編制說明-韭菜中氯酸鹽和高氯酸鹽的測定 離子色譜-質(zhì)譜質(zhì)譜法

根據(jù)2023年北京預(yù)防醫(yī)學(xué)會團體標(biāo)準(zhǔn)編制工作要求，北京市疾位承擔(dān)了《韭菜中氯酸鹽和高氯酸鹽的測定離子色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》的的研制中心和北京市大興區(qū)疾病預(yù)防控制中心三家單位對食品和生物樣品中氯酸鹽和開展標(biāo)準(zhǔn)提案工作。2023年3月，北京預(yù)防醫(yī)學(xué)會召開團體標(biāo)準(zhǔn)專家評審會，專家組經(jīng)討論，建議將立項申請拆分成《韭菜中氯酸鹽和高氯酸鹽的測定離子色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》和《母乳、血液和尿液中氯酸鹽和高氯酸鹽的測定離子色2023年2月，北京市疾病預(yù)防控制中心、北京市延慶區(qū)疾病預(yù)防控制中編號姓名工作單位主要工作內(nèi)容1姚凱北京市疾病預(yù)防控制中心建立韭菜中氯酸鹽和高氯酸鹽的檢測方法，并對方法進行優(yōu)化，評估方法的準(zhǔn)確性、精密度，完成方法標(biāo)準(zhǔn)文本和編制說明初稿。負(fù)責(zé)方法驗證征求意見和匯2張晶北京市疾病預(yù)防控制中心協(xié)助撰寫標(biāo)準(zhǔn)文本、編制說明、簡要編制說明、驗證方案、驗證報告等；協(xié)助開展不同樣本的實驗及驗證、評估工作；協(xié)助開展方法驗證、征求意見等工作。3孟娟北京市疾病預(yù)防控制中心協(xié)助撰寫標(biāo)準(zhǔn)文本、編制說明、簡要編制說明、驗證方案、驗證報告等；協(xié)助開展不同樣本的實驗及驗證、評估工作；協(xié)助開展方法驗證、征求意見等工作。4郭巧珍北京市疾病預(yù)防控制中心協(xié)助撰寫標(biāo)準(zhǔn)文本、編制說明、簡要編制說明、驗證方案、驗證報告等；協(xié)助開展不同樣本的實驗及驗證、評估工作；協(xié)助開展方法驗證、征求意見等工作。5林強北京市延慶區(qū)疾病預(yù)防控制中心協(xié)助撰寫標(biāo)準(zhǔn)文本和編制說明；開展實驗室間驗證工作。6李倩北京市大興區(qū)疾病預(yù)防控制中心協(xié)助撰寫標(biāo)準(zhǔn)文本和編制說明；開展實驗室間驗證工作。7鞏俐彤北京市大興區(qū)疾病預(yù)防控制中心協(xié)助開展不同樣本的實驗及驗證工作。2023年9月組織了2家實驗室對該方法進行了方法驗證，確定檢出限、實我國《食品安全法》規(guī)定“國務(wù)院食品安全監(jiān)督管理部門應(yīng)當(dāng)會同國三碘甲狀腺原氨酸的合成量,從而干擾甲狀腺的正常代謝和發(fā)育,甚至誘發(fā)骨髓鐵血紅蛋白癥,并會干擾碘的吸收代謝,對幼兒及兒童健康發(fā)育產(chǎn)生不良影響。火箭固體推進劑等化工領(lǐng)域[6]。這兩種污染物在生產(chǎn)和使用中不合理的處理易導(dǎo)致其遷移至地表水中，污染土壤、飲用水和食品。高氯酸鹽又稱為“強力甲狀小組前期研究結(jié)果顯示我國第四次全國總膳食研究的膳食混樣中高氯酸鹽的檢污染水平較高。2016-2017年間我國食品安全鹽暴露水平最高，為4.88μg/kg；對北京市售的17種牛奶樣品中100批次果蔬進行測定，氯酸鹽檢出6批次，主要包括生姜和青菜等，檢出范SN/T4089-2015《進出口食品中高氯酸鹽的測定高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，只檢測食品中高氯酸鹽，不能同時檢測食品中氯酸鹽。原國家食品藥品監(jiān)督管理總局（現(xiàn)國家市場監(jiān)督管理總局）于2017年發(fā)布了食程序手冊》進行編寫。并且按照GB/T27404-2008《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范、食品溶液提取、固相萃取對韭菜中的氯酸鹽和高氯酸鹽進行前處理，采用離子色譜-本標(biāo)準(zhǔn)的主要技術(shù)內(nèi)容包括樣品的前處理條件優(yōu)化和離子色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測數(shù)如下1）樣品前處理：韭菜樣品稱取2.0g，置于50mL離心管中，加入適量氯酸鹽和高氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，振蕩混合后靜置30min。加入強陰離子交換色譜柱；KOH作為淋洗液梯度淋洗，進樣量5L3）質(zhì)譜條件：建立適用于韭菜中氯酸鹽和高氯酸鹽的離子色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜測定萃取小柱凈化，采用離子色譜分離，串聯(lián)質(zhì)譜已有方法通常采用甲醇水溶液或乙腈水溶液對食品樣品進行提取，有的報道中還加入少量甲酸以提高提取效率。我們針對韭菜樣品進行了提取液的考察，發(fā)現(xiàn)乙腈溶液的提取效果優(yōu)于水和同等比例的甲醇水溶液。從圖1可以看出僅使用水作為提取液時，盡管經(jīng)過了高速離心，蔬菜的殘渣依然呈現(xiàn)松散狀，溶液較渾濁，雜質(zhì)明顯偏多，給后續(xù)凈化帶來不便。當(dāng)在水中加入0.1%甲酸時，上述情況有了明顯的改善。蔬菜沉渣變得較為緊實，但是依然有少量的絮狀渾濁。當(dāng)采用70%的甲醇水和乙腈水時，提取液變得澄清透亮，尤其是乙腈體系，沉淀團聚性明顯優(yōu)于甲醇體系。說明乙腈溶液更適合這些基質(zhì)中目標(biāo)化合物的提取。接下來，我們對乙腈的比例做了進一步優(yōu)化，將提取液總體積固定為10ml,選取動物性食品肉、蛋和奶粉，加入乙腈/水比例為5:5、6:4、7:3和8:2的提取液。結(jié)果表明提取液中乙腈/水比例為6:4時，回收率效果最好。因此提取液選取的乙腈/水比例為2:8、5:5、6:4和7:3。發(fā)現(xiàn)在加入乙腈/水比例為6:4的提取液時，氯酸鹽和高氯酸鹽的絕對回收率相對較高。因此，確定提取液中乙腈和水的比例約為6:4。為了避免乙腈加入時目標(biāo)化合物產(chǎn)生共沉淀現(xiàn)象，我們選擇先加入水溶液，再加入乙腈溶液，即先加入4mL水溶液超聲提取15min,再加入6mL乙腈溶液超聲提取30min。固相萃取凈化是高氯酸鹽和氯酸鹽測定時普遍采用的凈化方式，QuEChERS分散固相萃取填料和商品化的固相萃取小柱均有很多應(yīng)用，考慮到固相萃取小柱優(yōu)于其他兩種小柱。進一步考察回收率和基質(zhì)效應(yīng)兩項指標(biāo)(圖2),發(fā)現(xiàn)三種小柱的平均絕對回收率對高氯酸鹽差別不大，基本上在90%左右，但GCB氯酸鹽參考已有的食品中氯酸鹽和高氯酸鹽測定的文獻薦的飲用水測定標(biāo)準(zhǔn)方法。離子色譜法的原理主要利用的相互交換，再經(jīng)洗脫后，利用電導(dǎo)檢測器進行檢測。氯酸鹽和高氯酸鹽可以進行較為準(zhǔn)確的定性定量，但其柱，氫氧化鉀為淋洗液檢測了食品中氯酸鹽和高氯酸鹽的含量檢出限低、抗干擾能力強的特點。因此，本標(biāo)準(zhǔn)選擇離采用三重四極桿質(zhì)譜對兩種目標(biāo)化合物進行測定，質(zhì)ESI源,負(fù)離子模式;掃描方式:多反應(yīng)監(jiān)測模式(mu表1目標(biāo)化合物及內(nèi)標(biāo)的質(zhì)譜條件m/zm/z和AS20柱均能滿足兩種離子的檢測，只是在烯苯交聯(lián)）的乳膠型填料，適于短時間內(nèi)痕量高氯酸鹽的表2目標(biāo)化合物離子色譜淋洗條件時間（min）100mMKOH比例（%）0-77.5585820對應(yīng)的質(zhì)量濃度X(μg/L)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,考察本方法的線性范圍。結(jié)果表明,高氯酸鹽質(zhì)量濃度在0.25~100.0μg/L范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系,線性方程Y=0.0605209X-0.00329203,相關(guān)系數(shù)(r)大于0.999；氯酸鹽質(zhì)量濃度在0.002~1.0mg/L范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系,線性方程為Y=分別以3倍信噪比和10倍信噪比計算目標(biāo)物的檢出限和定量限。與色譜方法不同，質(zhì)譜方法的檢出限和定量限會受到儀器型號、淋洗液、色譜柱、樣本基質(zhì)等多方面的影響。因此質(zhì)譜方法的指標(biāo)需要考慮多方面的影響。本方法稱樣量為2g時，韭菜中氯酸鹽的檢出限為10.0μg/kg,定量限為50.0μg/kg;高氯酸鹽的檢出限為2.00μg/kg,定量限為5.0μg/kg。向韭菜中加入濃度為5μg/kg(低)、20μg/kg(中)和100μg/kg(高)的高氯酸鹽和10倍濃度的氯酸鹽，計算加標(biāo)回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表4?？梢钥闯?，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.57~7.68%,回收率為86.7~107%,多次測定結(jié)果顯示其具有較好的重現(xiàn)性，滿足測定要求。表4方法精密度和準(zhǔn)確度氯酸鹽（g/kg）高氯酸鹽（g/kg）本底值添加水平實測值率%平均回收率%RSD%本底值添加水平實測值率%平均回收率%RSD%21.15074.16.674.2459.0997.098.84.0769.496.68.8792.671.19.2575.79.2399.879.59.4874.29.1698.420020190.296.97.682020.882.886.73.2320592.122.591.421998.921.385.521697.221.686.820692.721.586.224221.787.52.6199.2氯酸鹽和高氯酸鹽在2.5-500ng/mL和0.25-500表5延慶區(qū)CDC驗證結(jié)果氯酸鹽（g/kg）高氯酸鹽（g/kg）本底值添加水平實測值率(%)平均率(%)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD%本底值添加水平實測值率(%)平均率(%)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD%50520000表6延慶區(qū)CDC驗證結(jié)果氯酸鹽（g/kg）高氯酸鹽（g/kg）本底值添加水平實測值回收率(%)平均回收率(%)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD%本底值添加水平實測值回收率(%)平均率(%)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD%5052000（1）韭菜提取液經(jīng)離心后形成的沉淀比較松散，應(yīng)盡快轉(zhuǎn)移或進行固相萃（2）氯酸鹽和高氯酸鹽在環(huán)境中普遍存在，因此實驗過程中要注意過程空國外關(guān)于氯酸鹽和高氯酸鹽的檢測標(biāo)準(zhǔn)方法或推薦標(biāo)準(zhǔn)方法主要是針對飲Waterquality-Determinationofdissolvedperchlorate-chromatograpHy(IC)（水中高氯酸鹽的測定離子色譜法氯酸鹽檢測標(biāo)準(zhǔn)ENISO10304-4:1999Waterquality-DetchromatograpHyofions-Part4:DeterminationofDeterminationOfPesticidesinFoodInvolvingExMeasurement（植物源性食品中強極性藥物的測定高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法）表7國際相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)情況匯總1水2chromatograpHyofions-Part4:Determinationofchlorate,chlorandchloriteinw水3QuickMethodfortheAnalysisofNumerousHighlyPolarPesticidesinFoodInvolvingExtrAcidifiedMethanolan