專題20 細胞工程與胚胎工程-（2019年-2023年）高考生物真題匯編（通用）（全解全析）

專題20細胞工程與胚胎工程考點1動物細胞工程〖2023年高考真題〗1．（2023·北京·統(tǒng)考高考真題）甲狀旁腺激素（PTH）水平是人類多種疾病的重要診斷指標。研究者制備單克隆抗體用于快速檢測PTH，有關制備過程的敘述不正確的是（）A．需要使用動物細胞培養(yǎng)技術B．需要制備用PTH免疫的小鼠C．利用抗原-抗體結合的原理篩選雜交瘤細胞D．篩選能分泌多種抗體的單個雜交瘤細胞【答案】D【詳解】A、單克隆抗體制備過程中需要對骨髓瘤細胞等進行培養(yǎng)，即需要使用動物細胞培養(yǎng)技術，A正確；B、該操作的目的是制備單克隆抗體用于快速檢測PTH，故應用PTH刺激小鼠，使其產(chǎn)生相應的B細胞，B正確；C、抗原與抗體的結合具有特異性，可利用抗原-抗體結合的原理篩選雜交瘤細胞，C正確；D、由于一種B細胞經(jīng)分化形成漿細胞后通常只能產(chǎn)生一種抗體，故篩選出的單個雜交瘤細胞無法分泌多種抗體，D錯誤。故選D。2．（2023·海南·高考真題）某團隊通過多代細胞培養(yǎng)，將小鼠胚胎干細胞的Y染色體去除，獲得XO胚胎干細胞，再經(jīng)過一系列處理，使之轉變?yōu)橛泄δ艿穆涯讣毎Ｏ铝杏嘘P敘述錯誤的是（

）A．營養(yǎng)供應充足時，傳代培養(yǎng)的胚胎干細胞不會發(fā)生接觸抑制B．獲得XO胚胎干細胞的過程發(fā)生了染色體數(shù)目變異C．XO胚胎干細胞轉變?yōu)橛泄δ艿穆涯讣毎倪^程發(fā)生了細胞分化D．若某瀕危哺乳動物僅存雄性個體，可用該法獲得有功能的卵母細胞用于繁育【答案】A【詳解】A、營養(yǎng)供應充足時，傳代培養(yǎng)的胚胎干細胞也會發(fā)生接觸抑制，A錯誤；B、XO胚胎干細胞中丟失了Y染色體，因而該細胞的獲得過程發(fā)生了染色體數(shù)目變異，B正確；C、XO胚胎干細胞轉變?yōu)橛泄δ艿穆涯讣毎倪^程發(fā)生了細胞分化，即細胞的功能發(fā)生了特化，因而發(fā)生了細胞分化，C正確；D、若某瀕危哺乳動物僅存雄性個體，可用該法，即獲得有功能的卵母細胞，進而用于繁育，實現(xiàn)瀕危物種的保護，D正確。故選A。3．（2023·湖南·統(tǒng)考高考真題）某些植物根際促生菌具有生物固氮、分解淀粉和抑制病原菌等作用?；卮鹣铝袉栴}：(1)若從植物根際土壤中篩選分解淀粉的固氮細菌，培養(yǎng)基的主要營養(yǎng)物質包括水和。(2)現(xiàn)從植物根際土壤中篩選出一株解淀粉芽孢桿菌H，其產(chǎn)生的抗菌肽抑菌效果見表。據(jù)表推測該抗菌肽對的抑制效果較好，若要確定其有抑菌效果的最低濃度，需在μg·mL-1濃度區(qū)間進一步實驗。測試菌抗菌肽濃度/（μg?mL-1）55.2027.6013.806.903.451.730.86金黃色葡萄球菌-----++枯草芽孢桿菌-----++禾谷鐮孢菌-++++++假絲酵母-++++++注：“+”表示長菌，“-”表示未長菌。(3)研究人員利用解淀粉芽孢桿菌H的淀粉酶編碼基因M構建高效表達質粒載體，轉入大腸桿菌成功構建基因工程菌A。在利用A菌株發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶M過程中，傳代多次后，生產(chǎn)條件未變，但某子代菌株不再產(chǎn)生淀粉酶M。分析可能的原因是（答出兩點即可）。(4)研究人員通過肺上皮干細胞誘導生成肺類器官，可自組裝或與成熟細胞組裝成肺類裝配體，如圖所示。肺類裝配體培養(yǎng)需要滿足適宜的營養(yǎng)、溫度、滲透壓、pH以及（答出兩點）等基本條件。肺類裝配體形成過程中是否運用了動物細胞融合技術（填“是”或“否”）。

(5)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）是一種耐藥菌，嚴重危害人類健康?？蒲腥藛T擬用MRSA感染肺類裝配體建立感染模型，來探究解淀粉芽孢桿菌H抗菌肽是否對MRSA引起的肺炎有治療潛力。以下實驗材料中必備的是。①金黃色葡萄球菌感染的肺類裝配體

②MRSA感染的肺類裝配體

③解淀粉芽孢桿菌H抗菌肽

④生理鹽水

⑤青霉素（抗金黃色葡萄球菌的藥物）

⑥萬古霉素（抗MRSA的藥物）【答案】(1)無機鹽、淀粉(2)金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌1.73~3.45(3)淀粉酶編碼基因M發(fā)生突變；重組質粒在大腸桿菌分裂過程中丟失(4)無菌、無毒環(huán)境，含95%空氣和5%CO2的氣體環(huán)境否(5)②③④⑥【詳解】（1）由題意可知，根際促生菌具有固氮作用，可利用空氣中的氮氣作為氮源，因此用于篩選根際促生菌的培養(yǎng)基的主要營養(yǎng)物質包括水、無機鹽和淀粉。（2）由題表可知，在抗菌肽濃度為3.45-55.20μg·mL-1范圍內(nèi)，金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌均不能生長，表明該抗菌肽對它們的抑菌效果較好；因為抗菌肽的濃度為1.73μg·mL-1時，它們均能生長，所以要確定抗菌肽抑菌效果的最低濃度，應在1.73~3.45μg·mL-1的濃度區(qū)間進一步實驗。（3）在利用A菌株發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶M過程中，傳代多次后，生產(chǎn)條件未變，但某子代菌株不再產(chǎn)生淀粉酶M，可能的原因是淀粉酶編碼基因M發(fā)生突變；或者是重組質粒在大腸桿菌分裂過程中丟失。（4）肺類裝配體培養(yǎng)需要滿足適宜的營養(yǎng)、溫度、滲透壓、pH以及無菌、無毒環(huán)境，含95%空氣和5%CO2的氣體環(huán)境等基本條件；由圖示可知，肺類裝配體形成的過程中沒有運用動物細胞融合技術，只涉及了細胞的分裂和分化等內(nèi)容。（5）科研人員擬用MRSA感染肺類裝配體建立感染模型，來探究解淀粉芽孢桿菌H抗菌肽是否對MRSA引起的肺炎有治療潛力，必備實驗材料為：②MRSA感染的肺類裝配體、③解淀粉芽孢桿菌H抗菌肽、④生理鹽水（設置對照實驗使用）、⑥萬古霉素（抗MRSA的藥物，比較解淀粉芽孢桿菌H抗菌肽的療效），故選②③④⑥。4．（2023·湖北·統(tǒng)考高考真題）某病毒對動物養(yǎng)殖業(yè)危害十分嚴重。我國學者擬以該病毒外殼蛋白A為抗原來制備單克隆抗體，以期快速檢測該病毒，其主要技術路線如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：(1)與小鼠骨髓瘤細胞融合前，已免疫的脾細胞（含漿細胞）（填“需要”或“不需要”）通過原代培養(yǎng)擴大細胞數(shù)量；添加脂溶性物質PEG可促進細胞融合，該過程中PEG對細胞膜的作用是。(2)在雜交瘤細胞篩選過程中，常使用特定的選擇培養(yǎng)基（如HAT培養(yǎng)基），該培養(yǎng)基對和生長具有抑制作用。(3)單克隆抗體篩選中，將抗體與該病毒外殼蛋白進行雜交，其目的是。(4)構建重組質粒需要使用DNA連接酶。下列屬于DNA連接酶底物的是?！敬鸢浮?1)不需要使細胞接觸處的磷脂分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合(2)未融合的親本細胞融合的具有同種核的細胞(3)通過抗體檢測呈陽性來獲得分泌所需抗體的雜交瘤細胞(4)④【詳解】（1）漿細胞是高度分化的細胞，不能增殖，所以不需要通過原代培養(yǎng)擴大細胞數(shù)量。脂溶性物質PEG可使細胞接觸處的磷脂分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合。（2）在雜交瘤細胞篩選過程中，用特定的選擇培養(yǎng)基進行篩選，在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細胞才能生長。（3）單克隆抗體篩選中，將抗體與該病毒外殼蛋白進行雜交，是運用了抗原-抗體雜交技術，抗體檢測呈陽性的細胞，即為所需的雜交瘤細胞。（4）DNA連接酶能連接DNA片段，脫氧核苷酸的磷酸基團位于5'端，-OH位于3'端，①②③脫氧核苷酸鏈的兩端基團有誤；DNA連接酶能催化合成磷酸二酯鍵，即將一條脫氧核苷酸5'端的磷酸基團與另一條脫氧核苷酸鏈的3'端的-OH相連，④符合題意。故選④?！?022年高考真題〗5．（2022·遼寧·統(tǒng)考高考真題）二甲基亞砜（DMSO）易與水分子結合，常用作細胞凍存的滲透性保護劑。干細胞凍存復蘇后指標檢測結果見下表。下列敘述錯誤的是（

）凍存劑指標

合成培養(yǎng)基+DMSO合成培養(yǎng)基+DMSO+血清G1期細胞數(shù)百分比（%）65.7879.85活細胞數(shù)百分比（%）15.2941.33注：細胞分裂間期分為G1期、S期（DNA復制期）和G2期A．凍存復蘇后的干細胞可以用于治療人類某些疾病B．G1期細胞數(shù)百分比上升，導致更多干細胞直接進入分裂期C．血清中的天然成分影響G1期，增加干細胞復蘇后的活細胞數(shù)百分比D．DMSO的作用是使干細胞中自由水轉化為結合水【答案】B【詳解】A、凍存復蘇后的干細胞可以經(jīng)誘導分裂分化形成多種組織器官，用于治療人類某些疾病，A正確；B、G1期細胞數(shù)百分比上升，說明細胞進入分裂間期，但不會導致干細胞直接進入分裂期，還需經(jīng)過S和G2期，B錯誤；C、分析表格可知，血清中的天然成分影響G1期（該期細胞數(shù)百分比增大），能增加干細胞復蘇后的活細胞數(shù)百分比，C正確；D、二甲基亞砜（DMSO）易與水分子結合，可以使干細胞中自由水轉化為結合水，D正確。故選B。6．（2022·江蘇·統(tǒng)考高考真題）航天員葉光富和王亞平在天宮課堂上展示了培養(yǎng)的心肌細胞跳動的視頻。下列相關敘述正確的是（

）A．培養(yǎng)心肌細胞的器具和試劑都要先進行高壓蒸汽滅菌B．培養(yǎng)心肌細胞的時候既需要氧氣也需要二氧化碳C．心肌細胞在培養(yǎng)容器中通過有絲分裂不斷增殖D．心肌細胞在神經(jīng)細胞發(fā)出的神經(jīng)沖動的支配下跳動【答案】B【詳解】A、培養(yǎng)心肌細胞的器具要先進行高壓蒸汽滅菌，但是試劑并不都需要滅菌，如動物血清不能進行高壓蒸汽滅菌，否則會使其中的成分失活，A錯誤；B、培養(yǎng)心肌細胞的時候既需要氧氣（有助于進行有氧呼吸）也需要二氧化碳（有助于維持培養(yǎng)液的pH），B正確；C、在體外培養(yǎng)條件下，細胞會因接觸抑制、細胞密度過大、代謝廢物積累、營養(yǎng)物質消耗而停止分裂，C錯誤；D、心肌細胞節(jié)律性收縮，受植物性神經(jīng)的支配，是不隨意的，在神經(jīng)細胞釋放的神經(jīng)遞質的支配下跳動，D錯誤。故選B。7．（2022·福建·統(tǒng)考高考真題）我國科研人員在航天器微重力環(huán)境下對多能干細胞的分化進行了研究，發(fā)現(xiàn)與正常重力相比，多能干細胞在微重力環(huán)境下加速分化為功能健全的心肌細胞。下列敘述錯誤的是（

）A．微重力環(huán)境下多能干細胞和心肌細胞具有相同的細胞周期B．微重力環(huán)境下進行人體細胞的體外培養(yǎng)需定期更換培養(yǎng)液C．多能干細胞在分化過程中蛋白質種類和數(shù)量發(fā)生了改變D．該研究有助于了解微重力對細胞生命活動的影響【答案】A【詳解】A、連續(xù)分裂的細胞才有細胞周期，心肌細胞已經(jīng)高度分化，不能再分裂，沒有細胞周期，A錯誤；B、進行細胞的體外培養(yǎng)需定期更換培養(yǎng)液，避免代謝廢物對細胞的毒害作用，B正確；C、分化過程的本質是基因的選擇性表達，故多能干細胞在分化過程中蛋白質種類和數(shù)量發(fā)生了改變，C正確；D、由題意可知，多能干細胞在微重力環(huán)境下能加速分化，所以該研究有助于了解微重力對細胞生命活動的影響，D正確。故選A。8．（2022·湖北·統(tǒng)考高考真題）某興趣小組開展小鼠原代神經(jīng)元培養(yǎng)的研究，結果發(fā)現(xiàn)其培養(yǎng)的原代神經(jīng)元生長緩慢，其原因不可能的是（）A．實驗材料取自小鼠胚胎的腦組織 B．為了防止污染將培養(yǎng)瓶瓶口密封C．血清經(jīng)過高溫處理后加入培養(yǎng)基 D．所使用的培養(yǎng)基呈弱酸性【答案】A【詳解】A、小鼠胚胎腦組織中含有豐富的原代神經(jīng)元，細胞增殖能力強，不會造成生長緩慢，A符合題意；B、培養(yǎng)瓶瓶口密封會使培養(yǎng)液中缺氧，影響細胞有氧呼吸，造成供能不足，可能使細胞生長緩慢，B不符合題意；C、血清經(jīng)過高溫處理后，其中活性成分變性，失去原有功能，細胞生存環(huán)境嚴重惡化，可能使細胞生長緩慢，C不符合題意；D、小鼠內(nèi)環(huán)境為弱堿性，所使用的培養(yǎng)基呈弱酸性，使細胞生存環(huán)境惡劣，可能造成細胞生長緩慢，D不符合題意。故選A。9．（2022·湖北·統(tǒng)考高考真題）滅菌、消毒、無菌操作是生物學實驗中常見的操作。下列敘述正確的是（）A．動、植物細胞DNA的提取必須在無菌條件下進行B．微生物、動物細胞培養(yǎng)基中需添加一定量的抗生素以防止污染C．為防止蛋白質變性，不能用濕熱滅菌法對牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進行滅菌D．可用濕熱滅菌法對實驗中所使用的微量離心管、細胞培養(yǎng)瓶等進行滅菌【答案】D【詳解】A、動、植物細胞DNA的提取不需要在無菌條件下進行，A錯誤；B、動物細胞培養(yǎng)基中需添加一定量的抗生素以防止污染，保證無菌環(huán)境，而微生物的培養(yǎng)不能加入抗生素，B錯誤；C、一般用濕熱滅菌法對牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進行滅菌，以防止雜菌污染，C錯誤；D、可用濕熱滅菌法對實驗中所使用的微量離心管、細胞培養(yǎng)瓶等進行滅菌，以防止雜菌污染，D正確。故選D。10．（2022·山東·高考真題）如圖所示，將由2種不同的抗原分別制備的單克隆抗體分子，在體外解偶聯(lián)后重新偶聯(lián)可制備雙特異性抗體，簡稱雙抗。下列說法錯誤的是（

）A．雙抗可同時與2種抗原結合B．利用雙抗可以將蛋白類藥物運送至靶細胞C．篩選雙抗時需使用制備單克隆抗體時所使用的2種抗原D．同時注射2種抗原可刺激B細胞分化為產(chǎn)雙抗的漿細胞【答案】D【詳解】A、根據(jù)抗原和抗體發(fā)生特異性結合的原理推測，雙抗可同時與2種抗原結合，A正確；B、根據(jù)抗原與抗體能夠發(fā)生特異性結合的特性，利用雙抗可以將蛋白類藥物運送至靶細胞，從而使藥物發(fā)揮相應的作用，B正確；C、在兩種不同的抗原刺激下，B細胞增殖、分化產(chǎn)生不同的漿細胞分泌形成兩種抗體，因此，篩選雙抗時需使用制備單克隆抗體時所使用的2種抗原來進行抗原-抗體檢測，從而實現(xiàn)對雙抗的篩選，C正確；D、同時注射2種抗原可刺激B細胞分化形成不同的漿細胞，而不是分化成產(chǎn)雙抗的漿細胞，D錯誤。故選D。11．（2022·江蘇·統(tǒng)考高考真題）下圖表示利用細胞融合技術進行基因定位的過程，在人-鼠雜種細胞中人的染色體會以隨機方式丟失，通過分析基因產(chǎn)物進行基因定位?，F(xiàn)檢測細胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中人的4種酶活性，只有Ⅱ具有芳烴羥化酶活性，只有Ⅲ具有胸苷激酶活性，Ⅰ、Ⅲ都有磷酸甘油酸激酶活性，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均有乳酸脫氫酶活性。下列相關敘述正確的有（

）A．加入滅活仙臺病毒的作用是促進細胞融合B．細胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分別為人-人、人-鼠、鼠-鼠融合細胞C．芳烴羥化酶基因位于2號染色體上，乳酸脫氫酶基因位于11號染色上D．胸苷激酶基因位于17號染色體上，磷酸甘油酸激酶基因位于X染色體上【答案】ACD【詳解】A、動物細胞融合過程中，可以利用滅活的仙臺病毒或聚乙二醇作誘導劑促進細胞融合，A正確；B、細胞Ⅲ中保留了人的X、11、17號染色體，故不會是鼠-鼠融合細胞，B錯誤；CD、根據(jù)分析可知，芳烴羥化酶基因位于2號染色體上，乳酸脫氫酶基因位于11號染色上，胸苷激酶基因位于17號染色體上，磷酸甘油酸激酶基因位于X染色體上，CD正確。故選ACD。12．（2022·浙江·統(tǒng)考高考真題）回答下列（一）、（二）小題：（一）紅曲霉合成的紅曲色素是可食用的天然色素，具有防腐、降脂等功能。研究者進行了紅曲色素的提取及紅色素的含量測定實驗，流程如下：(1)取紅曲霉菌種斜面，加適量洗下菌苔，制成菌懸液并培養(yǎng)，解除休眠獲得菌種。經(jīng)液體發(fā)酵，收集紅曲霉菌絲體，紅曲霉菌絲體與70%乙醇溶液混合，經(jīng)浸提、，獲得的上清液即為紅曲色素提取液。為進一步提高紅曲色素得率，可將紅曲霉細胞進行處理。(2)紅曲色素包括紅色素、黃色素和橙黃色素等，紅色素在390nm、420nm和505nm波長處均有較大吸收峰。用光電比色法測定紅曲色素提取液甲的紅色素含量時，通常選用505nm波長測定的原因是。測定時需用作空白對照。(3)生產(chǎn)上提取紅曲色素后的殘渣，經(jīng)處理后作為飼料添加劑或有機肥，這屬于廢棄物的無害化和處理。（二）我國在新冠疫情方面取得了顯著的成效，但全球疫情形勢仍然非常嚴峻、尤其是病毒出現(xiàn)了新變異株——德爾塔、奧密克戎，更是威脅著全人類的生命健康。(4)新冠病毒核酸定性檢測原理是：以新冠病毒的單鏈RNA為模板，利用酶合成DNA，經(jīng)PCR擴增，然后在擴增產(chǎn)物中加入特異的，如果檢測到特異的雜交分子則核酸檢測為陽性。(5)接種疫苗是遏制新冠疫情蔓延的重要手段。腺病毒疫苗的制備技術要點是：將腺病毒的復制基因敲除；以新冠病毒的基因為模板合成的DNA插入腺病毒基因組，構建重組腺病毒。重組腺病毒在人體細胞內(nèi)表達產(chǎn)生新冠病毒抗原，從而引發(fā)特異性免疫反應。在此過程中，腺病毒的作用是作為基因工程中目的基因的。將腺病毒復制基因敲除的目的是。(6)單克隆抗體有望用于治療新冠肺炎。單克隆抗體的制備原理是：取免疫陽性小鼠的細胞與骨髓瘤細胞混合培養(yǎng)，使其融合，最后篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞。與植物組織培養(yǎng)相比，雜交瘤細胞擴大培養(yǎng)需要特殊的成分，如胰島素和?！敬鸢浮?1)無菌水活化離心破碎(2)其它色素對該波長光的吸收相對較少，干擾相對較小70%乙醇溶液(3)滅菌資源化(4)逆轉錄核酸探針(5)抗原載體使腺病毒失去復制能力(6)脾動物血清【詳解】（1）防止污染，洗菌苔可加適量的無菌水，制成菌懸液并培養(yǎng)，解除休眠獲得活化菌種。紅曲霉菌絲體與70%乙醇溶液混合，經(jīng)浸提、離心，獲得的上清液即為紅曲色素提取液。為進一步提高紅曲色素得率，可將紅曲霉細胞進行破碎處理，使細胞內(nèi)的紅曲色素釋放出來。（2）用光電比色法測定紅曲色素提取液甲的紅色素含量時，通常選用505nm波長測定的原因是其它色素對該波長光的吸收相對較少，干擾相對較小。由于提取紅曲色素是用的70%乙醇溶液，故測定時需用70%乙醇溶液作空白對照。（3）生產(chǎn)上提取紅曲色素后的殘渣，經(jīng)滅菌處理殘渣后，作為飼料添加劑或有機肥，這屬于廢棄物的無害化和資源化處理。（4）RNA做模板合成DNA，利用逆轉錄酶；PCR擴增，然后在擴增產(chǎn)物中加入特異的核酸探針，檢測新冠病毒核酸。如果檢測到特異的雜交分子則核酸檢測為陽性。（5）腺病毒疫苗的制備技術要點是：將腺病毒的復制基因敲除；以新冠病毒的抗原基因為模板合成的DNA插入腺病毒基因組，構建重組腺病毒。重組腺病毒在人體細胞內(nèi)表達產(chǎn)生新冠病毒抗原，從而引發(fā)特異性免疫反應。在此過程中，腺病毒的作用是作為基因工程中目的基因的載體。將腺病毒復制基因敲除的目的是使腺病毒失去復制能力。（6）單克隆抗體的制備原理是：取免疫陽性小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞混合培養(yǎng)，使其融合，最后篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞。與植物組織培養(yǎng)相比，雜交瘤細胞擴大培養(yǎng)需要特殊的成分，如胰島素和動物血清。13．（2022·福建·統(tǒng)考高考真題）美西螈具有很強的再生能力。研究表明，美西螈的巨噬細胞在斷肢再生的早期起重要作用。為研究巨噬細胞的作用機制，科研人員制備了抗巨噬細胞表面標志蛋白CD14的單克隆抗體，具體方法如下。回答下列問題：（一）基因工程抗原的制備(1)根據(jù)美西螈CD14基因的核苷酸序列，合成引物，利用PCR擴增CD14片段。已知DNA聚合酶催化引物的3’—OH與加入的脫氧核苷酸的5’—P形成磷酸二酯鍵，則新合成鏈的延伸方向是（填“5’→3’”或“3’→5’”）。

(2)載體和CD14片段的酶切位點及相應的酶切抗性基因序列如圖1所示。用XhoI和Sal1分別酶切CD14和載體后連接，CD14接入載體時會形成正向連接和反向連接的兩種重組DNA．可進一步用這兩種限制酶對CD14的連接方向進行鑒定，理由是。培養(yǎng)能表達CD14蛋白的大腸桿菌，分離純化目的蛋白。（二）抗CD14單克隆抗體的制備流程如圖2所示：

(3)步驟①和步驟⑤分別向小鼠注射和。(4)步驟②所用的SP2/0細胞的生長特點是。(5)吸?、壑械纳锨逡旱舰艿呐囵B(yǎng)孔中，根據(jù)抗原—抗體雜交原理，需加入①進行專一抗體檢測，檢測過程發(fā)現(xiàn)有些雜交瘤細胞不能分泌抗CD14抗體，原因是②。(6)步驟⑥從中提取到大量的抗CD14抗體，用于檢測巨噬細胞?！敬鸢浮?1)5'→3'(2)正向連接的重組DNA有這兩種酶切位點（限制酶的識別序列）；而反向連接的重組DNA會形成新的序列，沒有這兩種酶的酶切位點（沒有限制酶的識別序列）(3)CD14蛋白/CD14抗原分泌抗CD14抗體的雜交瘤細胞(4)能在體外無限增殖(5)CD14蛋白參與形成雜交瘤細胞的B淋巴細胞種類多，有的不能分泌抗CD14抗體(6)小鼠腹水【詳解】（1）PCR擴增時，DNA聚合酶催化引物的3'-OH與加入的脫氧核苷酸的5'-P形成磷酸二酯鍵，因此新鏈合成的方向是從5'→3'。（2）可進一步用限制酶XhoⅠ和SalⅠ對CD14的連接方向進行鑒定，是因為正向連接的重組DNA有這兩種酶切位點（限制酶的識別序列）；而反向連接的重組DNA會形成新的序列，沒有這兩種酶的酶切位點（沒有限制酶的識別序列）。（3）步驟①是注射特定抗原，針對本實驗目的可知，要獲得抗CD14單克隆抗體，故應該注射CD14蛋白/CD14抗原；步驟⑤是將分泌抗CD14抗體的雜交瘤細胞注入小鼠體內(nèi)培養(yǎng)，以獲得大量單克隆抗體。（4）步驟②所用的SP2/0細胞是骨髓瘤細胞，特點是能在體外無限增殖。（5）根據(jù)抗原—抗體雜交原理，應該用CD14蛋白檢測其中是否含抗CD14蛋白的抗體。因為形成雜交瘤細胞的B淋巴細胞種類很多，因此有些雜交瘤細胞不能分泌抗CD14抗體。（6）從制備單克隆抗體的流程可知，將雜交瘤細胞注射到小鼠腹腔后，最終要從小鼠的腹水中提取抗CD14抗體。14．（2022·遼寧·統(tǒng)考高考真題）某抗膜蛋白治療性抗體藥物研發(fā)過程中，需要表達N蛋白胞外段，制備相應的單克隆抗體，增加其對N蛋白胞外段特異性結合的能力。Ⅰ．N蛋白胞外段抗原制備，流程如圖1(1)構建重組慢病毒質粒時，選用氨芐青霉素抗性基因作為標記基因，目的是。用脂質體將重組慢病毒質粒與輔助質粒導入病毒包裝細胞，質粒被包在脂質體（填“雙分子層中”或“兩層磷脂分子之間”）。(2)質粒在包裝細胞內(nèi)組裝出由組成的慢病毒，用慢病毒感染海拉細胞進而表達并分離、純化N蛋白胞外段。Ⅱ．N蛋白胞外段單克隆抗體制備，流程如圖2(3)用N蛋白胞外段作為抗原對小鼠進行免疫后，取小鼠脾組織用酶處理，制成細胞懸液，置于含有混合氣體的中培養(yǎng)，離心收集小鼠的B淋巴細胞，與骨髓瘤細胞進行融合。(4)用選擇性培養(yǎng)基對融合后的細胞進行篩選，獲得雜交瘤細胞，將其接種到96孔板，進行培養(yǎng)。用技術檢測每孔中的抗體，篩選既能產(chǎn)生N蛋白胞外段抗體，又能大量增殖的單克隆雜交瘤細胞株，經(jīng)體外擴大培養(yǎng)，收集，提取單克隆抗體。(5)利用N蛋白胞外段抗體與藥物結合，形成，實現(xiàn)特異性治療?！敬鸢浮?1)檢測目的基因是否成功導入受體細胞雙分子層中(2)蛋白質外殼和含N蛋白胞外段基因的核酸(3)胰蛋白酶或膠原蛋白CO2培養(yǎng)箱(4)克隆化抗原抗體雜交細胞培養(yǎng)液(5)抗體-藥物偶聯(lián)物/ADC【詳解】（1）構建重組慢病毒質粒時，為檢測目的基因是否成功導入受體細胞，常選用氨芐青霉素抗性基因作為標記基因。重組慢病毒質粒與輔助質粒導入病毒包裝細胞需要依賴膜融合，故質粒被包在脂質體雙分子層中（即磷脂雙分子層）。（2）由于目的基因為N蛋白胞外段基因，在包裝細胞內(nèi)組裝出由蛋白質外殼和含有N蛋白胞外段基因的核酸組成的慢病毒，用慢病毒感染海拉細胞進而表達并分離、純化N蛋白胞外段。（3）進行動物細胞培養(yǎng)時，需要取小鼠脾組織用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理，制成細胞懸液，置于含有95%空氣和5%的CO2混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（4）用選擇性培養(yǎng)基對融合后的細胞進行篩選，獲得雜交瘤細胞，將其接種到96孔板，進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測。用抗原抗體雜交技術檢測每孔中的抗體，篩選既能產(chǎn)生N蛋白胞外段抗體，又能大量增殖的單克隆雜交瘤細胞株，經(jīng)體外擴大培養(yǎng)，收集細胞培養(yǎng)液，提取單克隆抗體。（5）利用N蛋白胞外段抗體與藥物結合，形成抗體-藥物偶聯(lián)物ADC，實現(xiàn)特異性治療。15．（2022·海南·統(tǒng)考高考真題）以我國科學家為主的科研團隊將OSNL（即4個基因Oct4／Sox2／Nanog／Lin28A的縮寫）導入黑羽雞胚成纖維細胞（CEFs），誘導其重編程為誘導多能干細胞（iPS），再誘導iPS分化為誘導原始生殖細胞（iPGCs），然后將iPGCs注射到孵化2.5天的白羽雞胚血管中，最終獲得具有黑羽雞遺傳特性的后代，實驗流程如圖?；卮鹣铝袉栴}。(1)CEFs是從孵化9天的黑羽雞胚中分離獲得的，為了獲得單細胞懸液，雞胚組織剪碎后需用處理。動物細胞培養(yǎng)通常需要在合成培養(yǎng)基中添加等天然成分，以滿足細胞對某些細胞因子的需求。(2)體外獲取OSNL的方法有（答出1種即可）。若要在CEFs中表達外源基因的蛋白，需構建基因表達載體，載體中除含有目的基因和標記基因外，還須有啟動子和等。啟動子是識別和結合的部位，有了它才能驅動。(3)iPS細胞和iPGCs細胞的形態(tài)、結構和功能不同的根本原因是。(4)誘導iPS細胞的技術與體細胞核移植技術的主要區(qū)別是。(5)該實驗流程中用到的生物技術有（答出2點即可）?！敬鸢浮?1)胰蛋白酶、膠原蛋白酶等動物血清(2)PCR技術、人工合成法終止子RNA聚合酶目的基因轉錄出mRNA，最終表達出所需要的蛋白質(3)基因的選擇性表達(4)誘導iPS細胞的技術是將已經(jīng)分化的細胞誘導為類似胚胎干細胞的一種細胞（iPS），再誘導iPS分化為誘導原始生殖細胞（iPGCs）的技術，而細胞核移植技術是將動物的一個細胞的細胞核移入去核的卵母細胞內(nèi)，使這個重組的細胞發(fā)育為胚胎，繼而發(fā)育為動物個體的技術(5)基因工程、動物細胞培養(yǎng)【詳解】（1）動物細胞培養(yǎng)時，雞胚組織剪碎后需用胰蛋白酶處理，以獲得單細胞懸液。動物細胞培養(yǎng)時一般需要在合成培養(yǎng)基中添加血清等天然成分，以滿足細胞對某些細胞因子的需求。（2）OSNL為目的基因，體外獲取目的基因可通過PCR技術大量擴增或通過人工合成法來合成?；虮磉_載體中除目的基因外，還必須有啟動子、終止子、復制原點和標記基因等。啟動子是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶識別和結合的部位，有了它才能驅動基因轉錄出mRNA，最終獲得所需要的蛋白質。（3）據(jù)圖可知，由iPS細胞誘導形成iPGCs細胞經(jīng)過了細胞分化，該過程遺傳物質沒有改變，導致其細胞的形態(tài)、結構和功能不同的根本原因是基因的選擇性表達。（4）誘導iPS細胞的技術是將已經(jīng)分化的細胞誘導為類似胚胎干細胞的一種細胞（iPS），再誘導iPS分化為誘導原始生殖細胞（iPGCs）的技術，而細胞核移植技術是將動物的一個細胞的細胞核移入去核的卵母細胞內(nèi)，使這個重組的細胞發(fā)育為胚胎，繼而發(fā)育為動物個體的技術。（5）由圖可知，該實驗流程中將OSNL基因導入雞胚成纖維細胞利用了基因工程技術，誘導多能干細胞過程利用了動物細胞培養(yǎng)的技術。〖2021年高考真題〗16．（2021·湖北·統(tǒng)考高考真題）自青霉素被發(fā)現(xiàn)以來，抗生素對疾病治療起了重要作用。目前抗生素的不合理使用已經(jīng)引起人們的關注。下列關于抗生素使用的敘述，正確的是（

）A．作用機制不同的抗生素同時使用，可提高對疾病的治療效果B．青霉素能直接殺死細菌，從而達到治療疾病的目的C．畜牧業(yè)中為了防止牲畜生病可大量使用抗生素D．定期服用抗生素可預防病菌引起的腸道疾病【答案】A【詳解】A、結合分析可知，抗生素的作用機理主要有四個方面，作用機制不同的抗生素同時使用，可從不同方面對于病原體進行防治，故可提高對疾病的治療效果，A正確；B、青霉素殺死細菌可能是通過抑制細菌細胞壁的合成或增強細菌細胞膜通透性等途徑實現(xiàn)的，不是直接殺死細菌，B錯誤；C、抗生素大量使用會導致耐藥菌等的出現(xiàn)，不利于牲畜疾病的防控，C錯誤；D、定期服用抗生素會導致耐藥菌等的出現(xiàn)，不能用于預防病菌引起的腸道疾病，D錯誤。故選A。17．（2021·山東·統(tǒng)考高考真題）一個抗原往往有多個不同的抗原決定簇，一個抗原決定簇只能刺激機體產(chǎn)生一種抗體，由同一抗原刺激產(chǎn)生的不同抗體統(tǒng)稱為多抗。將非洲豬瘟病毒衣殼蛋白p72注入小鼠體內(nèi)，可利用該小鼠的免疫細胞制備抗p72的單抗，也可以從該小鼠的血清中直接分離出多抗。下列說法正確的是（）A．注入小鼠體內(nèi)的抗原純度對單抗純度的影響比對多抗純度的影響大B．單抗制備過程中通常將分離出的漿細胞與骨髓瘤細胞融合C．利用該小鼠只能制備出一種抗p72的單抗D．p72部分結構改變后會出現(xiàn)原單抗失效而多抗仍有效的情況【答案】D【詳解】A、單抗的制作需要篩選，而多抗不需要篩選，抗原純度越高，產(chǎn)生的多抗純度越高，因此原純度對單抗純度的影響比對多抗純度的影響小，A錯誤；B、單抗制備過程中通常將經(jīng)過免疫的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，B錯誤；C、非洲豬瘟病毒衣殼蛋白p72上有多種抗原決定簇，一個抗決定簇只能刺激機體產(chǎn)生一種抗體，所以向小鼠體內(nèi)注入p72后，可以刺激小鼠產(chǎn)生多種抗p72的單抗，C錯誤；D、p72部分結構改變只改變了部分抗原決定簇，因此由這部分抗原決定簇產(chǎn)生的抗體失效，但由于還存在由其他抗原決定簇刺激機體產(chǎn)生的抗體，所以多抗仍有效，D正確。故選D。18．（2021·浙江·統(tǒng)考高考真題）下圖為動物成纖維細胞的培養(yǎng)過程示意圖。下列敘述正確的是（）A．步驟①的操作不需要在無菌環(huán)境中進行B．步驟②中用鹽酸溶解細胞間物質使細胞分離C．步驟③到④的分瓶操作前常用胰蛋白酶處理D．步驟④培養(yǎng)過程中不會發(fā)生細胞轉化【答案】C【詳解】A、動物細胞培養(yǎng)過程需要無菌操作，故步驟①的操作需要在無菌環(huán)境中進行，A錯誤；B、動物細胞培養(yǎng)過程需要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理動物組織，分散成單個細胞，制成細胞懸液，B錯誤；C、傳代培養(yǎng)時需要用胰蛋白酶處理貼壁生長的細胞，使之分散成單個細胞，再分瓶培養(yǎng)，C正確；D、步驟④為傳代培養(yǎng)過程，該過程中部分細胞可能發(fā)生細胞轉化，核型改變，D錯誤。故選C。19．（2021·重慶·高考真題）為了研究PDCD4基因對小鼠子宮內(nèi)膜基質細胞凋亡的影響，進行了相關實驗。(1)取小鼠子宮時，為避免細菌污染，手術器具應進行處理；子宮取出剪碎后，用處理一定時間，可獲得分散的子宮內(nèi)膜組織細胞，再分離獲得基質細胞用于培養(yǎng)。(2)培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質應有（填寫兩種）；培養(yǎng)箱中CO2濃度為5%，其主要作用是。(3)在含PDCD4基因的表達載體中，啟動子的作用是。為了證明PDCD4基因對基質細胞凋亡的作用，以含PDCD4基因的表達載體和基質細胞的混合培養(yǎng)為實驗組，還應設立兩個對照組，分別為。經(jīng)檢測，實驗組中PDCD4表達水平和細胞凋亡率顯著高于對照組，說明該基因對基質細胞凋亡具有（填“抑制”或“促進”）作用?！敬鸢浮?1)滅菌胰蛋白酶或膠原蛋白酶(2)無機鹽、葡萄糖、氨基酸、微量元素、促生長因子、血清或血漿（填寫兩種即可）維持培養(yǎng)液的pH值(3)RNA聚合酶的識別和結合位點，驅動轉錄出相應的mRNA基質細胞懸浮液、空載體和基質細胞的混合培養(yǎng)液促進【詳解】（1）為避免細菌污染，手術器具應進行滅菌處理；動物組織取出剪碎后，用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理一定時間，可獲得分散的動物組織細胞。（2）動物細胞培養(yǎng)時，培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質應有無機鹽、葡萄糖、氨基酸、微量元素、促生長因子、血清或血漿等；培養(yǎng)箱中為95%的空氣和5%的CO2，其中5%的CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH值。（3）啟動子是RNA聚合酶的識別和結合位點，驅動轉錄出相應的mRNA。為了證明PDCD4基因對基質細胞凋亡的作用，以含PDCD4基因的表達載體和基質細胞的混合培養(yǎng)為實驗組，還應設立兩個對照組，分別為基質細胞懸浮液（空白對照）、空載體和基質細胞的混合培養(yǎng)液（排除空載體的作用）。經(jīng)檢測，實驗組中PDCD4表達水平和細胞凋亡率顯著高于對照組，說明該基因對基質細胞凋亡具有促進作用。20．（2021·江蘇·高考真題）根據(jù)新冠病毒致病機制及人體免疫反應特征研制新冠疫苗，廣泛接種疫苗可以快速建立免疫屏障，阻擊病毒擴大。圖1為新冠病毒入侵細胞后的增殖示意圖，圖2為人體免疫應答產(chǎn)生抗體的一般規(guī)律示意圖。請據(jù)圖回答下列問題。(1)圖1中，新冠病毒通過S蛋白與細胞表面的ACE2受體結合，侵入細胞釋放出病毒的（+）RNA，在宿主細胞中經(jīng)合成病毒的RNA聚合酶。(2)在RNA聚合酶的作用下，病毒利用宿主細胞中的原料，按照原則合成（-）RNA。隨后大量合成新的（+）RNA。再以這些RNA為模板，分別在大量合成病毒的N蛋白和S、M、E蛋白。(3)制備病毒滅活疫苗時，先大量培養(yǎng)表達的細胞，再接入新冠病毒擴大培養(yǎng)，滅活處理后制備疫苗。細胞培養(yǎng)時需通入CO2，其作用是。(4)制備S蛋白的mRNA疫苗時，體外制備的mRNA常用脂質分子包裹后才用于接種。原因一是人體血液和組織中廣泛存在，極易將裸露的mRNA水解，二是外源mRNA分子不易進入人體細胞產(chǎn)生抗原。(5)第一次接種疫苗后，人體內(nèi)識別到S蛋白的B細胞，經(jīng)過增殖和分化，形成的細胞可合成并分泌特異性識別的IgM和IgG抗體（見圖2），形成的細胞等再次接觸到S蛋白時，發(fā)揮免疫保護作用。(6)有些疫苗需要進行第二次接種，據(jù)圖2分析進行二次接種的意義是?！敬鸢浮?1)翻譯(2)堿基互補配對游離核糖體和粗面內(nèi)質網(wǎng)上的核糖體(3)ACE2受體維持培養(yǎng)液的酸堿度(4)RNA酶(5)漿新冠病毒S蛋白記憶(6)激發(fā)再次應答在人體內(nèi)產(chǎn)生更多維持時間更長的抗體,并儲備更多的記憶細胞【詳解】（1）結合分析可知，新冠病毒侵入細胞后釋放出病毒的（+）RNA，在宿主細胞中經(jīng)翻譯合成病毒的RNA聚合酶。（2）在RNA聚合酶的作用下，病毒利用宿主細胞中的原料，按照堿基互補配對原則合成（-）RNA；隨后再通過復制合成大量新的（+）RNA，再以這些RNA為模板，分別在游離核糖體和粗面內(nèi)質網(wǎng)上的核糖體大量合成病毒的N蛋白和S、M、E蛋白。（3）病毒表面的蛋白質可作為抗原激發(fā)機體的特異性免疫過程，制備新冠病毒滅活疫苗時，先大量培養(yǎng)能夠表達ACE2受體的細胞，再接入新冠病毒擴大培養(yǎng)，經(jīng)滅活處理后制備疫苗；動物細胞培養(yǎng)時常需通入CO2，其目的是維持培養(yǎng)液的酸堿度。（4）由于人體血液和組織中廣泛存在RNA酶極易將裸露的mRNA水解，另外外源mRNA分子不易進入人體細胞產(chǎn)生抗原，因此，制備S蛋白的mRNA疫苗時，體外制備的mRNA常用脂質分子包裹后才用于接種。（5）第一次接種疫苗后，刺激B細胞增殖和分化，形成的漿細胞可合成并分泌特異性識別新冠病毒S蛋白的IgM和IgG抗體，并產(chǎn)生記憶細胞；當再次接觸到S蛋白時，記憶細胞增殖分化，產(chǎn)生大量漿細胞，分泌大量抗體，發(fā)揮免疫保護作用。（6）進行二次接種的意義：激發(fā)再次應答在人體內(nèi)產(chǎn)生更多維持時間更長的抗體,并儲備更多的記憶細胞。21．（2021·湖南·統(tǒng)考高考真題）M基因編碼的M蛋白在動物A的肝細胞中特異性表達?，F(xiàn)設計實驗，將外源DNA片段F插入M基因的特定位置，再通過核移植、胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術獲得M基因失活的轉基因克隆動物A，流程如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：（1）在構建含有片段F的重組質粒過程中，切割質粒DNA的工具酶是，這類酶能將特定部位的兩個核苷酸之間的斷開。（2）在無菌、無毒等適宜環(huán)境中進行動物A成纖維細胞的原代和傳代培養(yǎng)時，需要定期更換培養(yǎng)液，目的是。（3）與胚胎細胞核移植技術相比，體細胞核移植技術的成功率更低，原因是。從早期胚胎中分離獲得的胚胎干細胞，在形態(tài)上表現(xiàn)為（答出兩點即可），功能上具有。（4）鑒定轉基因動物：以免疫小鼠的淋巴細胞與骨髓瘤細胞進行融合，篩選融合雜種細胞，制備M蛋白的單克隆抗體。簡要寫出利用此抗體確定克隆動物A中M基因是否失活的實驗思路?！敬鸢浮肯拗菩院怂醿?nèi)切酶（限制酶）磷酸二酯鍵清除代謝產(chǎn)物，防止細胞代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害，同時給細胞提供足夠的營養(yǎng)動物胚胎細胞分化程度低，恢復其全能性相對容易，動物體細胞分化程度高，恢復其全能性十分困難細胞體積小，細胞核大，核仁明顯（任選兩點作答）發(fā)育的全能性B取動物A和克隆動物A的肝組織細胞，分別提取蛋白質進行抗原—抗體雜交【詳解】（1）基因工程中切割DNA的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶），故在構建含有片段F的重組質粒過程中，切割質粒DNA的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）。限制性內(nèi)切核酸內(nèi)切酶是作用于其所識別序列中兩個脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵。不同的限制酶可以獲得不同的末端，主要分為黏性末端和平末端。（2）在無菌、無毒等適宜環(huán)境中進行動物A成纖維細胞的原代和傳代培養(yǎng)時，需要定期更換培養(yǎng)液，目的是清除代謝產(chǎn)物，防止細胞代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害。（3）由于動物胚胎細胞分化程度低，恢復其全能性相對容易，動物體細胞分化程度高，恢復其全能性十分困難，故與胚胎細胞核移植技術相比，體細胞核移植技術的成功率低。胚胎干細胞在形態(tài)上表現(xiàn)為細胞體積小，細胞核大，核仁明顯；在功能上具有發(fā)育的全能性，可分化為成年動物體內(nèi)任何一種組織細胞。另外，在體外培養(yǎng)的條件下，可以增殖而不發(fā)生分化，可進行冷凍保存，也可進行遺傳改造。（4）先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細胞；誘導B細胞和骨髓瘤細胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，制備M蛋白的單克隆抗體；若要利用此抗體確定克隆動物A中M基因是否失活，如果M基因已經(jīng)失活，則克隆動物A中無法產(chǎn)生M蛋白的單克隆抗體，則可利用抗原—抗體雜交技術進行檢測。故實驗思路為：取動物A和克隆動物A的肝組織細胞，分別提取蛋白質進行抗原—抗體雜交?！?020年高考真題〗22．（2020·海南·統(tǒng)考高考真題）將人細胞與小鼠細胞融合得到的人-鼠雜種細胞進行長期培養(yǎng)，雜種細胞隨機丟失一部分人的染色體后，染色體數(shù)目會保持穩(wěn)定。選取三種雜種細胞，對編碼人的芳烴羥化酶（AHH）和磷酸甘油酸激酶（PGK）的基因進行染色體定位研究，結果如表（“+”表示有，“-”表示無）。雜種細胞人的染色體AHHPGK2號11號17號X甲－＋－＋－＋乙＋＋－－＋－丙－＋＋＋－＋下列有關敘述錯誤的是（

）A．聚乙二醇可誘導入細胞與小鼠細胞融合B．培養(yǎng)雜種細胞時，通常需在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素C．編碼AHH的基因在11號染色體上D．編碼PGK的基因在X染色體上【答案】C【詳解】A、聚乙二醇是誘導動物細胞融合的常用化學試劑，A正確；B、培養(yǎng)雜種細胞時，通常需在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素以防止雜菌污染，B正確；CD、由表中信息可知，編碼AHH的基因在2號染色體上，編碼PGK的基因在X染色體上，C錯誤，D正確。故選C。23．（2020·北京·統(tǒng)考高考真題）人體感染新冠病毒后，機體會產(chǎn)生多種特異性抗體。我國科學家從康復者的漿細胞中克隆出針對病毒表面抗原的抗體基因相關序列，構建表達載體并在相應系統(tǒng)中表達，可制備出全人源單克隆抗體。以下表述錯誤的是（

）A．該單抗可直接用于新冠病毒的核酸檢測B．在該單抗制備過程中利用了基因工程技術C．該單抗可與新冠病毒相應蛋白特異性結合D．可用抗原-抗體反應檢測抗體基因表達產(chǎn)物【答案】A【詳解】A、單抗檢測病毒是否存在的原理是抗原―抗體雜交，檢測病毒蛋白；直接檢測新冠病毒核酸是分子雜交，檢測是否含有病毒的核酸，所以抗體不能直接檢測核酸，A錯誤；B、題意顯示，我國科學家從康復者的漿細胞中克隆出針對病毒表面抗原的抗體基因相關序列，構建表達載體并在相應系統(tǒng)中表達，制備出全人源單克隆抗體。據(jù)此可推測，在該單抗制備過程中利用了基因工程技術，B正確；C、針對新冠病毒表面抗原制備出的單抗，可與新冠病毒相應蛋白特異性結合，C正確；D、抗體基因表達產(chǎn)物檢測的方法是采用抗原―抗體雜交反應，若呈陽性，則說明已翻譯出相應的蛋白質，D正確。故選A。24．（2020·天津·統(tǒng)考高考真題）在克隆哺乳動物過程中，通常作為核移植受體細胞的是去核的（

）A．卵原細胞B．初級卵母細胞C．次級卵母細胞D．卵細胞【答案】C【詳解】在克隆哺乳動物過程中，通常選擇減數(shù)第二次分裂中期的去核卵母細胞作為受體細胞，即次級卵母細胞。故選C。25．（2020·浙江·高考真題）下列關于病毒的敘述，錯誤的是（

）A．有的病毒經(jīng)滅活處理后，可用于細胞工程中介導動物細胞的融合B．適當增加機體內(nèi)參與免疫的細胞數(shù)量與活性，可提高對新型冠狀病毒的抵御能力C．在某人的分泌物中檢測到新型冠狀病毒，推測該病毒的增殖不依賴于宿主細胞D．用高溫高壓處理病毒使其失去感染能力，原因之一是病毒的蛋白質發(fā)生了熱變性【答案】C【詳解】A、有的病毒經(jīng)滅活處理后，可用于細胞工程中介導動物細胞的融合，如滅活的病毒，A正確；B、適當增加機體內(nèi)參與免疫的細胞數(shù)量與活性，可以參與免疫調(diào)節(jié)中的體液和細胞免疫，盡可能殺死更多的病毒，可提高對新型冠狀病毒的抵御能力，B正確；C、在某人的分泌物中檢測到新型冠狀病毒，是因為病毒浸入細胞后大量繁殖，病毒從細胞中釋放出來，不能說明該病毒的增殖不依賴于宿主細胞，C錯誤；D、用高溫高壓處理病毒使其失去感染能力，原因之一是病毒的蛋白質在高溫高壓下，空間結構發(fā)生變化，肽鏈松散，發(fā)生了變性，D正確。故選C。26．（2020·江蘇·統(tǒng)考高考真題）新型冠狀病毒可通過表面的棘突蛋白（S蛋白）與人呼吸道黏膜上皮細胞的ACE2受體結合，侵入人體，引起肺炎。圖1為病毒侵入后，人體內(nèi)發(fā)生的部分免疫反應示意圖。單克隆抗體可阻斷病毒的粘附或入侵，故抗體藥物的研發(fā)已成為治療新冠肺炎的研究熱點之一。圖2為篩選、制備抗S蛋白單克隆抗體的示意圖。請據(jù)圖回答下列問題：（1）圖1中人體內(nèi)抗原遞呈細胞吞噬病毒，并將病毒的抗原暴露在細胞表面，被細胞表面的受體識別后激活該細胞。（2）B細胞識別入侵的病毒后，在淋巴因子作用下，經(jīng)過細胞的，形成細胞。（3）為判斷疑似患者是否為新型冠狀病毒感染者，采集鼻咽拭子主要用于病原學檢查，檢測病毒的；采集血液樣本主要用于血清學檢查，檢測。（4）據(jù)圖2所示，研制抗S蛋白單克隆抗體，需先注射免疫小鼠以激活小鼠的免疫細胞，再提取激活的B細胞與骨髓瘤細胞融合，用HAT培養(yǎng)基篩選獲得細胞。因為同一種抗原可能激活細胞，還需繼續(xù)篩選才能獲得分泌單克隆抗體的細胞株?！敬鸢浮縏增殖、分化漿細胞和記憶核酸抗新型冠狀病毒抗體棘突蛋白（或S蛋白）雜交瘤多種B【詳解】（1）據(jù)題圖1可知，人體內(nèi)抗原遞呈細胞吞噬新冠病毒，并將新冠病毒的抗原暴露，呈遞給T細胞，被T細胞表面的受體識別后激活T細胞；（2）激活的T細胞釋放淋巴因子，并將抗原呈遞給B細胞，B細胞識別入侵的病毒后，迅速增殖分化成漿細胞和記憶細胞；（3）臨床上為判斷疑似患者是否為新型冠狀病毒感染者，采集鼻咽拭子主要用于病原學檢查，檢測疑似患者的呼吸道是否有新冠病毒的核酸，采集血液樣本主要用于血清學檢查，檢測血清中是否產(chǎn)生抗新型冠狀病毒的抗體；（4）據(jù)題中圖2所示，結合單克隆抗體制備方法，要研制抗棘突蛋白單克隆抗體，需先注射新冠病毒的棘突蛋白（或S蛋白），以激活小鼠的免疫細胞，再提取激活的B細胞與骨髓瘤細胞融合，獲得融合的、未融合的細胞，用HAT篩選培養(yǎng)基培養(yǎng)，未融合的B細胞不能長期生存而死亡，未融合的骨髓瘤細胞不能合成DNA而死亡，只有雜交瘤細胞能成活；由于同一種抗原可能激活多種B細胞，篩選出的融合的骨髓瘤細胞就可能分泌多種抗體，還需繼續(xù)篩選才能獲得分泌單克隆抗體的細胞。27．（2020·全國·統(tǒng)考高考真題）為研制抗病毒A的單克隆抗體，某同學以小鼠甲為實驗材料設計了以下實驗流程?；卮鹣铝袉栴}：（1）上述實驗前必須給小鼠甲注射病毒A，該處理的目的是。（2）寫出以小鼠甲的脾臟為材料制備單細胞懸液的主要實驗步驟：。（3）為了得到能產(chǎn)生抗病毒A的單克隆抗體的雜交瘤細胞，需要進行篩選。圖中篩選1所采用的培養(yǎng)基屬于，使用該培養(yǎng)基進行細胞培養(yǎng)的結果是。圖中篩選2含多次篩選，篩選所依據(jù)的基本原理是。（4）若要使能產(chǎn)生抗病毒A的單克隆抗體的雜交瘤細胞大量增殖，可采用的方法有（答出2點即可）?！敬鸢浮空T導小鼠甲產(chǎn)生能夠分泌抗病毒A抗體的B淋巴細胞取小鼠甲脾臟剪碎，用胰蛋白酶處理使其分散成單個細胞，加入培養(yǎng)液制成單細胞懸液選擇培養(yǎng)基只有雜交瘤細胞能夠生存抗原與抗體的反應具有特異性將雜交瘤細胞注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖；將雜交瘤細胞在體外培養(yǎng)【詳解】（1）實驗前給小鼠甲注射病毒A，是為了誘導小鼠甲產(chǎn)生能夠分泌抗病毒A抗體的B淋巴細胞。（2）取小鼠的脾臟，剪碎組織，用胰蛋白酶處理獲得單個細胞，加入培養(yǎng)液可以制成單細胞懸液。（3）圖中篩選1需要用到選擇培養(yǎng)基，只有雜交瘤細胞可以存活。篩選2是為了獲得能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞，該過程要用到抗原抗體雜交，故篩選所依據(jù)的原理是抗原-抗體反應具有特異性。（4）獲得能產(chǎn)生抗病毒A的單克隆抗體的雜交瘤細胞后，可以在體外培養(yǎng)液中進行培養(yǎng)，或在小鼠的腹腔中進行培養(yǎng)，使雜交瘤細胞大量增殖?！?019年高考真題〗30．（2019·江蘇·統(tǒng)考高考真題）下圖為雜交瘤細胞制備示意圖。骨髓瘤細胞由于缺乏次黃嘌呤磷酸核糖轉移酶（HGPRT-），在HAT篩選培養(yǎng)液中不能正常合成DNA，無法生長。下列敘述正確的是A．可用滅活的仙臺病毒誘導細胞融合B．兩兩融合的細胞都能在HAT培養(yǎng)液中生長C．雜交瘤細胞需進一步篩選才能用于生產(chǎn)D．細胞膜的流動性是細胞融合的基礎【答案】ACD【詳解】誘導動物細胞融合的方法有電激、聚乙二醇、滅活的病毒（如滅活的仙臺病毒）等，A正確；兩兩融合的細胞包括免疫B細胞與免疫B細胞融合的具有同種核的細胞、骨髓瘤細胞與骨髓瘤細胞融合的具有同種核的細胞、免疫B細胞與骨髓瘤細胞融合的雜交瘤細胞，骨髓瘤細胞雖然能無限增殖，但缺乏次黃嘌呤磷酸核糖轉移酶，免疫B細胞雖然有次黃嘌呤磷酸核糖轉移酶，但不具有無限增殖的本領，所以在HAT篩選培養(yǎng)液中，兩兩融合的具有同種核的細胞都無法生長，只有雜交瘤細胞才能生長，B錯誤；因每個免疫B細胞只分泌一種特異性抗體，因此在HAT篩選培養(yǎng)液中篩選出來的眾多的雜交瘤細胞所分泌的抗體，不一定都是人類所需要的，還需要進一步把能分泌人類所需要抗體的雜交瘤細胞篩選出來，C正確；動物細胞融合是以細胞膜的流動性為基礎的，D正確。故選ACD?？键c2植物細胞工程〖2023年高考真題〗1．（2023·山東·高考真題）利用植物細胞培養(yǎng)技術在離體條件下對單個細胞或細胞團進行培養(yǎng)使其增殖，可獲得植物細胞的某些次生代謝物。下列說法正確的是（

）A．利用該技術可獲得某些無法通過化學合成途徑得到的產(chǎn)物B．植物細胞體積小，故不能通過該技術進行其產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)C．次生代謝物是植物所必需的，但含量少，應選擇產(chǎn)量高的細胞進行培養(yǎng)D．該技術主要利用促進細胞生長的培養(yǎng)條件提高單個細胞中次生代謝物的含量【答案】A【詳解】A、有些產(chǎn)物不能或難以通過化學合成途徑得到，故可利用該技術可獲得某些無法通過化學合成途徑得到的產(chǎn)物，A正確；B、利用植物細胞培養(yǎng)技術在離體條件下對單個細胞或細胞團進行培養(yǎng)使其增殖，可獲得植物細胞的某些次生代謝物，故可通過該技術進行植物細胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)，B錯誤；C、次生代謝物不是植物生長所必需的，其含量少，可以通過增加細胞的數(shù)量來增加次生代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量，C錯誤；D、細胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)主要是利用促進細胞分裂的培養(yǎng)條件，提高了多個細胞中次生代謝物的含量，不能提高單個細胞中次生代謝物的含量，D錯誤。故選A。2．（2023·浙江·統(tǒng)考高考真題）植物組織培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基中常添加蔗糖，植物細胞利用蔗糖的方式如圖所示。

下列敘述正確的是（）A．轉運蔗糖時，共轉運體的構型不發(fā)生變化B．使用ATP合成抑制劑，會使蔗糖運輸速率下降C．植物組培過程中蔗糖是植物細胞吸收的唯一碳源D．培養(yǎng)基的pH值高于細胞內(nèi)，有利于蔗糖的吸收【答案】B【詳解】A、轉運蔗糖時，共轉運體的構型會發(fā)生變化，但該過程是可逆的，A錯誤；BD、據(jù)圖分析可知，H＋向細胞外運輸是需要消耗ATP的過程，說明該過程是逆濃度梯度的主動運輸，細胞內(nèi)的H＋＜細胞外H＋，蔗糖運輸時通過共轉運體依賴于膜兩側的H＋濃度差建立的勢能，故使用ATP合成抑制劑，會通過影響H＋的運輸而使蔗糖運輸速率下降，而培養(yǎng)基的pH值低（H＋多）于細胞內(nèi)，有利于蔗糖的吸收，B正確，D錯誤；C、植物組織培養(yǎng)過程中，蔗糖可作為碳源并有助于維持滲透壓，但蔗糖并非唯一碳源，C錯誤。故選B。3．（2023·廣東·統(tǒng)考高考真題）人參皂苷是人參的主要活性成分。科研人員分別誘導人參根與胡蘿卜根產(chǎn)生愈傷組織并進行細胞融合，以提高人參皂苷的產(chǎn)率。下列敘述錯誤的是（

）A．細胞融合前應去除細胞壁B．高Ca2+—高pH溶液可促進細胞融合C．融合的細胞即為雜交細胞D．雜交細胞可能具有生長快速的優(yōu)勢【答案】C【詳解】A、在細胞融合前，必須先用纖維素酶和果膠酶去除細胞壁，再誘導原生質體融合，A正確；B、人工誘導原生質體融合有物理法和化學法，用高Ca2+—高pH溶液可促進細胞融合，B正確；C、融合的細胞中有人參根-人參根細胞、人參根-胡蘿卜根細胞、胡蘿卜根-胡蘿卜根細胞，只有人參根-胡蘿卜根細胞才是雜交細胞，C錯誤；D、雜交細胞含兩種細胞的遺傳物質，可能具有生長快速的優(yōu)勢，D正確。故選C。4．（2023·湖北·統(tǒng)考高考真題）栽培稻甲產(chǎn)量高、品質好，但每年只能收獲一次。野生稻乙種植一次可連續(xù)收獲多年，但產(chǎn)量低。中國科學家利用栽培稻甲和野生稻乙雜交，培育出兼具兩者優(yōu)點的品系丙，為全球作物育種提供了中國智慧。下列敘述錯誤的是（）A．該成果體現(xiàn)了生物多樣性的間接價值B．利用體細胞雜交技術也可培育出品系丙C．該育種技術為全球農(nóng)業(yè)發(fā)展提供了新思路D．品系丙的成功培育提示我們要注重野生種質資源的保護【答案】A【詳解】A、生物多樣性的直接價值提現(xiàn)在食用、藥用、文學藝術創(chuàng)作等，間接價值體現(xiàn)在調(diào)節(jié)生態(tài)系統(tǒng)的功能上，培育新品系不屬于間接價值，A錯誤；B、植物體細胞雜交是以原生質體培養(yǎng)為基礎，人工誘導使不同親本原生質體融合，并通過對異核體的培養(yǎng)產(chǎn)生體細胞雜種的技術。植物體細胞雜交使遠緣雜交不親和的植物有可能實現(xiàn)遺傳物質重組，創(chuàng)造和培養(yǎng)植物新品種乃至新物種，尤其在多基因控制農(nóng)藝性狀的改良上具有較大優(yōu)勢。因此可以利用該方法培育品系丙，B正確；C、該育種技術把栽培稻和野生稻雜交，為全球農(nóng)業(yè)發(fā)展提供了新思路，C正確；D、品系丙的成功培育需要依靠野生稻的參與，提示我們要注重野生種質資源的保護，D正確。故選A。5．（2023·海南·高考真題）基因遞送是植物遺傳改良的重要技術之一，我國多個實驗室合作開發(fā)了一種新型基因遞送系統(tǒng)（切—浸—生芽Cut-Dip-Budding，簡稱CDB法）。圖1與圖2分別是利用常規(guī)轉化法和CDB法在某植物中遞送基因的示意圖。

回答下列問題。(1)圖1中，從外植體轉變成愈傷組織的過程屬于；從愈傷組織到幼苗的培養(yǎng)過程需要的激素有生長素和，該過程還需要光照，其作用是。(2)圖1中的愈傷組織，若不經(jīng)過共培養(yǎng)環(huán)節(jié)，直接誘導培養(yǎng)得到的植株可以保持植株A的。圖1中，含有外源基因的轉化植株A若用于生產(chǎn)種子，其包裝需標注。(3)圖1與圖2中，農(nóng)桿菌侵染植物細胞時，可將外源基因遞送到植物細胞中的原因是。(4)已知某酶（PDS）缺失會導致植株白化。某團隊構建了用于敲除PDS基因的CRISPR/Cas9基因編輯載體（含有綠色熒光蛋白標記基因），利用圖2中的CDB法將該重組載體導入植株B，長出毛狀根，成功獲得轉化植株B．據(jù)此分析，從毛狀根中獲得陽性毛狀根段的方法是，圖2中，鑒定導入幼苗中的基因編輯載體是否成功發(fā)揮作用的方法是，依據(jù)是。(5)與常規(guī)轉化法相比，采用CDB法進行基因遞送的優(yōu)點是（答出2點即可）?！敬鸢浮?1)脫分化細胞分裂素誘導葉綠素的形成；滿足葉綠體利用光能制造有機物的需要(2)遺傳特性轉基因標識(3)Ti質粒中的T-DNA能將外源基因遞送到植物細胞中，并與植物細胞的染色體DNA整合到一起(4)熒光檢測選擇帶有綠色熒光標記的毛狀根觀察幼苗是否表現(xiàn)出白化特征PDS缺失會導致植株白化，白化苗的出現(xiàn)意味著通過基因編輯技術成功實現(xiàn)PDS基因的敲除(5)操作方法簡單，不需要借助植物組織培養(yǎng)技術進行操作，且培養(yǎng)周期較短?！驹斀狻浚?）圖1中，從外植體轉變成愈傷組織的過程屬于脫分化過程，該過程的本質是使細胞失去原來特定的結構和功能；從愈傷組織到幼苗的培養(yǎng)過程需要的激素有生長素和細胞分裂素，這兩種激素的比值能調(diào)控愈傷組織的分化方向，該過程還需要光照，因為葉綠素的形成需要光；且葉綠體利用光能制造有機物，供試管苗生長發(fā)育。（2）圖1中的愈傷組織，若不經(jīng)過共培養(yǎng)環(huán)節(jié)，直接誘導培養(yǎng)得到的植株可以保持植株A的遺傳特性。圖1中，含有外源基因的轉化植株A若用于生產(chǎn)種子，其包裝需標注轉基因種子，即進行轉基因標識。（3）圖1與圖2中，農(nóng)桿菌侵染植物細胞時，利用了農(nóng)桿菌含有的Ti質粒的作用，Ti質粒中的T-DNA能將外源基因遞送到植物細胞中，并與植物細胞的染色體DNA整合到一起。（4）已知某酶（PDS）缺失會導致植株白化。某團隊構建了用于敲除PDS基因的CRISPR/Cas9基因編輯載體（含有綠色熒光蛋白標記基因），利用圖2中的CDB法將該重組載體導入植株B，長出毛狀根，成功獲得轉化植株B，該過程中通過熒光檢測選擇帶有綠色熒光標記的毛狀根即為陽性毛狀根段，圖2中，鑒定導入幼苗中的基因編輯載體是否成功發(fā)揮作用的方法是觀察幼苗是否表現(xiàn)出白化特征，因為PDS缺失會導致植株白化，而白化苗的出現(xiàn)意味著通過基因編輯技術成功實現(xiàn)PDS基因的敲除。（5）與常規(guī)轉化法相比，采用CDB法進行基因遞送的優(yōu)點主要表現(xiàn)在操作方法簡單，不需要借助植物組織培養(yǎng)技術進行操作，且培養(yǎng)周期較短。6．（2023·浙江·統(tǒng)考高考真題）賴氨酸是人體不能合成的必需氨基酸，而人類主要食物中的賴氨酸含量很低，利用生物技術可提高食物中賴氨酸含量。回答下列問題：(1)植物細胞合成的賴氨酸達到一定濃度時，能抑制合成過程中兩種關鍵酶的活性，導致賴氨酸含量維持在一定濃度水平，這種調(diào)節(jié)方式屬于。根據(jù)這種調(diào)節(jié)方式，在培養(yǎng)基中添加，用于篩選經(jīng)人工誘變的植物懸浮細胞，可得到抗賴氨酸類似物的細胞突變體，通過培養(yǎng)獲得再生植株。(2)隨著轉基因技術與動物細胞工程結合和發(fā)展，2011年我國首次利用轉基因和體細胞核移植技術成功培育了高產(chǎn)賴氨酸轉基因克隆奶牛。其基本流程為：①構建乳腺專一表達載體。隨著測序技術的發(fā)展，為獲取富含賴氨酸的酪蛋白基因（目的基因），可通過檢索獲取其編碼序列，用化學合成法制備得到。再將獲得的目的基因與含有乳腺特異性啟動子的相應載體連接，構建出乳腺專一表達載體。②表達載體轉入牛胚胎成纖維細胞（BEF）。將表達載體包裹到磷脂等構成的脂質體內(nèi)，與BEF膜發(fā)生，表達載體最終進入細胞核，發(fā)生轉化。③核移植。將轉基因的BEF作為核供體細胞，從牛卵巢獲取卵母細胞，經(jīng)體外培養(yǎng)及去核后作為。將兩種細胞進行電融合，電融合的作用除了促進細胞融合，同時起到了重組細胞發(fā)育的作用。④重組細胞的體外培養(yǎng)及胚胎移植。重組細胞體外培養(yǎng)至，植入代孕母牛子宮角，直至小牛出生。⑤檢測。DNA水平檢測：利用PCR技術，以非轉基因牛耳組織細胞作為陰性對照，以為陽性對照，檢測到轉基因牛耳組織細胞中存在目的基因。RNA水平檢測：從非轉基因牛乳汁中的脫落細胞、轉基因牛乳汁中的脫落細胞和轉基因牛耳組織細胞，提取總RNA，對總RNA進行處理，以去除DNA污染，再經(jīng)逆轉錄形成cDNA，并以此為，利用特定引物擴增目的基因片段。結果顯示目的基因在轉基因牛乳汁中的脫落細胞內(nèi)表達，而不在牛耳組織細胞內(nèi)表達，原因是什么？。【答案】(1)負反饋調(diào)節(jié)過量賴氨酸類似物(2)基因數(shù)據(jù)庫融合核受體細胞激活早期囊胚轉基因BEFDNA酶PCR的模板構建的表達載體只含有乳腺特異性啟動子，只能在乳腺細胞中啟動轉錄，而在牛耳細胞中不能表達。【詳解】（1）負反饋調(diào)節(jié)是指在一個系統(tǒng)中，系統(tǒng)工作的效果，反過來又作為信息調(diào)節(jié)該系統(tǒng)的工作，并且使系統(tǒng)工作的效果減弱或受到限制，有助于系統(tǒng)保持穩(wěn)定。植物細胞合成的賴氨酸達到一定濃度時，能抑制合成過程中兩種關鍵酶的活性，導致賴氨酸含量維持在一定濃度水平，這種調(diào)節(jié)方式屬于負反饋調(diào)節(jié)。如果想得到抗賴氨酸類似物的細胞突變體可在培養(yǎng)基中添加過量賴氨酸類似物。（2）①從基因數(shù)據(jù)庫獲取獲取目的基因編碼序列，用化學合成法制備可得到目的基因。②表達載體包裹到磷脂等構成的脂質體內(nèi)，根據(jù)細胞膜成分，其與BEF膜發(fā)生融合。③去核的卵母細胞作為受體細胞，其處于減數(shù)第二次分裂中期，因為卵母細胞中含有促使細胞核表達全能性的物質和營養(yǎng)條件。電融合的作用除了促進細胞融合，同時起到了激活重組細胞發(fā)育的作用。④胚胎發(fā)育到適宜階段可取出向受體移植。牛、羊一般要培養(yǎng)到桑椹胚或囊胚階段；植入代孕母牛子宮角，直至小牛出生。⑤陽性對照：按照當前實驗方案一定能得到正面預期結果的對照實驗。陽性對照是已知的對測量結果有影響的因素，目的是確定實驗程序無誤。陰性對照和陽性對照相反，按照當前的實驗方案一定不能得到正面預期結果的對照實驗。排除未知變量對實驗產(chǎn)生的不利影響。本實驗以非轉基因牛耳組織細胞作為陰性對照，為了檢測到轉基因牛耳組織細胞中存在目的基因。應該以含有目的基因的牛耳組織細胞為陽性對照。為了除去DNA污染，可以使用DNA酶使其水解。經(jīng)逆轉錄形成cDNA，并以此為PCR的模板進行擴增。目的基因在轉基因牛乳汁中的脫落細胞內(nèi)表達，而不在牛耳組織細胞內(nèi)表達，原因是構建的表達載體只含有乳腺特異性啟動子，只能在乳腺細胞中啟動轉錄，而在牛耳細胞中不能表達。7．（2023·浙江·統(tǒng)考高考真題）甲植物細胞核基因具有耐鹽堿效應，乙植物細胞質基因具有高產(chǎn)效應。某研究小組用甲、乙兩種植物細胞進行體細胞雜交相關研究，基本過程包括獲取原生質體、誘導原生質體融合、篩選融合細胞、雜種植株再生和鑒定，最終獲得高產(chǎn)耐鹽堿再生植株?；卮鹣铝袉栴}：(1)根據(jù)研究目標，在甲、乙兩種植物細胞進行體細胞雜交前，應檢驗兩種植物的原生質體是否具備的能力。為了便于觀察細胞融合的狀況，通常用不同顏色的原生質體進行融合，若甲植物原生質體采用幼苗的根為外植體，則乙植物可用幼苗的為外植體。(2)植物細胞壁的主要成分為和果膠，在獲取原生質體時，常采用相應的酶進行去壁處理。在原生質體融合前，需對原生質體進行處理，分別使甲原生質體和乙原生質體的失活。對處理后的原生質體在顯微鏡下用計數(shù)，確定原生質體密度。兩種原生質體1∶1混合后，通過添加適宜濃度的PEG進行融合；一定時間后，加入過量的培養(yǎng)基進行稀釋，稀釋的目的是。(3)將融合原生質體懸浮液和液態(tài)的瓊脂糖混合，在凝固前倒入培養(yǎng)皿，融合原生質體分散固定在平板中，并獨立生長、分裂形成愈傷組織。同一塊愈傷組織所有細胞源于。下列各項中能說明這些愈傷組織只能來自于雜種細胞的理由是哪幾項？A．甲、乙原生質體經(jīng)處理后失活，無法正常生長、分裂B．同種融合的原生質體因甲或乙原生質體失活而不能生長、分裂C．培養(yǎng)基含有抑制物質，只有雜種細胞才能正常生長、分裂D．雜種細胞由于結構和功能完整可以生長、分裂(4)愈傷組織經(jīng)可形成胚狀體或芽。胚狀體能長出，直接發(fā)育形成再生植株。(5)用PCR技術鑒定再生植株。已知甲植物細胞核具有特異性DNA序列a，乙植物細胞質具有特異性DNA序列b；M1、M2為序列a的特異性引物，N1、N2為序列b的特異性引物。完善實驗思路：Ⅰ．提取純化再生植株的總DNA，作為PCR擴增的。Ⅱ．將DNA提取物加入PCR反應體系，為特異性引物，擴增序列a；用同樣的方法擴增序列b。Ⅲ．得到的2個PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)后，若每個PCR擴增產(chǎn)物在凝膠中均出現(xiàn)了預期的個條帶，則可初步確定再生植株來自于雜種細胞。【答案】(1)再生葉(2)纖維素細胞質和細胞核血細胞計數(shù)板降低PEG濃度，使其失去融合作用(3)同一個雜種融合原生質體ABD(4)再分化根和芽(5)模板M1、M2凝膠電泳1【詳解】（1）在甲、乙兩種植物細胞進行體細胞雜交前，應檢驗兩種植物的原生質體是否具備再生的能力。為了便于觀察細胞融合的狀況，通常用不同顏色的原生質體進行融合，若甲植物原生質體采用幼苗的根為外植體，則乙植物可用幼苗的葉為外植體。（2）植物細胞壁的主要成分為纖維素和果膠，在獲取原生質體時，常采用相應的酶進行去壁處理。甲植物細胞核基因具有耐鹽堿效應，乙植物細胞質基因具有高產(chǎn)效應，在原生質體融合前，需對原生質體進行處理，分別使甲原生質體和乙原生質體的細胞質和細胞核失活，融合后具有甲植物的細胞核基因和乙植物的細胞質基因。對處理后的原生質體在顯微鏡下用血細胞計數(shù)板計數(shù)，確定原生質體密度。兩種原生質體1∶1混合后，通過添加適宜濃度的PEG進行融合；一定時間后，加入過量的培養(yǎng)基進行稀釋，稀釋的目的是降低PEG濃度,使其失去融合作用。（3）將融合原生質體懸浮液和液態(tài)的瓊脂糖混合，在凝固前倒入培養(yǎng)皿，融合原生質體分散固定在平板中，并獨立生長、分裂形成愈傷組織。同一塊愈傷組織所有細胞源于同一個雜種融合的原生質體。未融合的原生質體因為細胞質或細胞核的失活，無法正常生長、分裂；同種融合的原生質體也因為甲原生質體細胞質或乙原生質體細胞核失活而不能生長、分裂；只有雜種細胞才具備有活性的細胞質和細胞核，可以生長、分裂，因此這些愈傷組織只能來自于雜種細胞。故選ABD。（4）愈傷組織經(jīng)再分化可形成胚狀體或芽。胚狀體能長出根和芽，直接發(fā)育形成再生植株。（5）Ⅰ．提取純化再生植株的總DNA，作為PCR擴增的模板。Ⅱ．將DNA提取物加入PCR反應體系，M1、M2為特異性引物，擴增序列a；用同樣的方法擴增序列b。Ⅲ．得到的2個PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳后，若每個PCR擴增產(chǎn)物在凝膠中均出現(xiàn)了預期的1個條帶，則可初步確定再生植株來自于雜種細胞?！?022年高考真題〗8．（2022·重慶·統(tǒng)考高考真題）植物體細胞通常被誘導為愈傷組織后才能表現(xiàn)全能性。研究發(fā)現(xiàn)，愈傷組織的中層細胞是根或芽再生的源頭干細胞，其在不同條件下，通過基因的特異性表達調(diào)