DB21-T 3052-2018口蹄疫病毒A型抗體快速檢測方法 鑭系熒光免疫層析法

ICS11.220

B41

備案號：62088-2019DB21

遼寧省地方標準

DB21/T3052—2018

口蹄疫病毒A型抗體快速檢測方法

鑭系熒光免疫層析法

TheRapidDetectionMethodsforAntibodiestoFootandMouthDiseaseVirusType

ALanthanideFluorescenceImmunochromatographicAssay

DB21/T3052—2018

前言

本標準按照GB/T1.1給出的規(guī)則起草。

本標準由遼寧省畜牧獸醫(yī)局提出。

本標準由遼寧省畜牧獸醫(yī)局歸口。

本標準起草單位：遼寧省動物醫(yī)學(xué)研究院、遼寧省動物疫病預(yù)防控制中心。

本標準主要起草人：周晨陽、申貫?zāi)小畋居?、楊洺揚、梁喬、李蓉、張健、孫世宇。

II

DB21/T3052—2018

口蹄疫病毒A型抗體快速檢測方法鑭系熒光免疫層析法

1范圍

本標準規(guī)定了以鑭系熒光免疫層析法檢測牛、羊、豬血清中的口蹄疫病毒A型抗體的檢測方法。

本標準適用于牛、羊、豬血清中口蹄疫病毒A型抗體水平的快速檢測。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運輸技術(shù)規(guī)范

3原理

采用免疫夾心法和鑭系熒光免疫層析法相結(jié)合技術(shù)，檢測動物血清樣本中的口蹄疫病毒A型抗體。

將鑭系納米熒光微球作熒光示蹤物標記口蹄疫病毒A型重組抗原，血清樣本抗體與鑭系納米熒光微球標

記的口蹄疫病毒A型重組抗原接觸形成復(fù)合物后，繼續(xù)與硝酸纖維素膜上檢測線包被的口蹄疫病毒A型重

組抗原發(fā)生反應(yīng)，形成抗原-抗體-熒光微球標記抗原免疫復(fù)合物，最后用熒光檢測儀讀取檢測卡上的熒

光信號。

4儀器與試劑

4.1儀器

4.1.1鑭系熒光檢測儀：激發(fā)波長為400nm±20nm，檢測波長為615nm±10nm。

4.1.2單道可調(diào)移液器：10μL～100μL，0.5μL～10μL。

4.1.3分析天平：感量0.0001g。

4.1.4離心機。

4.1.5冰箱：2℃～8℃，-20℃。

4.2試劑

4.2.1樣品稀釋液：見附錄A。

4.2.2口蹄疫病毒A型抗體熒光免疫試劑卡：鑭系熒光微球標記的口蹄疫病毒A型重組抗原和雞IgY

埋置在標記物墊內(nèi)；硝酸纖維膜上的測試線（T）和參考線（C）分別包被口蹄疫病毒A型重組抗原和羊

1

DB21/T3052—2018

抗雞IgY的IgG。（見圖1）

圖1口蹄疫病毒A型抗體鑭系熒光免疫層析卡示意圖

5樣品采集與處理

5.1樣品的采集

應(yīng)按照NY/T541中的規(guī)定進行，并做好安全防護。按常規(guī)方法用干燥、潔凈的離心管或適當容器采

集3mL～5mL血液。

5.2樣品的處理

血液樣本用離心機3000r/min離心3min，分離血清，血清量不少于500μL。

5.3樣品的貯存

血清樣本在2℃～8℃冷藏可保存24h，如需長期保存應(yīng)置-20℃或-80℃。

6檢測方法

6.1樣品稀釋

將待檢血清樣本用樣品稀釋液進行50倍稀釋。

6.2加樣

將鑭系熒光免疫層析卡置于干凈平坦的臺面上，用移液器吸取已稀釋好的待檢樣本垂直滴加80μ

L于加樣孔內(nèi)。

6.3檢測

避光層析15min～20min，30min內(nèi)用鑭系熒光檢測儀檢測，讀取效價。

6.4有效性判定

控制線（C線）檢測到熒光信號，實驗結(jié)果有效。

7結(jié)果判定

2

DB21/T3052—2018

效價≥_________________________________128時，判為陽性；效價＜64時，判為陰性；效價在64～128之間時，判為可疑。

3

DB21/T3052—2018

AA

附錄A

（規(guī)范性附錄）

樣品稀釋液的配置

A.1稱取Na2HPO4·12H2O4.02g

A.2稱取NaH2PO4·2H2O0.66g

A.3稱取NAN31.5g

A.4稱取硫酸葡聚糖（MW:40000）1.5g

A.5量取Tween-201L3.75mL

A.6800mL雙蒸水放入1L燒杯。

A.7A.1、A.2、A.3同時放入A.6燒杯中攪拌溶化。

A.8A.4加入A.7燒杯中混勻。

A.9A.5加入A.8燒杯中混勻。

A.10用雙蒸水將A.9燒杯溶液定容至1L。

A.11混勻后分裝，置4℃?zhèn)溆谩?/p>

_________________________________

_________________________________

4

DB21/T3052—2018

目次

前言................................................................................II

1范圍..............................................................................1

2規(guī)范性引用文件....................................................................1

3原理..............................................................................1

4儀器與試劑........................................................................1

4.1儀器..........................................................................1

4.2試劑..........................................................................1

5樣品采集與處理....................................................................2

5.1樣品的采集....................................................................2

5.2樣品的處理....................................................................2

5.3樣品的貯存....................................................................2

6檢測方法..........................................................................2

6.1樣品稀釋......................................................................2

6.2加樣..........................................................................2

6.3檢測..........................................................................2

6.4有效性判定....................................................................2

7結(jié)果判定..........................................................................2

附錄A（規(guī)范性附錄）樣品稀釋液的配置................................................4

I

DB21/T3052—2018

目次

前言................................................................................II

1范圍..............................................................................1

2規(guī)范性引用文件....................................................................1

3原理..............................................................................1

4儀器與試劑........................................................................1

4.1儀器..........................................................................1

4.2試劑..........................................................................1

5樣品采集與處理....................................................................2

5.1樣品的采集....................................................................2

5.2樣品的處理....................................................................2

5.3樣品的貯存............................