液相色譜：1-色譜發(fā)展歷史和分類

液相色譜發(fā)展歷史及分類液相色譜-發(fā)展歷史慢中等色譜分離過程示意圖

快

淋洗液Temporal

course

色譜發(fā)展歷史1903年，Tswett

發(fā)表了吸附色譜分離植物色素

的論文，并1906年正式提出色譜法。

1931年，Ledeer的工作，色譜技術(shù)受到重視。

1938年,Izomailov

和Shraiber

薄層色譜，同年

，Taylor和Uray用離子交換色譜分離了鋰和鉀

同位素

1944年，美國橡樹嶺實(shí)驗(yàn)室和衣阿華州大學(xué)分

離和鑒定了稀土元素。1941年，Martin和Synge發(fā)展了分配色譜。1903年，葉綠素的分離色譜發(fā)展歷史?

1944年，Martin發(fā)展了紙色譜?

1952年，Martin和

James發(fā)展了氣-液分配色譜，氣相色譜問世。?

1956年，Van

Deemter等發(fā)表了速率理論。?

1957年，制作了離子色譜交換氨基酸分析儀。?

1959年，凝膠過濾色譜。?

Giddings

于1963年奠定色譜理論。?

1969年，現(xiàn)代液相色譜，1975年，離子色譜法。?

1981年，毛細(xì)管電泳。?

高效液相色譜法的特點(diǎn)（三高一快）?

a.分析效率高-液相色譜柱的柱效可以達(dá)到5×103-----3×104塊/m，而原來的經(jīng)典色譜柱的柱效只有2-50塊/m。?

b.選擇性高-高效液相色譜法不僅可以分析不同類型的有機(jī)化合物及其同分異構(gòu)體，還可以分析在性質(zhì)上極為相似的旋光異構(gòu)體，并已在高療效的合成藥物及生化藥物的生產(chǎn)控制分析中發(fā)揮了巨大的作用。?

c.檢測靈敏度高-在高效液相色譜中使用的大多數(shù)檢測器都有較高的靈敏度。?

d.分析速度快-由于高壓輸液泵的使用，相對于傳統(tǒng)液相色譜，其分析速度大大降低，完成一個樣品的檢測需要幾分鐘到幾十分鐘。高效液相色譜與傳統(tǒng)液相色譜的比較高效液相色譜與氣相色譜的比較我們通常所說的高效液相色譜（High

Performance

LiquidChromatography)實(shí)際也是高壓液相色譜(High

PressureLiquid

Chromatography),因?yàn)闆]有很高的壓力就不可能產(chǎn)生很高的分離效率。液相色譜與氣相色譜的巨大差異主要是由于液體與氣體性質(zhì)的差異：?溶質(zhì)在液體中的擴(kuò)散系數(shù)比它在氣體中小105倍左右?液體粘度比氣體約大102倍?液體表明張力比氣體大104倍左右?液體密度比氣體約大103倍?液體不可壓縮液相色譜-分類液相色譜法分類?

1.根據(jù)分離機(jī)制吸附、分配、離子交換、親和色譜、體積排阻色譜?

2.根據(jù)流動相與固定相極性正相

反相正相色譜法

極性固定相，流動相為相對非極性的疏水性溶劑，常用于分離中等極性和極性較強(qiáng)的化合物（如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等）。反相色譜法

非極性固定相（如C18、

C8）

流動相為水或緩沖液適用于非極性和極性較弱的化合物，它占整個HPLC應(yīng)用的80%左右。液相色譜法分類?

1.吸附色譜

（Adsorption

Chromatography）用固體吸附劑作為固定相，以不同極性溶劑作為流動相，依據(jù)樣品中各組分在吸附劑上的吸附性能的差別來實(shí)現(xiàn)分離。?

2.分配色譜（partition

Chromatography

）利用固定相與流動相之間對待分離組分溶解度的差異來實(shí)現(xiàn)分離。分配色譜的固定相一般為液相的溶劑，依靠圖布、鍵合、吸附等手段分布于色譜柱或者擔(dān)體表面。分配色譜過程本質(zhì)上是組分分子在固定相和流動相之間不斷達(dá)到溶解平衡的過程。液相色譜法分類?

3.離子色譜

(Ion

Chromatography

)

用高效微粒離子交換劑作為固定相，以具有一定pH值的緩沖溶液做為流動相，依據(jù)離子型化合物中各離子組分與離子交換劑上表面帶電荷集團(tuán)進(jìn)行可逆性離子交換能力的產(chǎn)別來實(shí)現(xiàn)分離。?

4.體積排阻色譜（Size

Exclusion

Chromatography）用化學(xué)惰性的多孔性凝膠做固定相，按固定相對樣品中個組分分子體積阻滯作用的差別來實(shí)現(xiàn)分離。以水溶液作為流動相的體積排阻色譜法，成為凝膠過濾色譜（Gel

Fitration

Chromatography

）；以有機(jī)溶劑作為流動相的體積排阻色譜法，成為凝膠滲透色譜（Gel

Permeation

Chromatography

）液相色譜法分類?

5.親和色譜（Affinity

Chromatography）親和色譜也稱為親和層析，是一種利用固定相的結(jié)合特性來分離分子的色譜方法。親和色譜在凝膠過濾色譜柱上連接與待分離的物質(zhì)有一定結(jié)合能力的分子，并且它們的結(jié)合是可逆的，在改變流動相條件時二者還能相互分離。親和色普可以用來從混合物中純化或濃縮某一分子，也可以用來去處或減少混合物中某一分子的含量高效液相色譜法的應(yīng)用范圍及局限性?

應(yīng)用范圍?

高效液相色譜法適于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定

易分解的、分子量大的、不同極性的有機(jī)化合物；生物活

性物質(zhì)和多種天然產(chǎn)物；合成的和天然的高分子化合物等

。?

涉及到是有化工產(chǎn)品、食品、合成藥物、生物化工產(chǎn)品及

環(huán)境污染物等領(lǐng)域，約占全部有機(jī)化合物的70-80%，其

余20-30%的有機(jī)化合物，包括永久性氣體，易揮發(fā)低沸

點(diǎn)及中等分子量的化合物，只能用氣相色譜法進(jìn)行分析。各種色譜法的應(yīng)用綜合圖高效液相色譜法的局限性?

HPLC

與GC相比，雖有其特定的優(yōu)勢，但也有一定的局限性。?

⒈在HPLC中，所用流動相不止一種(多種)，因此其分析成

本高，且易起環(huán)境污染；當(dāng)進(jìn)行“梯度洗脫”操作時(相當(dāng)于

GC中的程序升溫技術(shù))，比GC的程度升溫操作要復(fù)雜的多?

⒉HPLC目前還缺少像GC中的通用型檢測器(如TCD、FID);?

⒊