SN 1376.1-2004牛傳染性胸膜肺炎病原分離鑒定

中華人民共和國出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)牛傳染性胸膜肺炎病原分離鑒定國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局I本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A是規(guī)范性附錄。1牛傳染性胸膜肺炎病原分離鑒定本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了牛傳染性胸膜肺炎病原的分離與鑒定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于牛傳染性胸膜肺炎病原的分離與鑒定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)中引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。4.1試驗(yàn)用培養(yǎng)基包括運(yùn)輸培養(yǎng)基、10%馬血清肉湯培養(yǎng)基、10%馬血清肉湯瓊脂培養(yǎng)基、普通10%4.3實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T6682—1992中的二級(jí)水標(biāo)準(zhǔn)。5.1活牛的樣品采集用滅菌拭子采集鼻分泌或用注射器無菌穿刺采取胸腔液。5.2死牛的樣品采集樣品需長途運(yùn)遞的應(yīng)將其置于運(yùn)輸培養(yǎng)基內(nèi)，于4℃條件下48h內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室。采集的樣品無法立即送實(shí)驗(yàn)室的或者實(shí)驗(yàn)室不能立即檢驗(yàn)的，應(yīng)將樣品置—20℃保存。6病原分離培養(yǎng)6.1.1污染樣品：將病料置于含500IU/mL青霉素及1:7000乙酸鉈的肉湯中磨碎，10倍稀釋后4℃26.2.1取0.1mL～0.3mL樣品無菌接種于5管10%馬血清肉湯培養(yǎng)基中，置37℃培養(yǎng)直至第10d。6.2.2用無菌接種環(huán)鉤取樣品劃線接種于10%馬血清肉湯瓊脂培養(yǎng)基上，每個(gè)樣品共接種5個(gè)培養(yǎng)6.3生長觀察6.3.1接種后第3d開始每天觀察接種管及培養(yǎng)皿細(xì)菌生長情況直至第10d。7.1.1挑取菌落接種10%馬血清肉湯培養(yǎng)基中3d～5d后觀察結(jié)果。牛傳染性胸膜肺炎病原生長表現(xiàn)如6.3.2所述。7.1.2挑取菌落接種在普通10%馬血清肉湯瓊脂培養(yǎng)基上，3d～5d后觀察結(jié)果。牛傳染性胸膜肺炎病原生長表現(xiàn)如6.3.3所述。培養(yǎng)基溶解后，15磅滅菌15min。待培養(yǎng)基溫度降至37℃以下時(shí)，將乙酸鉈、青霉素及經(jīng)56℃滅活30min的馬血清加入其中，混勻，分裝至無菌的容器中。經(jīng)無菌檢驗(yàn)后置4℃A.2.1培養(yǎng)基的成分：牛心浸液1000mL、酵母浸膏100g、馬血清100mL、葡萄糖5g、DNA2g、青霉素500000IU、乙酸鉈0.14g。沸溶解后，15磅滅菌15min。待培養(yǎng)基溫度降至37℃以下時(shí)，將乙酸鉈、青霉素及經(jīng)56℃滅活30min的馬血清加入其中，混勻，分裝至無菌的容器中。經(jīng)無菌檢驗(yàn)后置4℃保存?zhèn)溆?。A.310%馬血清肉湯瓊脂培養(yǎng)基DNA2g、青霉素500000IU、乙酸鉈0.14g?；靹颍盅b至無菌的容器中。經(jīng)無菌檢驗(yàn)后置4℃保存?zhèn)溆?。A.4普通10%馬血清肉湯瓊脂培養(yǎng)基后，加入經(jīng)56℃30min滅活的無菌馬血清和DNA,混勻，分裝至滅菌培養(yǎng)皿，經(jīng)無菌檢驗(yàn)后置4℃保存?zhèn)溆谩?0%葡萄糖溶液10mL。葡萄糖溶液和經(jīng)56℃滅活30min無菌馬血清100mL,混勻，無菌分裝至無菌的生化試管中，經(jīng)無菌檢驗(yàn)后置4℃保存?zhèn)溆?。A.6精氨酸生化培養(yǎng)基38%精氨酸鹽溶液40mL。A.6.2培養(yǎng)基的配制牛心浸液中加入酚紅、酵母浸膏，煮沸溶解，15磅滅菌15min,無菌加入DNA、無菌的