Maldi-tof技術(shù)與質(zhì)譜儀的使用

MALDI-TOF技術(shù)與質(zhì)譜儀的使用南開大學(xué)元素所張森整理pptMALDI技術(shù)離子化技術(shù)：MALDIMatrix-AssistedLaserDesorption/IonizationMALDI技術(shù)的原理樣品與基質(zhì)，在樣品靶外表形成的共結(jié)晶薄膜激光照射，基質(zhì)吸收能量基質(zhì)把能量傳遞給樣品分子，將電荷轉(zhuǎn)移給樣品，樣品電離。整理pptMALDI技術(shù)中基質(zhì)的作用基質(zhì)的作用把樣品分子彼此分開(基質(zhì)：樣品=10，000：1)，削弱樣品分子之間的相互作用。基質(zhì)吸收激光的能量，并將局部能量傳遞給樣品。幫助樣品離子化。整理ppt常用基質(zhì)及選擇基質(zhì)樣品HCCA蛋白，多肽，糖，小分子，極性聚合物DHB蛋白，多肽，糖，小分子，極性聚合物HPA核苷酸Dithranol非極性聚合物IAA非極性聚合物整理pptLaserSampleTargetDetectorClockTime-of-FlightMolecularMassTOF的根本原理整理pptEnablingLifeScienceToolsBasedonMassSpectrometryTMEk

=zqUEk=1/2mV2V2=2qUz/m=2qU/(m/z)整理ppttriggerdiodelaservariableattenuator250l/sturbo250l/sturbo3.4mreflector1.8mlinearMALDITOFMS的構(gòu)成檢測器1：線性模式檢測器2：反射模式整理ppt反射模式下TOF的分辨率高于線性模式整理ppt線性模式和反射模式優(yōu)缺點(diǎn)所選方法（即flexcontrolmethods）反射模式（linear）一般測試分子量小于4000的樣品分辨率高，單同位素清晰準(zhǔn)確線性模式（reflection）一般測試大分子量樣品（M>4000）分辨率低，得到是平均分子量的質(zhì)荷比整理ppt樣品和標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)靶標(biāo)準(zhǔn)品的作用：對儀器參數(shù)進(jìn)行校準(zhǔn)，使樣品測試的質(zhì)量準(zhǔn)確度更高。注意：樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，必須點(diǎn)靶方式一致，所選基質(zhì)一樣。整理ppt內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法:樣品與標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)在同一靶點(diǎn)。優(yōu)點(diǎn)：樣品和標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)條件一致，質(zhì)量準(zhǔn)確度更高，質(zhì)荷比可準(zhǔn)確到0.02。缺點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)品干擾樣品出峰。外標(biāo)法:樣品與標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)在不同靶點(diǎn)。優(yōu)點(diǎn)：無標(biāo)準(zhǔn)品干擾缺點(diǎn)：質(zhì)量準(zhǔn)確度低，質(zhì)荷比準(zhǔn)確到0.1。整理pptMALDI常用點(diǎn)靶方法干滴法〔DriedDroplet〕樣品和基質(zhì)充分混合，點(diǎn)樣樣品靶上。注意：以HCCA和DHB為基質(zhì)的樣品，一般用干滴法點(diǎn)靶薄層法先將基質(zhì)點(diǎn)于靶上，帶基質(zhì)結(jié)晶后，再把樣品溶液點(diǎn)于基質(zhì)的層上。注意：以HPA為基質(zhì)的樣品，都要采用薄層法。整理ppt點(diǎn)樣方法：DriedDropletmatrixanalytesamplesolutionsampledepositionAnalytedispersedthroughoutmatrixcrystalsEnablingLifeScienceToolsBasedonMassSpectrometryTM整理pptMALDI-TOF質(zhì)譜儀的使用標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)靶；樣品點(diǎn)靶；進(jìn)樣品靶；質(zhì)譜測試和圖譜保存：flexcontrol軟件；圖譜讀取和分析：flexanalysis軟件整理ppt點(diǎn)靶本卷須知移液槍的使用取不同試劑，需要更換一次性槍頭。點(diǎn)靶本卷須知防止基質(zhì)污染，防止標(biāo)準(zhǔn)品污染，防止樣品靶污染，防止試劑污染防止樣品靶跌落點(diǎn)靶時，槍頭請勿接觸樣品靶〔懸點(diǎn)〕點(diǎn)完靶，請在靶表相應(yīng)位置標(biāo)明樣品名整理ppt進(jìn)靶和退靶點(diǎn)擊儀器右側(cè)面的綠色按鈕〔loadandeject按鈕〕。在flexControl軟件里，點(diǎn)擊carrier后面按鈕進(jìn)退靶按鈕整理ppt質(zhì)譜測試和圖譜保存質(zhì)譜測試的軟件是：flexcontrol翻開軟件選擇方法校準(zhǔn)儀器的參數(shù)〔與ESI-MS〔LCQ〕差異〕掃描樣品保存數(shù)據(jù)上傳數(shù)據(jù)至大型儀器管理平臺文件系統(tǒng)整理ppt翻開桌面Flexcontrol軟件雙擊翻開flexcontrol整理ppt選擇方法選擇方法整理ppt方法的選擇根據(jù)分子量大小選擇相應(yīng)的方法方法路徑：D:\methods\flexcontrolmethods\usualmethod一般樣品正離子都能出峰；對于正離子模式不出峰的樣品，改換為負(fù)離子模式的方法掃描。更換方法時，對以前的方法不要保存。整理ppt選擇方法L:線性模式R:反射模式P:正離子模式N:負(fù)離子模式PepMix:多肽混合物，適合范圍700-4000DaProtMix:蛋白混合物，適合范圍5000–20000DaClinProt:多肽/蛋白化合物，適合范圍1000–20000Da66kDa:大分子蛋白，適合范圍20000-100000DaProteomics_HPC:高精度校正，適合范圍700-4000DaRP_lowmolecular_HPC高精度校準(zhǔn)，適合范圍100-1000Da整理ppt2.反射模式；正離子；高精度；700-4000Da；與RP_PepMix.par差異不大1.反射模式；正離子；700-4000Da3.線性模式；正離子；700-4000Da4.反射模式；負(fù)離子；700-4000Da5.線性模式；正離子；5000-20000Da6.線性模式；負(fù)離子；700-4000Da7.反射模式；正離子；100-1000整理pptFlexcontrol的按鈕檢測范圍，可微調(diào)掃描區(qū)放大表峰顯示單次掃描顯示疊加圖整理ppt保存數(shù)據(jù)的按鈕整理ppt校準(zhǔn)儀器的參數(shù)整理ppt掃描標(biāo)準(zhǔn)品時，出峰太弱，多疊加幾次。點(diǎn)擊Calibrate，選中疊加圖，點(diǎn)擊自動校準(zhǔn)〔automaticassign〕，點(diǎn)擊apply，即完成自動校正。如果自動校準(zhǔn)通過不了，進(jìn)行手動校準(zhǔn)。注意：必須有三個以上的點(diǎn)匹配上，匹配點(diǎn)越多越好整理ppt手動校準(zhǔn)整理ppt掃描樣品和保存數(shù)據(jù)找到樣品點(diǎn)的位置掃描樣品，疊加并保存數(shù)據(jù)注意：數(shù)據(jù)要保存到課題文件夾內(nèi)，例如：劉育課題組數(shù)據(jù)保存到D:\data\Liuyu\2021\06整理ppt在flexAnalysis翻開保存的路徑樣品的名字保存的是疊加圖FlexAnalysis方法，可不選擇整理ppt數(shù)據(jù)的上傳找到所保存的數(shù)據(jù)文件右鍵點(diǎn)擊發(fā)送到壓縮文件夾〔zipped〕翻開大型儀器管理系統(tǒng)網(wǎng)站〔〕文件系統(tǒng)，上傳壓縮后的數(shù)據(jù)文件夾。整理ppt整理pptMALDI質(zhì)譜圖解析常見離子峰：正電荷模式：加質(zhì)子峰；加合堿金屬峰〔加Na+峰；加K+峰〕;減e-峰負(fù)電荷模式：加e-峰，加Cl-多出現(xiàn)單電荷分子離子峰，雙電荷和多電荷峰弱或幾乎不出現(xiàn)。整理pptMALDI-TOF對樣品的要求MALDI優(yōu)點(diǎn)：耐受高濃度的鹽、緩沖劑和其他非揮發(fā)性的成分。兩種雜質(zhì)嚴(yán)重影響