醫(yī)學(xué)知識(shí)一農(nóng)藥

第七章農(nóng)藥及代謝產(chǎn)物的測(cè)定第一節(jié)有機(jī)磷農(nóng)藥有機(jī)磷農(nóng)藥絕大多數(shù)為殺蟲(chóng)劑，如常用的對(duì)硫磷、內(nèi)吸磷、馬拉硫磷、樂(lè)果、敵百蟲(chóng)及敵敵畏等，近幾年來(lái)已先后合成殺菌劑、殺鼠劑等有機(jī)磷農(nóng)藥。有機(jī)磷農(nóng)藥多為磷酸酯類或硫代磷酸酯類，其結(jié)構(gòu)式中R1、R2多為甲氧基（CH3O-）或乙氧基（C2H5O-）；Z為氧（O）或硫（S）原子：X為烷氧基、芳氧基或其他取代基團(tuán)。

一、理化性質(zhì)有機(jī)磷農(nóng)藥大多呈油狀或結(jié)晶狀，工業(yè)品呈淡黃色至棕色，除敵百蟲(chóng)和敵敵畏之外，大多是有蒜臭味。一般不溶于水，易溶于有機(jī)溶劑如苯、丙酮、乙醚、三氮甲烷及油類，對(duì)光、熱、氧均較穩(wěn)定，遇堿易分解破壞，敵百蟲(chóng)例外，敵百蟲(chóng)為白色結(jié)晶，能溶于水，遇堿可轉(zhuǎn)變?yōu)槎拘暂^大的敵敵畏。二、代謝和生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)接觸途徑：農(nóng)藥的生產(chǎn)過(guò)程中，特別是出料、分裝。施用農(nóng)藥以及裝卸、運(yùn)輸、供銷、保管過(guò)程中。吸收：有機(jī)磷農(nóng)藥中毒的途徑可通過(guò)皮膚進(jìn)入人體。在噴灑過(guò)程的氣霧可由呼吸道吸入；誤服者由消化道吸收。分布：吸收后經(jīng)血液和淋巴系統(tǒng)很快分布到全身，肝臟最高，還可以結(jié)合人蛋白質(zhì)。代謝：氧化：脫硫作用、脫烷基、脫烷?；?、硫酯基的氧化。毒性增強(qiáng)。水解：降低毒性。結(jié)合：氧化產(chǎn)物，水解產(chǎn)物結(jié)合羧酸、醇、酚等而排泄，避免了抗膽堿酯酶活性。與蛋白質(zhì)共價(jià)結(jié)合：遲發(fā)性神經(jīng)毒性。正常生理情況：

膽堿酯酶+乙酰膽堿（神經(jīng)傳遞介質(zhì)）↓乙酰膽堿酯酶↓膽堿酯酶+乙酸+膽堿有機(jī)磷農(nóng)藥中毒：抑制了膽堿酯酶的活性，造成組織中乙酰膽堿的積聚，其結(jié)果引起膽堿能受體活性紊亂，而使有膽堿能受體的器官功能發(fā)生障礙。

生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)1、血液中膽堿酯酶活性作為接觸生物指標(biāo)或效應(yīng)性生物標(biāo)志物。輕度中毒：全血膽堿酯酶活性降至正常人的70%～50%中度中毒：正常人的50%～30%重度中毒：正常人的30%以下2、血液中有機(jī)磷農(nóng)藥：接觸性生物標(biāo)志物三、樣品采集1.血液中有機(jī)磷農(nóng)藥測(cè)定：準(zhǔn)確采取肘靜脈血2.5ml，立即置于盛有0.1mol/L鹽酸溶液7.5ml的試管中，冰凍貯存。2.血液中膽堿酯酶活性測(cè)定：末梢血。四、血液中有機(jī)磷農(nóng)藥的測(cè)定1.原理：血液中有機(jī)磷農(nóng)藥在酸性條件下，環(huán)己烷萃取，氣向色譜測(cè)定。2.儀器條件：色譜柱：2m×3.2mm；ChromsorbW-HP，80~100目；固定液：SE-30柱溫：200℃；汽化室溫度：240℃；檢測(cè)室溫度：240℃；載氣為高純氮?dú)猓髁浚?0ml/min。燃?xì)猓簹錃狻?.樣品處理和測(cè)定①繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：0.4,2.0,4.0μg/ml.②用環(huán)己烷萃?。喝?ml+2ml環(huán)己烷振蕩，離心。③PT-C18色譜預(yù)處理柱凈化：上清液。④定容：氮?dú)饬鲹]發(fā)至0.1ml。⑤進(jìn)樣：1~5ml。五、全血膽堿酯酶活性的測(cè)定（一）三氯化鐵分光光度法1.原理紅棕色羥肟酸鐵配合物520nm（1）.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線①用ph=7.20的磷酸緩沖液配置乙酰膽堿標(biāo)準(zhǔn)系列，0~4.00μmol。②各管+堿性羥胺溶液4ml，振搖3min;③加1+2鹽酸2ml，振搖1min；④加10%三氯化鐵溶液2ml，搖勻，過(guò)濾。⑤520nm處，測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2、樣品處理和測(cè)定（2）.樣品處理和測(cè)定①取A和B兩管,各加入水0.96ml及耳垂血40u1,搖勻,置于37℃水浴中,預(yù)熱5~10min.②向樣品管A中,加乙酰膽堿標(biāo)準(zhǔn)液1ml,準(zhǔn)確計(jì)時(shí),于37℃±0.5℃水浴30min后，立即加堿性羥胺4ml,振搖3min終止反應(yīng)。2、樣品處理和測(cè)定③向?qū)φ展蹷中，先加堿性羥胺4ml，振搖3min，再加乙酰膽堿標(biāo)準(zhǔn)液1ml。④向A和B兩管中,各加1+2鹽酸2m1,振搖1min,然后各管加10％三氯化鐵溶液2ml,搖勻,過(guò)濾。于520nm處測(cè)定吸光度。（3）.結(jié)果計(jì)算被水解乙酰膽堿的吸光度＝B管吸光度－A管吸光度被水解乙酰膽堿的量（μmol）40u1血

膽堿酯酶活性絕對(duì)值（C）全血膽堿酯酶活性值(μmol/ml)＝C/0.04正常人全血膽堿酯酶活性值膽堿酯酶活性百分?jǐn)?shù)：接觸者全血膽堿酯酶活性值×100%＝3.注意事項(xiàng)①采血時(shí)不應(yīng)過(guò)度擠壓耳垂。如果過(guò)度擠壓耳垂，采得的血液中血清或組織液占比例過(guò)多，結(jié)果偏低。②氯化乙酰膽堿在空氣中極易潮解，稱量速度要快。③水浴溫度和時(shí)間對(duì)酶作用有明顯影響，溫度控制在37±0.5℃，時(shí)間控制在0.5min內(nèi)。④加三氯化鐵顯色后，棕紅色配合物易褪色，必須在5~10min比色。⑤計(jì)算膽堿酯酶活性百分?jǐn)?shù)需要健康人群全血膽堿酯酶活性值作標(biāo)準(zhǔn)?？捎帽镜貐^(qū)的未接觸健康人作測(cè)定，求得正常人膽堿酯酶活性值，一般正常人數(shù)不少于30名。（二）DTNB分光光度法1.原理：黃色v412nm(CH3)3NCH3CH2SCOCH3+H2OOH膽堿酯酶?(CH3)3NCH3CH2SH+CH3COOHOH(CH3)3NCH3CH2SHOH+NO2SS(CH3)3NCH3CH2SSNO2COOHHSNO2COOHNO2COOHOHCOOH+2.樣品處理和測(cè)定（1）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線1.0μmol/mol的巰基標(biāo)準(zhǔn)0、0.1、0.2、0.3、0.4ml+水至0.5ml，+磷酸緩沖液1.5ml，+DTNB溶液0.5ml412nm處測(cè)定吸光度。1ml1.0mmol/mol的巰基標(biāo)準(zhǔn)≈1.0μmol谷胱甘肽≈1.0μmol硫代膽堿膽堿酯酶活力：0、20、40、60、80μmol/ml。（2）樣品的測(cè)定①取血樣10μl放入盛有3ml磷酸緩沖液的小試管中;②取出1.50ml作為測(cè)定樣，原管為對(duì)照樣；③對(duì)照管中加入一滴抑制劑（毒扁豆堿溶液）；④向兩管中各加DTNB0.50ml，37℃水浴預(yù)溫5min;⑤分別向兩管加入乙酰膽堿0.50ml，記時(shí)；⑥37℃水浴準(zhǔn)確反應(yīng)6min后，向測(cè)定管加1滴抑制劑終止反應(yīng)；⑦離心除去血細(xì)胞，取上清液于比色管中，412nm測(cè)定吸光度。測(cè)定管吸光度為A，對(duì)照管吸光度為A’.(3)結(jié)果計(jì)算根據(jù)測(cè)得的A-A’，得到吸光度差值ΔA，即為酶水解產(chǎn)生的硫代膽堿的顯色深度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線得到膽堿酯酶活性單位。3.注意事項(xiàng)（1）紅細(xì)胞中，乙酰膽堿酶全部存在于細(xì)胞膜表面，測(cè)定不需要紅細(xì)胞溶解。如有溶血的血紅蛋白在414~415nm處有吸收峰。為防止溶血，本法所用