綠藻多糖標(biāo)準(zhǔn)

1T/CIXXX-2023綠藻多糖本文件規(guī)定了綠藻多糖的術(shù)語和定義、生產(chǎn)工藝、技術(shù)要求、試驗方法、檢驗規(guī)則等。本文件適用于以石莼、滸苔等綠藻為原料，經(jīng)粉碎、提取、分離、濃縮（或不濃縮）、添加（或不添加）輔料、滅菌、干燥（或不干燥）等工序制得的飼料用綠藻多糖。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T603化學(xué)試劑試驗方法中所用制劑及制品的制備GB/T5917.1飼料粉碎粒度測定兩層篩篩分法GB/T6435飼料中水分的測定GB/T6438飼料中粗灰分的測定GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T0648飼料標(biāo)簽GB/T13079飼料中總砷的測定GB/T13080飼料中鉛的測定原子吸收光譜GB/T13091飼料中沙門氏菌的測定GB/T14699.1飼料采樣《中華人民共和國獸藥典》第二部2321鉛、鎘、砷、汞、銅測定法3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1綠藻多糖以石莼、滸苔等綠藻為原料，經(jīng)提取制得的多糖。4生產(chǎn)工藝原料→粉碎→提取→分離→濃縮（或不濃縮）→添加（或不添加）輔料→滅菌→干燥（或不干燥）→包裝→檢驗合格→入庫。25技術(shù)要求5.1輔料要求可添加麥芽糊精、抗結(jié)劑、增稠劑等輔料，所添加輔料應(yīng)符合國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。5.2感官要求感官要求應(yīng)符合表1的規(guī)定。表1感官要求要求綠藻多糖液態(tài)綠藻多糖具有淺綠色到深綠色等綠藻特征的色澤具有淺綠色到深綠色等綠藻特征的色澤氣味具有海藻應(yīng)有的氣味，無異味具有海藻應(yīng)有的氣味，無異味狀態(tài)均勻粉末或顆粒，無肉眼可見雜質(zhì)液態(tài)，無肉眼可見雜質(zhì)5.3理化指標(biāo)理化指標(biāo)應(yīng)符合表2的規(guī)定。表2理化指標(biāo)綠藻多糖液態(tài)綠藻多糖總糖含量，%≥30.06.0鼠李糖占總糖比例，%≥25.05.0固形物含量，%≥-粗灰分，%≤50.0水分，%≤20.0-粒度（40目標(biāo)準(zhǔn)篩通過率），%≥99.0-總砷，mg/kg≤3.0鉛，mg/kg≤5.03.05.4微生物指標(biāo)微生物指標(biāo)應(yīng)符合表3的規(guī)定。3表3微生物指標(biāo)綠藻多糖液態(tài)綠藻多糖沙門氏菌（/25g）不得檢出不得檢出6試驗方法本文件所用試劑和水，除特殊注明外，均指分析純試劑和符合GB/T6682中規(guī)定的三級水，色譜分析中所用水均為符合GB/T6682中規(guī)定的一級水。溶液按照GB/T603配制。6.1感官要求取適量試樣置于潔凈的白色盤（瓷盤或同類容器）中，觀察色澤、狀態(tài)和雜質(zhì)，聞其氣6.2理化指標(biāo)6.2.1總糖含量按照附錄A規(guī)定的方法測定。6.2.2鼠李糖占總糖比例按照附錄B規(guī)定的方法測定。6.2.3固形物含量取適量樣品置于自動水分測定儀中，測其固形物含量。6.2.4粗灰分按GB/T6438規(guī)定的方法測定。6.2.5水分按GB/T6435規(guī)定的方法測定。6.2.6粒度按GB/T5917.1規(guī)定的方法測定。6.2.7總砷4方法1：按GB/T13079規(guī)定的方法測定。方法2：按《中華人民共和國獸藥典》規(guī)定的方法測定。6.2.8鉛方法1：按GB/T13080規(guī)定的方法測定。方法2：按《中華人民共和國獸藥典》規(guī)定的方法測定。6.3微生物指標(biāo)按GB/T13091規(guī)定的方法測定。7檢驗規(guī)則7.1批次以同一班次、同一品種、同一工藝的產(chǎn)品為一個批次。7.2采樣按GB/T14699.1進行。7.3檢驗7.3.1出廠檢驗每批產(chǎn)品應(yīng)進行出廠檢驗，綠藻多糖的檢驗項目包括感官要求、總糖含量、粗灰分、水分、粒度，液態(tài)綠藻多糖的檢驗項目包括感官要求、總糖含量、粗灰分、固形物含量。7.3.2型式檢驗型式檢驗為全項目檢驗，每年不得少于一次。如有下列情況時，應(yīng)進行型式檢驗：a)主要原、輔材料，配方，生產(chǎn)工藝或設(shè)備發(fā)生較大改變時；b)停產(chǎn)半年以上再恢復(fù)生產(chǎn)時；c)出廠檢驗結(jié)果與上次型式檢驗結(jié)果有較大差異時；d)國家有關(guān)部門監(jiān)督檢驗與抽查時。7.4判定規(guī)則57.4.1所檢項目全部合格，判定為該批次產(chǎn)品合格。7.4.2檢驗結(jié)果中有任何指標(biāo)不符合本文件規(guī)定時，可自同批產(chǎn)品中重新加倍抽樣進行復(fù)檢。復(fù)檢結(jié)果中有一項指標(biāo)不符合本文件規(guī)定時，即判定該批產(chǎn)品不合格。8標(biāo)簽、包裝、運輸、貯存和保質(zhì)期8.1標(biāo)簽按GB10648執(zhí)行。8.2包裝應(yīng)采用符合國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的、無毒的包裝材料。8.3運輸產(chǎn)品在運輸過程中應(yīng)防止日曬雨淋、包裝破損，嚴(yán)禁與有毒、有害物質(zhì)混裝、混運。8.4貯存產(chǎn)品應(yīng)貯存于避光、干燥處，避免與有毒、有害、易腐、易污染等物品一起堆放。密閉保存。8.5銷售和召回銷售和召回應(yīng)符合相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)和有關(guān)規(guī)定。6附錄A總糖含量的測定A.1原理綠藻多糖在酸性條件下水解，水解物在硫酸的作用下，迅速脫水生成糖醛衍生物，并與苯酚反應(yīng)生成橙黃色溶液，反應(yīng)產(chǎn)物在490nm處比色測定，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。A.2試劑除另有說明外，所用試劑均為分析純。A.2.1水為GB/T6682中規(guī)定的三級水。A.2.2濃硫酸A.2.3苯酚A.2.4葡萄糖A.2.550g/L苯酚溶液：稱取5g苯酚，用水溶解并定容至100mL棕色容量瓶中，搖勻，置4℃冰箱中避光貯存。A.2.6200μg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：稱取葡萄糖0.02g（精確至0.0001g），用水溶解并定容至100mL容量瓶中，搖勻，置4℃冰箱中避光貯存。A.3儀器A.3.1分光光度計。A.3.2分析天平：感量0.0001g。A.3.3渦旋混合器。A.3.4棕色比色管：25mL。A.3.5移液管：1mL、5mL。A.3.6容量瓶：100mL。A.4測定步驟A.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定7100μg/mL、200μg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別移取上述溶液1mL于25mL比色管中，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，然后立即加入濃硫酸5.0mL（與液面垂直加入，勿接觸試管壁，以便反應(yīng)液充分混合），靜置10min，渦旋混勻，室溫下靜置20min，在490nm波長處測定吸光度。以葡萄糖質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，制定標(biāo)準(zhǔn)曲線。A.4.2測定稱取綠藻多糖樣品0.01g（精確至0.0001g），用水溶解并定容至100mL容量瓶中，搖勻。吸取樣品溶液1.0mL按A4.1步驟操作，測定吸光度。A.4.3結(jié)果計算樣品中總糖含量按下式計算，計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字；m式中：X—樣品中的總糖含量，單位為百分率（%）；m1—從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣品溶液中的總糖含量，單位為微克每毫升(μg/mL）；V—樣品定容的體積，單位為毫升（mL）；m—樣品的質(zhì)量，單位為克（g）。A.5重復(fù)性兩個平行測定結(jié)果的相對偏差不得超過10%，否則重新測定。8鼠李糖占總糖比例的測定B.1一般規(guī)定準(zhǔn)溶液、制劑及制品，應(yīng)按GB/T601-2016、GB/用水應(yīng)符合GB/T6682-2008中三級水的規(guī)定。試驗中所用溶液在未注明用何種溶劑配制時，均B.2鼠李糖占總糖比例的測定B.2.1方法提要B.2.2試劑和溶液三氟乙酸、甲醇、氫氧化鈉、鹽酸、乳糖、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）、二氯甲烷、磷酸二氫鉀、乙腈（色譜純）。B.2.3酸解處理條件（1）酸解。稱取綠藻多糖樣品5.0mg于安瓿瓶中，加入2mol/L三氟乙酸2mL，充氮封管，于95℃下酸解6h。反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸揮干試劑，再加入3mL甲醇旋蒸揮干，重復(fù)多次以盡量去除三氟乙酸殘留，最后將蒸干后的固體用超純水溶解并調(diào)至中性，定容至1mL備用。（2）衍生。將450μL酸解后樣品與50μL10mg/mL乳糖內(nèi)標(biāo)混合均勻后，吸取200μL于試管中，加入420μL0.3mol/L氫氧化鈉溶液、400μLPMP衍生試劑，80℃水浴60min。反應(yīng)結(jié)束后，加入420μL0.3mol/L鹽酸溶液中和。（3）萃取。向衍生后的溶液中加入1mL二氯甲烷，充分振蕩，離心，吸棄下層液體，重復(fù)3次以徹底將PMP除凈。最后，取上層溶液過膜后作為待測液。使用高效液相色譜儀進行單糖組成測定。9B.2.4色譜條件色譜柱為AgilentEclipseXDB-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動相為17%乙腈-83%50mmol/L磷酸鹽緩沖液（pH6.9）；流速1.0mL/min；檢測波長245nm；柱溫25℃;進樣量：10μL。B.2.5分析步驟（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備10mg/mL鼠李糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取0.0100g鼠李糖，溶于1mL水中，置于-20℃冰箱中貯存。1mg/mL鼠李糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：將0.1mL10mg/mL鼠李糖標(biāo)準(zhǔn)溶液與0.9mL水混合均勻，置于-20℃冰箱中貯存。將450μL1mg/mL鼠李糖標(biāo)準(zhǔn)溶液與50μL10mg/mL乳糖內(nèi)標(biāo)混合均勻后，吸取200μL于試管中，加入420μL0.3mol/L氫氧化鈉溶液、400μLPMP衍生試劑，80℃水浴60min。反應(yīng)結(jié)束后，加入420μL0.3mol/L鹽酸溶液中和。萃取處理按照B.2.3中的方法進行。（2）分別對標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測液（B.2.3）進行測定，記錄主峰面積，根據(jù)公式計算出試樣中鼠李糖占總糖的比例。B.2.6結(jié)果計算鼠李糖占總糖的比例按式計算，計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字；