26.4免疫缺陷病檢驗(yàn)技術(shù)講解

第二十六章

免疫缺陷病及檢驗(yàn)教學(xué)目標(biāo)1.掌握：

免疫缺陷病的概念、AIDS的免疫學(xué)特征及臨床特點(diǎn)（重難點(diǎn)）；體液免疫缺陷及細(xì)胞免疫缺陷的檢測(cè)。2.熟悉：AIDS的致病機(jī)制（難點(diǎn)）。3.了解：原發(fā)性免疫缺陷病的主要特征；吞噬細(xì)胞功能及補(bǔ)體系統(tǒng)的檢測(cè)。知識(shí)目標(biāo)技能目標(biāo)思政-素質(zhì)目標(biāo)熟練進(jìn)行AIDS檢驗(yàn)技術(shù)的操作，正確判讀HIV抗體的檢測(cè)結(jié)果。責(zé)任心、質(zhì)控及生物安全意識(shí)、臨床免疫思維目錄二原發(fā)性免疫缺陷病

三繼發(fā)性免疫缺陷病四免疫缺陷病的檢驗(yàn)技術(shù)一免疫缺陷病概述

免疫缺陷病的概念、分類和共同特點(diǎn)。原發(fā)性免疫缺陷病的概念及主要特征。繼發(fā)性免疫缺陷病的概念及常見誘因。獲得性免疫缺陷綜合征的概念、致病機(jī)制、免疫學(xué)特征和臨床特點(diǎn)。免疫缺陷病的檢驗(yàn)技術(shù)。本章要點(diǎn)引起IDD的原因及臨床表現(xiàn)多種多樣，檢測(cè)方法也具多樣性，主要涉及淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、外周血象檢查、細(xì)胞免疫、體液免疫、吞噬細(xì)胞和補(bǔ)體等方面的檢測(cè)。四免疫缺陷病的檢驗(yàn)技術(shù)免疫缺陷病患者淋巴細(xì)胞數(shù)量正?；虻拖?，吞噬細(xì)胞缺陷患者常伴有中性粒細(xì)胞數(shù)量減少。一、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)和外周血象檢查皮膚試驗(yàn)主要檢測(cè)T細(xì)胞的遲發(fā)型超敏反應(yīng)能力（DTH），如果皮膚試驗(yàn)顯示有DTH能力，表明受試者細(xì)胞免疫功能是完善的。T細(xì)胞功能體外試驗(yàn)通常使用有絲分裂原刺激淋巴細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)化試驗(yàn)來判斷T細(xì)胞的功能。二、T細(xì)胞免疫缺陷病檢驗(yàn)（一）T細(xì)胞功能檢測(cè)通常應(yīng)用CD系統(tǒng)單克隆抗體，使用熒光顯微技術(shù)或流式細(xì)胞術(shù)對(duì)T細(xì)胞總數(shù)和亞群進(jìn)行檢測(cè)。最常檢測(cè)的CD標(biāo)志為CD3、CD4、CD8、CD25等。（二）T細(xì)胞數(shù)量及亞群檢測(cè)IgG、IgM和IgA可采用免疫比濁法和單向免疫擴(kuò)散法。IgD和IgE由于含量甚微，可采用靈敏度較高的RIA和ELISA等技術(shù)測(cè)定。IgG亞類可用ELISA和免疫電泳法測(cè)定。三、B細(xì)胞免疫缺陷病檢驗(yàn)（一）血清Ig的測(cè)定除嬰兒和AB型血外，其它人均有1：8（抗A）或1：4（抗B）或更高的天然抗體滴度，這種天然抗體屬IgM型。性聯(lián)無丙種球蛋白血癥、重癥聯(lián)合免疫缺陷和選擇性IgM缺陷癥患者可用此法進(jìn)行判定。（二）同種血細(xì)胞凝集素（IgM）效價(jià)測(cè)定正常人接種疫苗后5～7天可產(chǎn)生特異性抗體（IgM），若再次免疫會(huì)使抗體滴度增高（IgG）。常用的抗原為傷寒菌苗和白喉類毒素，可在注射后2～4周測(cè)定抗體的滴度，了解抗體的反應(yīng)性。（三）特異性抗體產(chǎn)生能力測(cè)定正常人包括新生兒，均可在注入噬菌體后5天內(nèi)將其全部清除?？贵w形成缺陷者，清除噬菌體的時(shí)間則明顯延長。（四）噬菌體試驗(yàn)SmIg是B細(xì)胞表面的特征性標(biāo)志，檢測(cè)SmIg不但可以反映B細(xì)胞的數(shù)量，還可以根據(jù)SmIg的類別判斷B細(xì)胞的成熟情況。所有體液免疫缺陷者都有不同程度的B細(xì)胞數(shù)量或成熟比例方面的異常。（五）B細(xì)胞表面膜免疫球蛋白的檢測(cè)B細(xì)胞表面存在著CD10、CD19、CD20、CD22等抗原，這些CD抗原表達(dá)在B細(xì)胞發(fā)育成熟的不同階段，檢測(cè)這些B細(xì)胞表面標(biāo)志可以了解B細(xì)胞數(shù)量、亞型及分化情況。（六）CD抗原檢測(cè)當(dāng)成年人外周血中性粒細(xì)胞＜1.8×109/L，兒童＜1.5×109/L，嬰兒＜1.0×109/L時(shí)，若能排除外因的影響，應(yīng)考慮遺傳因素的作用。四、吞噬細(xì)胞免疫缺陷病檢驗(yàn)（一）中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)包括體內(nèi)試驗(yàn)與體外試驗(yàn)。體外試驗(yàn)如Boyden小室法和瓊脂糖平板法，可用于判斷白細(xì)胞的趨化功能，對(duì)吞噬細(xì)胞功能缺陷、家族性白細(xì)胞趨化缺陷癥等有診斷價(jià)值。（二）趨化功能檢測(cè)將白細(xì)胞懸液與一定量的細(xì)菌或膠乳粒子溫育一定時(shí)間后，取樣涂片、染色、鏡檢，根據(jù)其吞噬和殺菌情況判斷白細(xì)胞的功能。慢性肉芽腫病患者由于吞噬細(xì)胞缺少過氧化物酶而無法殺菌，故其吞噬率基本正常，但殺菌率顯著降低。（三）吞噬和殺傷功能檢測(cè)是一種簡(jiǎn)便、敏感的檢測(cè)吞噬細(xì)胞還原殺傷能力的試驗(yàn)?？捎糜跈z測(cè)兒童慢性肉芽腫病和嚴(yán)重的6-磷酸葡萄糖脫氫酶缺乏癥。（四）NBT還原試驗(yàn)總補(bǔ)體活性測(cè)定單個(gè)補(bǔ)體組分的測(cè)定五、補(bǔ)體免疫缺陷病檢驗(yàn)常用ELISA法檢測(cè)HIV的核心抗原p24。p24出現(xiàn)于急性感染期和AIDS晚期，其定量檢測(cè)可作為早期或晚期病毒量的間接指標(biāo)。在潛伏期，p24檢測(cè)常為陰性。六、AIDS檢驗(yàn)技術(shù)（一）HIV抗原檢測(cè)HIV感染后2～3月可出現(xiàn)抗體，并可持續(xù)終身，此為艾滋病的常規(guī)檢測(cè)指標(biāo)。初篩試驗(yàn)

ELISA法膠乳凝集法膠體金免疫層析法確認(rèn)試驗(yàn)免疫印跡法

（二）HIV抗體檢測(cè)

ELISA法檢測(cè)HIV抗體初篩最基本，最可靠的手段ELISA試劑敏感性和特異性越來越高與抗原檢測(cè)同時(shí)進(jìn)行

HIV抗體快速檢測(cè)常用的方法有免疫斑點(diǎn)法、免疫層析法、硒標(biāo)記法、金標(biāo)記法和凝集試驗(yàn)等。

HIV抗體確認(rèn)試驗(yàn)確認(rèn)試驗(yàn)可使用免疫印跡法、條帶免疫法及免疫熒光法。目前以免疫印跡法（WB試驗(yàn)）最為常用。確認(rèn)試劑必須經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)。HIV抗體確認(rèn)試驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)HIV抗體陽性至少有兩條膜帶（gp41/gp120/gp160）或至少一條膜帶與p24帶同時(shí)出現(xiàn)；HIV抗體陰性無HIV抗體特異性條帶出現(xiàn)；HIV抗體可疑出現(xiàn)HIV特異性條帶，但帶型不足以確認(rèn)陽性者。CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)是反映HIV感染患者免疫系統(tǒng)損害狀態(tài)的最明確指標(biāo)。當(dāng)CD4+T細(xì)胞低于500/μl，則易機(jī)會(huì)性感染；低于200/μl，則發(fā)生AIDS。

（三）T細(xì)胞計(jì)數(shù)小結(jié)免疫缺陷病是免疫系統(tǒng)先天發(fā)育不全或后天損傷所致的疾病，分為原發(fā)性免疫缺陷性疾病和繼發(fā)性免疫缺陷病兩大類。免疫缺陷病主要臨床表現(xiàn)有反復(fù)感染；高發(fā)惡性腫瘤和自身免疫?。挥幸欢ㄟz傳傾向。AIDS是最常見的繼發(fā)性免疫缺陷病。HIV主要侵犯CD4+T細(xì)胞以及表達(dá)CD4分子的巨噬細(xì)