YY-T 1897-2023 正式版 納米醫(yī)療器械生物學評價 遺傳毒性試驗 體外哺乳動物細胞微核試驗

中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標準納米醫(yī)療器械生物學評價遺傳毒性試驗體外哺乳動物細胞微核試驗國家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布前言 I引言 Ⅱ1范圍 12規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 25受試物及對照的準備 36胞質(zhì)分裂阻斷法微核試驗 37結(jié)果判定、試驗數(shù)據(jù)分析和報告 4參考文獻 61本文件由全國醫(yī)療器械生物學評價標準化技術(shù)委員會納米醫(yī)療器械生物學評價分技術(shù)委員會Ⅱ納米醫(yī)療器械對人體的潛在風險已受到廣泛關(guān)注。遺傳毒性試驗主要用于預測受試物的潛在致癌風險時有其局限性。與非納米尺度的醫(yī)療器械產(chǎn)品相比，醫(yī)療器械產(chǎn)品中的處理體系中存在多種阻礙細胞攝取納米材料的成分。因此，現(xiàn)行的遺地評價醫(yī)療器械中納米材料的遺傳毒性。經(jīng)濟合作與發(fā)展組織(OrganizationforEconomicCo-rials,WPMN)于2014年在納米材料產(chǎn)品安全性系列文件第43號《納米材料產(chǎn)品遺傳毒性：OECD專南性文件的基礎(chǔ)上進行一定調(diào)整。中國食品藥品檢定研究院(中檢院)基于研發(fā)機構(gòu)代表討論，提出納米材料遺傳毒性評價組合方法，國家標準化指導性技術(shù)文件GB/Z42246—2022《納米技術(shù)納米材料遺傳毒性試驗方法指南》為遺傳毒性評價方法選擇的總1納米醫(yī)療器械生物學評價遺傳毒性試驗體外哺乳動物細胞微核試驗本文件給出了評價納米醫(yī)療器械或用于醫(yī)療器械的納米材料的體外哺乳動物細胞微核試驗方法，通過測定細胞暴露于納米醫(yī)療器械或用于醫(yī)療器械的納米材料供試液后的含微核細胞數(shù)，評價其是否具有潛在遺傳毒性風險。本文件適用于采用永生化細胞胞質(zhì)分裂阻斷法微核試驗評價納米醫(yī)療器械或用于醫(yī)療器械的納米材料的遺傳毒性。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于GB/T16886.3醫(yī)療器械生物學評價第3部分：遺傳毒性、致癌性和生殖毒性試驗YY/T0870.6—2019醫(yī)療器械遺傳毒性試驗第6部分：體外哺乳動物細胞微核試驗3術(shù)語和定義GB/T16886.3和YY/T0870.6界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。組合有或含有納米材料的醫(yī)療器械。經(jīng)充分表征的材料和/或物質(zhì)(包括陽性對照試劑和陽性對照材料)并已證實用于體外微核試驗時，可在試驗系統(tǒng)中得到具有重復性的陽性結(jié)果。經(jīng)充分表征的物質(zhì)和/或材料(包括介質(zhì)陰性對照和陰性對照材料)并已證實用于體外微核試驗時，可在試驗系統(tǒng)中得到具有重復性的陰性結(jié)果。2中國倉鼠肺細胞系(CHL)、中國倉鼠卵巢細胞(CHO)和中國倉鼠肺細胞系(V79)核型穩(wěn)定且已積損傷后修復功能降低，導致基于CHL、CHO和V79開展的體外微核試驗假陽性率較高。為避免假陽細胞對納米材料的攝取能力是考察納米材料是否充分暴露于細胞試驗體系的關(guān)鍵。宜使用適宜的技術(shù)驗證所使用的細胞系對受試物(所含納米材料)在本試驗通常使用S9混合液作為活化系統(tǒng)。大鼠肝S9可b)CHL細胞通常使用含10%胎牛血清、1%青鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng)；c)TK6細胞通常使用含10%滅活馬血清、2%丙酮酸鈉和1%青鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)液3細胞毒性和被細胞攝取的情況有關(guān)，應結(jié)合納米材料的特性及應用c)介質(zhì)陰性對照使用配制受試物的介質(zhì)；常用陽性試劑對照見YY/T0870.6—2019中表1;a)應包含至少3個配制濃度，每個濃度至少包括2個重復。c)根據(jù)細胞毒性設置配制濃度范圍。細胞毒性使用胞質(zhì)分裂阻滯增殖指數(shù)(cytokinesis-blockproliferationindex,CBPI)或復制指數(shù)(replicationindex,RI)評估。d)如浸提液原液或可以給予的最高濃度條件下未見明顯細胞毒性(與空白細胞對照組比較相對細胞活力不低于70%),通常以2倍～3倍設置濃度間隔；當供試品存在細胞毒性時，應以試驗生率應控制在(55±5)%。各處理組以5倍～10倍間距設置。所選擇的濃度范圍應包括無細胞毒性濃度至產(chǎn)生中度細胞毒性的濃度，以獲得較好的量效關(guān)系。如濃度效應曲線較為陡細胞培養(yǎng)液中多種成分可影響細胞對納米材料的攝取能力，如含血清的4續(xù)作用約2個細胞倍增時間)或延遲的共同處理(細胞與受試物共培養(yǎng)后，更換同時含受試物與CytoB的培養(yǎng)液繼續(xù)作用約2個細胞倍增時間)的方法，從而保證納米材料與細胞培養(yǎng)系統(tǒng)在無Cy-反應時間可能對納米材料微核檢出率有一定影響。為保證納米材料經(jīng)細胞充分攝取，需設置3h～6h處理組(無和有代謝活化)、24h處理組(無代謝活化)和48h處理組(無代謝活化),開展體外微核試驗。如納米材料需更長攝取時間(結(jié)合納米材料的作用機制及攝取能力檢測數(shù)據(jù)等判定),可設7.1.1按照YY/T0870.6—2019進行結(jié)果判定。同時應結(jié)合細胞對納米材料的攝取能力對結(jié)果進行b)介質(zhì)：56)是否使用胞質(zhì)分裂阻斷劑，所用試6LDH試驗)No.43.GenotoxicityofManufacturedNanomaterials:ReportoftheOECDexpertmeeting[7]GonzalezL,SandersonBJS,Kirthegenotoxicityassessmentofnanomaterials[J].Mutagenesis,2011,26(1):185-191.[8]KirklandD,PfuhlerS,takinginvitrogenotoxicitytestECVAMWorkshop[J].MutatRes,2007,628(1):31-55.[9]MullerL.In-vitrogenotoxicitytests[10]Willmann