè)國家和地區(qū)，包括中國將免疫接種卡介苗納入計(jì)劃免疫，我國規(guī)定，新生兒出生后24小時(shí)內(nèi)要及時(shí)皮下接種卡介苗一次，但不推薦復(fù)種。一般認(rèn)為，卡介苗可有效預(yù)防兒童結(jié)核性腦膜炎，粟粒性肺結(jié)核等重癥結(jié)核病。保護(hù)期僅10到15年，預(yù)防成人肺結(jié)核和潛伏期結(jié)核病感染的效果較差。新一代的結(jié)核病疫苗包括亞單位疫苗、DNA疫苗，改良卡介苗和結(jié)核分枝桿菌減毒活疫苗仍在研究中。治療原則：對作為傳染源的活動(dòng)性肺結(jié)核病人，因早發(fā)現(xiàn)、早報(bào)告