骨髓細(xì)胞微核實驗

關(guān)于骨髓細(xì)胞微核實驗機理：1有絲分裂毒物的作用使個別染色體或帶著絲點的染色體環(huán)和斷片在細(xì)胞分裂后期被滯留在細(xì)胞質(zhì)中2斷片或無著絲點染色體在細(xì)胞分裂后期不能定向移動，從而遺留在細(xì)胞質(zhì)中結(jié)論：

微核試驗?zāi)軝z測化學(xué)或其他物質(zhì)因素誘導(dǎo)產(chǎn)生的染色體完整性改變和染色體分離改變這兩種遺傳學(xué)終點實驗原理第2頁,共20頁，2024年2月25日，星期天無核細(xì)胞紅細(xì)胞有核細(xì)胞中微核難與正常核分葉及核突出物區(qū)別微核實驗第3頁,共20頁，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞的分化成熟過程第4頁,共20頁，2024年2月25日，星期天第5頁,共20頁，2024年2月25日，星期天小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核的形成第6頁,共20頁，2024年2月25日，星期天7環(huán)磷酰胺（CTX）最常用的烷化劑類抗腫瘤藥。在體外無抗腫瘤活性，進(jìn)入體內(nèi)經(jīng)轉(zhuǎn)化、分解，生成酰胺氮芥對腫瘤細(xì)胞有細(xì)胞毒作用。副作用明顯，有惡心、食欲減退、脫發(fā)、白細(xì)胞減少、中毒性膀胱炎、肝功能損傷等。具有顯著的遺傳、生殖毒性：停經(jīng)或精子缺乏，妊娠初期時給予可致畸胎。用藥后24-30小時，骨髓中微核形成達(dá)峰。第7頁,共20頁，2024年2月25日，星期天8結(jié)果示小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞中一個微核示小鼠骨髓正常嗜多染紅細(xì)胞第8頁,共20頁，2024年2月25日，星期天9示小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞中兩個微核第9頁,共20頁，2024年2月25日，星期天10示小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞中多個微核第10頁,共20頁，2024年2月25日，星期天Giemsa染色PCE胞質(zhì)內(nèi)含有核糖體，染色呈灰藍(lán)色；MCN多數(shù)為圓形，嗜色性與核質(zhì)一致，呈紫紅色或藍(lán)紫色NCE的核糖體已消失，被染成淡桔紅色。NCEPCE&MCN第11頁,共20頁，2024年2月25日，星期天實驗?zāi)康挠没熕帲ōh(huán)磷酰胺）制備突變模型觀察小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞（PCE）微核第12頁,共20頁，2024年2月25日，星期天【Animal】小鼠是微核試驗的常規(guī)動物，通常用7～12周齡，體重18～20g的小鼠?！綬eagents】小牛血清Giemsa染液環(huán)磷酰胺實驗動物及試劑第13頁,共20頁，2024年2月25日，星期天實驗分組和染毒方法環(huán)磷酰胺40mg/kg

模型組等體積溶劑對照組染毒方法（30h兩次給藥法）：兩次給受試物間隔24h，第二次給藥后6h取材第14頁,共20頁，2024年2月25日，星期天處死：小鼠頸椎脫臼處死；取股骨：防止出血；取骨髓：小牛血清1滴推片：30度角；晾干：一定要干；固定：甲醇固定10min,需要晾干；染色：Gimesa染液染色（10~15min）沖洗：蒸餾水沖洗，晾干閱片:

觀察微核。

染毒后操作步驟第15頁,共20頁，2024年2月25日，星期天推片方法第16頁,共20頁，2024年2月25日，星期天觀察與計數(shù)：低倍鏡下選擇分布均勻，染色較好的區(qū)域油鏡下觀察計數(shù)多染紅細(xì)胞（PCE）呈灰藍(lán)色，正染紅細(xì)胞（NCE）呈橘黃色。典型的微核多為單個、圓形、邊緣光滑整齊，嗜色性與核質(zhì)一致，呈紫紅色或藍(lán)紫色。計數(shù)1000個PCE中含微核的PCE數(shù)，并且計數(shù)200個細(xì)胞中PCE與NCE的比值。微核率（‰）=含微核PCE細(xì)胞數(shù)PCE細(xì)胞總數(shù)×1000實驗方法和步驟第17頁,共20頁，2024年2月25日，星期天實驗結(jié)果組別動物數(shù)受檢PCE總數(shù)含微核PCE數(shù)微核率陰性對照組模型組第18頁,共20頁，2024年2月25日，星期天結(jié)果分析與評價本試驗中只計數(shù)PCE中微核，微核率以千分率表示.PCE/NCE為評價細(xì)胞毒性的指標(biāo)：正常PCE/NCE比值約為l(正常范圍為0.6～1.2)；如PCE/NCE＜0.1，則表示PCE形成受到嚴(yán)重抑制；如PCE/NCE＜0.05