VERO細(xì)胞培養(yǎng)課件

細(xì)胞培養(yǎng)1cellculture1精選2021版課件細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)從生物體內(nèi)取出組織或細(xì)胞，在體外(invitro)模擬體內(nèi)生理環(huán)境，在無菌、適當(dāng)溫度和一定營養(yǎng)條件下，對這些組織或細(xì)胞進(jìn)行孵育培養(yǎng)，使之保持一定的結(jié)構(gòu)和功能，以便于我們觀察研究，這種方法就是細(xì)胞培養(yǎng)（cellculture）。有時細(xì)胞培養(yǎng)也稱為組織培養(yǎng)（tissueculture)。2精選2021版課件細(xì)胞培養(yǎng)目的和用途

1、科學(xué)研究

（1）藥物研究開發(fā)，如新藥篩選，疫苗、基因工程藥物、細(xì)胞工程、藥物研究與開發(fā)、單克隆抗體制備等（2）基礎(chǔ)研究，如藥物作用機(jī)理、基因功能、疾病發(fā)生機(jī)理等研究2、生物制藥（1）疫苗生產(chǎn)：如病毒性疫苗(肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等)，多肽疫苗（腫瘤疫苗)等（2）基因工程藥物生產(chǎn)：如EPO等（3）抗體藥物、基因治療藥物生產(chǎn)（4）細(xì)胞工程藥物生產(chǎn)：生物細(xì)胞內(nèi)的一些生物活性多肽，生物活性物質(zhì)等（5）利用細(xì)胞法體外測定生物活性物質(zhì)的活性；并預(yù)測其在體內(nèi)的藥效和替代體內(nèi)法檢測其成品的生物活性3精選2021版課件主要內(nèi)容基本概念準(zhǔn)備工作培養(yǎng)用液基本技術(shù)污染及防治腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)參考資源4精選2021版課件基本概念5精選2021版課件初代培養(yǎng)（primaryculture）

又稱原代培養(yǎng)，即直接從體內(nèi)取出的細(xì)胞、組織和器官進(jìn)行的第一次的培養(yǎng)物，一般持續(xù)1-4周。

一旦已進(jìn)行傳代培養(yǎng)（Subculture）的細(xì)胞，便不再稱為初代培養(yǎng)，而改稱為細(xì)胞系。傳代培養(yǎng)（subculture/passage）

細(xì)胞在培養(yǎng)器皿中生長一定時間后，被分開接種到新的培養(yǎng)器皿中,一般情況下可傳代10-50次。也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過程?？寺。╟lone）從一個細(xì)胞靠有絲分裂獲得的一個細(xì)胞群體（population）從一個經(jīng)過生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群，稱細(xì)胞株（strain）再由原細(xì)胞株進(jìn)一步分離培養(yǎng)出與原株性狀不同的細(xì)胞群，稱為亞株（Substrain）6精選2021版課件cellline:原代培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代成功后即成為細(xì)胞系。如果不斷繼續(xù)傳代或傳代數(shù)有限，可稱為有限細(xì)胞系（finitecellline）如果可以連續(xù)傳代，則可稱為連續(xù)細(xì)胞系（continouscellline）或無限細(xì)胞系（InfiniteCellLine）有惡性的無限細(xì)胞系：“惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞系”只具永生性而無惡性的細(xì)胞系：無限細(xì)胞系或轉(zhuǎn)化細(xì)胞系:NIH3T3、Rat-1細(xì)胞系7精選2021版課件細(xì)胞株cellstrain:由原代培養(yǎng)中，用選擇或克隆，選出具有特征標(biāo)記的細(xì)胞，經(jīng)傳代形成細(xì)胞株。如果不能繼續(xù)傳代或傳代數(shù)有限，稱為有限細(xì)胞株（finitecellstrain）如果可以連續(xù)傳代，稱為連續(xù)細(xì)胞株（continuouscellstrain）。8精選2021版課件細(xì)胞周期指細(xì)胞一個世代所經(jīng)歷的時間從一次細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個周期反應(yīng)細(xì)胞增殖速度9精選2021版課件體外培養(yǎng)細(xì)胞的種類和命名

腫瘤細(xì)胞系多由癌瘤建成，多呈類上皮型細(xì)胞，常已傳幾十代或百代以上，并具有不死性和異體接種致瘤性。細(xì)胞的命名無嚴(yán)格統(tǒng)一規(guī)定，多采用有一定意義縮寫字或代號表示幾種代表性的細(xì)胞名稱：

HeLa：供體患者的姓名（來源于宮頸癌）

CHO：中國地鼠卵巢細(xì)胞（ChineseHamsterOvary）

宮-743：宮頸癌上皮細(xì)胞，1974年3月建立

NIH3T3：美國國立衛(wèi)生研究所（NationalInstituteofHealth）建立；每3天傳代，每次接種3×105細(xì)胞／ml

10精選2021版課件建立細(xì)胞系（或株）的要求原代培養(yǎng)的細(xì)胞只要供體均一，取材部位及組織種類等條件穩(wěn)定即可傳代的細(xì)胞，需做如下說明：1、組織來源：細(xì)胞供體所屬物種，來自人體或者動物；個體性別、年齡；取材的器官或組織。如系腫瘤組織，應(yīng)說明臨床和病理診斷，以及病歷號等。2、細(xì)胞生物學(xué)檢測：了解細(xì)胞一般和特殊的生物學(xué)性狀，如細(xì)胞一般形態(tài)，特異結(jié)構(gòu)，細(xì)胞生長曲線和分裂指數(shù)，倍增時間，接種率等。如為腫瘤細(xì)胞，為說明來源于原腫瘤組織并保持惡性，須做軟瓊脂培養(yǎng)，異體接種致瘤和對正常組織侵潤力等實(shí)驗(yàn)。3、培養(yǎng)條件和方法：

應(yīng)說明細(xì)胞系（或株）適應(yīng)的生存環(huán)境，即指明使用的培養(yǎng)基、血清種類、用量以及適宜PH值。

11精選2021版課件國內(nèi)外相關(guān)細(xì)胞庫

國內(nèi)細(xì)胞庫

武漢細(xì)胞庫

/fzlbc/cell.doc

上海細(xì)胞庫

/xibao/catalogue.html

昆明細(xì)胞庫

/CELL.HTM

成都基因治療腫瘤藥物工程技術(shù)研究中心細(xì)胞及載體服務(wù)

/cell_catalog.asp

南京中醫(yī)藥大學(xué)新藥及海洋藥物研究中心藥理毒理研究室細(xì)胞庫目錄

/web/keyanziyuan/haiyangcell1.htm

湖南遠(yuǎn)泰生物技術(shù)有限公司生物資源庫

/Source.asp

上海午立生物技術(shù)有限公司細(xì)胞株

/cpjs-4.htm

中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞中心保藏細(xì)胞目錄

/cellhouse.doc

上海華大天源生物科技有限公司提供高表達(dá)GPCR細(xì)胞株和報(bào)告基因分析細(xì)胞系：

/03chanpin.htm

中國工業(yè)微生物菌種保藏中心

/inl%20col/introduction.htm

臺灣快興科技股份有限公司Cambrex產(chǎn)品

.tw/Cambrex.htm

臺灣國家衛(wèi)生研究院

.tw/index/home2.htm

美國和歐洲細(xì)胞庫

ATCC（細(xì)胞株及胚胎干細(xì)胞庫）

1）下載細(xì)胞庫目錄：/pdf/tcl.pdf2）查詢細(xì)胞株：/SearchCatalogs/CellBiology.cfm3）胚胎干細(xì)胞庫：/products/cells.cfm

CABRI(包括ECACC、DSMZ)

/HyperCat/cells/all.htm

CAMBREX

/Content/General/CatalogMap.asp

意大利I.A.Z.

http://www.i-a-z-zellkultur.de/haupt_en/cell.html

歐洲細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室列表（大全）

http://www.biotech.ist.unige.it/cldb/labs.html

意大利IZSLER細(xì)胞庫

http://www.bs.izs.it/cataloghi/cellule/

ABi病毒

/products/viruses/default.htm

德國PromoCell原代細(xì)胞

/en/Navigate/product0.php3?target1=11lang=US

12精選2021版課件細(xì)胞庫ATCC:AmericanTypeCultureCollection(美國標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)物收集所)ECACC:EuropeanCollectionofCellCultures(歐洲動物細(xì)胞庫)JCRB:JapaneseCollectionofResearchBioresources(日本細(xì)胞庫)CCTCC:ChinaCenterforTypeCultureCollection(中國典型培養(yǎng)物保藏中心)13精選2021版課件ATCCWHO的國際培養(yǎng)細(xì)胞文獻(xiàn)中心ATCC液氮凍存有3200個已經(jīng)過鑒定的細(xì)胞系來自正常人和各種疾病患者的皮膚成纖維細(xì)胞系來自不同物種的近75個雜交瘤細(xì)胞株ATCC接納入庫細(xì)胞時，必須符合其入庫標(biāo)準(zhǔn)，檢測項(xiàng)目如下：培養(yǎng)簡歷凍存液細(xì)胞活力培養(yǎng)液細(xì)胞形態(tài)核型無污染檢測物種檢測免疫檢測細(xì)胞建立者14精選2021版課件培養(yǎng)細(xì)胞的類型及其特點(diǎn)

培養(yǎng)細(xì)胞的生長方式貼附生長：必須貼附于支持物表面才能生長。見于各種實(shí)體瘤細(xì)胞。懸浮生長：于懸浮狀態(tài)下生長，不需要貼附于支持物表面。包括一些取自血、脾或骨髓的培養(yǎng)細(xì)胞，尤其是血液白細(xì)胞，以及一些腫瘤細(xì)胞，如白血病細(xì)胞。15精選2021版課件16精選2021版課件17精選2021版課件

每代貼附生長細(xì)胞的生長過程游離期貼壁期潛伏期對數(shù)生長期停止期（平臺期）18精選2021版課件細(xì)胞接種后在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)此時細(xì)胞回縮，胞體呈圓球形10分鐘～4小時游離期（懸浮期）19精選2021版課件細(xì)胞附著于底物上，游離期結(jié)束。底物：膠原、玻璃、塑料、其它細(xì)胞等血清中有促使細(xì)胞貼壁的糖蛋白（生長基質(zhì)），這些促貼壁因子先吸附于底物上，懸浮細(xì)胞再與吸附有促貼壁因子的附著。貼壁期20精選2021版課件21精選2021版課件22精選2021版課件此時細(xì)胞有生長活動，而無細(xì)胞分裂潛伏期：6～24小時潛伏期23精選2021版課件細(xì)胞數(shù)隨時間變化成倍增長，活力最佳，最適合進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究對數(shù)生長期24精選2021版課件細(xì)胞長滿瓶壁后，細(xì)胞雖有活力但不再分裂機(jī)制：接觸抑制、密度依賴性相互接觸后，如培養(yǎng)的是正常細(xì)胞，由于細(xì)胞的相互接觸能抑制細(xì)胞的運(yùn)動，這種現(xiàn)象稱接觸抑制（ContactInhibition）。當(dāng)細(xì)胞密度進(jìn)一步增大，培養(yǎng)液中營養(yǎng)成分減少，代謝產(chǎn)物增多時，細(xì)胞因營養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響，則發(fā)生密度抑制（DensityInhibition），導(dǎo)致細(xì)胞分裂停止

腫瘤細(xì)胞的接觸抑制及密度抑制往往減弱或消失，因此細(xì)胞可向三維空間發(fā)展，導(dǎo)致細(xì)胞堆積，并可生長至較高的終末細(xì)胞密度?？勺鳛閰^(qū)別正常與癌細(xì)胞標(biāo)志之一。平臺期25精選2021版課件26精選2021版課件1、無污染環(huán)境：保證細(xì)胞生存的首要條件

2、恒定的溫度：36.5℃±0.5℃

3、氣體環(huán)境：95%空氣，5%二氧化碳混合氣體4、細(xì)胞培養(yǎng)基：基礎(chǔ)物質(zhì)、生存環(huán)境(pH7.2-7.4、滲透壓)

培養(yǎng)細(xì)胞生存條件27精選2021版課件培養(yǎng)細(xì)胞的生存條件培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶

溫度、濕度和氣體由CO2恒溫孵育箱提供

生長培養(yǎng)液10～20％血清

維持培養(yǎng)液2～5％血清

營養(yǎng)物質(zhì)糖、氨基酸、維生素、無機(jī)離子、微量元素等

28精選2021版課件實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)室設(shè)備器材實(shí)驗(yàn)器材處理細(xì)胞培養(yǎng)用液的配制29精選2021版課件實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)準(zhǔn)備室（包括配液室）無菌室：緩沖間、操作間30精選2021版課件設(shè)備器材大型工具類超凈工作臺CO2培養(yǎng)箱倒置顯微鏡液氮罐酶標(biāo)儀、微孔板震蕩器消毒滅菌類紫外燈、壓力蒸汽消毒器，電熱干燥箱，濾器，酸缸配液用具自動雙重純水蒸餾器，純水儀制備細(xì)胞用品耗材：培養(yǎng)瓶，吸管，培養(yǎng)板，凍存管31精選2021版課件準(zhǔn)備室的設(shè)備：蒸餾器酸缸烤箱高壓鍋儲品柜（放未消毒物品）儲品柜（放消毒過的物品）包裝臺配液室的設(shè)備：扭力天平和電子天平PH計(jì)磁力攪拌器32精選2021版課件培養(yǎng)室的設(shè)備：液氮罐低溫冰箱（-80℃）CO2孵箱（孵育培養(yǎng)物）二氧化碳缸瓶4℃冰箱（放serum和培養(yǎng)用液）日光燈和紫外燈儲品柜（存放雜物）水浴鍋邊臺（書寫實(shí)驗(yàn)記錄）空氣凈化器系統(tǒng)三氧消毒殺菌機(jī)空調(diào)必須放在無菌間的設(shè)備：離心機(jī)超凈工作臺倒置顯微鏡33精選2021版課件壓力蒸汽消毒器：濕熱消毒，用途廣電熱干燥箱：用干玻璃器皿消毒（160℃，2h）濾器：過濾法除菌：大多數(shù)培養(yǎng)用液(人工合成培養(yǎng)基、血清、酶液等)超凈工作臺：為細(xì)胞操作提供無菌環(huán)境紫外燈：用于培養(yǎng)室空氣、操作臺、塑料培養(yǎng)皿和培養(yǎng)板等表面消毒

34精選2021版課件超凈工作臺工作原理利用鼓風(fēng)機(jī)驅(qū)動空氣遁過高效濾器除去空氣中的塵埃顆粒，使空氣得到凈化。凈化空氣徐徐通過工作臺面，使工作臺內(nèi)構(gòu)成無菌環(huán)境。35精選2021版課件濾器36精選2021版課件CO2培養(yǎng)箱設(shè)定條件為37℃，5％CO2

使用時應(yīng)注意：①用螺旋口瓶培養(yǎng)細(xì)胞時，需將瓶蓋微松，以保證通氣②保持培養(yǎng)箱內(nèi)空氣干凈。定期消毒③箱內(nèi)滅菌蒸餾水3L蒸餾水槽中以保持箱內(nèi)濕度，避免培養(yǎng)液蒸發(fā)37精選2021版課件數(shù)碼型倒置熒光顯微鏡CFM-550Z

38精選2021版課件自動雙重純水蒸餾器純水儀39精選2021版課件酶標(biāo)儀微孔板震蕩器40精選2021版課件培養(yǎng)板41精選2021版課件培養(yǎng)瓶42精選2021版課件器械的清洗和消毒

43精選2021版課件實(shí)驗(yàn)器材處理刷洗→包裝→消毒滅菌消毒和滅菌

干烤160℃，120分鐘

過濾除菌微孔薄膜過濾

高壓蒸汽滅菌濕熱滅菌

紫外線消毒電磁輻射

蒸汽消毒乳酸、甲醛熏蒸

化學(xué)消毒劑0.1％新潔而滅

44精選2021版課件玻璃器械洗消浸泡、刷洗、浸酸、和清洗一、舊的玻璃器皿的洗消1、刷洗、烘干2、泡酸、清洗3、烘干、包裝4、高壓消毒5、烘干備用45精選2021版課件玻璃器械洗消二、新的玻璃器皿的洗消1、自來水刷洗2、烘干、泡鹽酸3、刷洗、烘干4、泡酸、清洗5、烘干、包裝6、高壓消毒7、烘干備用46精選2021版課件金屬器械洗消不能泡酸洗滌劑刷洗自來水沖凈75％酒精擦拭自來水、蒸餾水沖洗晾干高壓烘干備用47精選2021版課件橡膠和塑料制品洗消洗滌劑洗刷

用自來水和蒸餾水沖凈

烤箱烘干新的橡膠制品洗滌方法：0.5mol/LNaOH煮沸30分鐘，流水沖洗，0.5mol/LHCl煮沸15分鐘，流水沖洗，自來水煮沸2次，蒸餾水煮沸20分鐘，50℃烤干備用。

塑料制品特點(diǎn)：質(zhì)軟、易出現(xiàn)劃痕；耐腐蝕能力強(qiáng)、但不耐熱。

1、針式濾器帽不能泡酸液,用2％氫氧化鈉泡6-12小時,或者煮沸20分鐘,在包裝之前要裝好濾膜兩張，安裝濾膜時注意光面朝上(凹向上)，然后將螺旋稍微擰松一些，放入鋁盒中在高壓鍋內(nèi)15磅30分鐘消毒，再烘干備用。2、膠塞烘干后用2％氫氧化鈉溶液煮沸30分鐘（用過的膠塞只要用沸水處理30分鐘），自來水洗凈，烘干。然后再泡入稀鹽酸液30分鐘，再用自來水，蒸餾水，三蒸水洗凈，烘干。最后裝入鋁盒內(nèi)高壓消毒，烘干備用。3、膠帽，離心管帽烘干后只能在2％氫氧化鈉溶液中浸泡6-12小時（切記時間不能過長），自來水洗凈，烘干。然后再泡入稀鹽酸液30分鐘，再用自來水，蒸餾水，三蒸水洗凈，烘干。最后裝入鋁盒內(nèi)高壓消毒，烘干備用4、膠頭可用75％酒精浸泡5分鐘，然后紫外照射后使用即可。5、其他消毒方法：可用70％酒精浸泡消毒。塑料培養(yǎng)皿打開蓋子，放在超凈臺臺面上，直接暴露在紫外線下消毒。48精選2021版課件注意事項(xiàng)：1、嚴(yán)格執(zhí)行高壓鍋的操作規(guī)程：水：防高壓時燒干，水不能過多因?yàn)槠鋵⑹箍諝饬鲿呈茏?，會降低高壓消毒效果檢查安全閥是否通暢，以防高壓時爆炸2、安裝濾膜時注意光面朝上：否則起不到過濾的作用3、注意人體的防護(hù)和器皿的完全浸泡：A.泡酸時要戴耐酸手套，防止酸液濺起傷害人體B.從酸缸內(nèi)撈取器皿時防止酸液濺到地面，會腐蝕地面C.器皿浸入酸液中要完全，不能留有氣泡，以防止泡酸不徹底49精選2021版課件甲醛薰蒸：40％甲醛溶液，15-30ml／m3，室溫21～24℃，相對濕度75％～85％每個房間是7個平方，約20個立方。要甲醛300-600ml，高錳酸鉀100-200g高錳酸鉀放入甲醛液體中后，在開始的3秒鐘內(nèi)沒有反映，3秒鐘以后，會產(chǎn)生大量煙氣。所以一旦在甲醛中加了高錳酸鉀請馬上離開滅菌室，并關(guān)上門。高錳酸鉀放入甲醛液體中會使液體沸騰，所以反應(yīng)要在比較大的大口徑容器進(jìn)行。甲醛氣體毒性非常強(qiáng)，所以操作時一定要帶上防毒面具。50精選2021版課件細(xì)胞培養(yǎng)用液51精選2021版課件細(xì)胞培養(yǎng)用液水：新鮮配置的三蒸水或去離子水平衡鹽溶液：無Ca2+、Mg2+的緩沖液消化液：胰蛋白酶pH調(diào)整液抗生素培養(yǎng)液52精選2021版課件平衡鹽溶液（BSS）53精選2021版課件54精選2021版課件55精選2021版課件作用----使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散不同的組織或者細(xì)胞對胰酶的作用反應(yīng)不一樣胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關(guān)，在pH為8.0、溫度為37℃時，胰酶溶液的作用能力最強(qiáng)使用胰酶時，應(yīng)把握好濃度、溫度和時間，以免消化過度造成細(xì)胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質(zhì)克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液時應(yīng)選用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks液終止消化時，可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細(xì)胞的作用（血清中含有抗蛋白酶成分）消化液：胰蛋白酶56精選2021版課件pH調(diào)整液1、NaHCO3溶液2、HEPES液是一種弱酸—羥乙基哌嗪乙硫磺酸。HEPES對細(xì)胞無毒性，可防止pH值迅速變動57精選2021版課件培養(yǎng)基（1）合成培養(yǎng)基：是根據(jù)細(xì)胞所需物質(zhì)的種類和數(shù)量嚴(yán)格配制而成的。內(nèi)含碳水化合物、氨基酸、脂類、無機(jī)鹽、維生素、微量無素和細(xì)胞生長因子等單獨(dú)使用細(xì)胞雖有生存但不能很好的生長增殖（2）天然培養(yǎng)基：使用最普遍的天然培養(yǎng)基是血清，基本以小牛血清最普遍血清由于含有多種細(xì)胞生長因子、促貼附因子及其多活性物質(zhì)與合成培養(yǎng)基合用，能使細(xì)胞順利增殖生長常見使用最為5-20%58精選2021版課件天然培養(yǎng)基：指來自動物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基，如血漿、血清、淋巴液、雞胚浸出液等。優(yōu)點(diǎn)：營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好缺點(diǎn)：來源受限、成分復(fù)雜，影響對某些實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物的提取和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析、易發(fā)生支原體污染

59精選2021版課件合成培養(yǎng)基:

是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分，用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計(jì)、配制的培養(yǎng)基。有一定的配方，是一種理想的培養(yǎng)基。

主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)鹽等在目前常用的培養(yǎng)基中，葡萄糖和谷胺酰胺是體外培養(yǎng)動物細(xì)胞的主要能源

優(yōu)點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分和含量相對固定、成本低缺點(diǎn)：缺少某些成分，不能完全滿足體外細(xì)胞生長需要人工合成培養(yǎng)基只能維持細(xì)胞生存，要想使細(xì)胞生長和繁殖，還需補(bǔ)充一定量的天然培養(yǎng)基（如血清）

60精選2021版課件血清中含有：①多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等）②多種金屬離子③激素④促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠原等⑤各種生長因子⑥轉(zhuǎn)移蛋白⑦不明成分支持細(xì)胞生長需加10％血清61精選2021版課件

血清質(zhì)量好壞是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵

常用血清有胎牛、新生牛、小牛、兔、馬血清等優(yōu)質(zhì)血清的標(biāo)準(zhǔn)：透明，淡黃色，無沉淀物，無細(xì)菌、支原體、病毒污染血清的滅活（消除補(bǔ)體活性）：56℃，30分鐘血清的消毒：過濾除菌62精選2021版課件無血清培養(yǎng)基由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和替代血清的補(bǔ)充成分組成。1975年，Sato首次成功地用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)了垂體細(xì)胞株近20多年來已報(bào)道了幾十種細(xì)胞系在無血清培養(yǎng)基中成功地生長和增殖無血清培養(yǎng)基尚處于研究階段，難以推廣。

目前，絕大多數(shù)人工合成培養(yǎng)基使用時還需添加血清63精選2021版課件常用細(xì)胞培養(yǎng)基

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