化妝品 保濕功效的測定 魚胚法

1化妝品保濕功效的測定魚胚法本文件規(guī)定了化妝品保濕功效的測定魚胚法的術語和定義、縮略語、試驗材料、測定操作、計算結果、判定依據(jù)。本文件適用于化妝品的保濕功效測定評價。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件?；瘖y品安全技術規(guī)范（2015版）3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。4縮略語下列縮略語適用于本文件hpf：受精后小時（hourpostfertilization）5測定材料5.1測定用魚本次測試所用斑馬魚為AB系斑馬魚。5.2主要測定儀器a)斑馬魚養(yǎng)殖單元。b)連續(xù)變倍體式顯微鏡。c)曲線控制生化培養(yǎng)箱。d)SQP萬分之一電子天平。5.3主要測定材料氯化鈉（2%）、透明質酸鈉（0.2%）。5.3.1溶液配制——空白對照：標準稀釋水稱量NaCl（3.5g）、NaHCO3（0.2g）、KCl（0.05g）和CaCl2（0.1175g加入蒸餾水定容至1000mL，真空過濾器（孔徑0.2μM）過濾，高壓滅菌鍋滅菌，常溫備用?！Ｐ蛯φ战M：2.0%氯化鈉溶液稱量1000.0mg的氯化鈉于50.0mLEP管中，加入50mL的標準稀釋水溶解?！栃詫φ战M：0.2%透明質酸鈉稱量10.0mg的透明質酸鈉于10.0mLEP管中，加入10mL的2%氯化鈉溶液溶解。——樣品組：用2%氯化鈉溶液配制溶液。26測定操作6.1測定設置空白對照組、模型對照組、陽性對照組和不同濃度的樣品組，每組10尾。6.2隨機挑選發(fā)育正常的72hpf野生型斑馬魚胚胎于載玻片上使其平躺，體式顯微鏡下局部拍取斑馬魚尾鰭長度（拍攝視野為尾鰭缺口處至整條尾巴），記為0min，之后各組分別采用此方法進行拍照處6.3將斑馬魚胚胎轉移至96孔細胞培養(yǎng)板中，1尾/孔，每孔加入150μL溶液，置于28℃恒溫培養(yǎng)箱孵育20min。20min后，將斑馬魚置于載玻片上使其平躺，體式顯微鏡下局部拍取斑馬魚尾鰭長度，記為20min，之后各組分別采用此方法進行拍照處理。6.4用ImageJ測量斑馬魚尾部長度。6.4.1導入要測量的斑馬魚胚胎照片，如圖1。6.4.2選擇直線工具，測量范圍為尾鰭缺口處至整條尾巴，如圖2。6.4.3從尾鰭缺口處按住鼠標左鍵畫直線，直到尾巴末端（透明魚鰭部分不要），如圖3。6.4.4點擊Ctrl+m，取length值為測量出來的尾巴長度。7計算結果按照公式計算斑馬魚尾部長度收縮率（%）使用GraphPadPrism8統(tǒng)計分析軟件（或類似功能的